Guía de Prácticas de Laboratorio de Microbiología (Urocultivo) - Universidad del Azuay 2024 PDF

Universidad del Azuay - LOGOS CON ALMA **FACULTAD DE MEDICINA** **Guía de prácticas de laboratorio de Microbiología** **Practica No.** 7 **Tema:** Urocultivo **Sesión:** 1 de 2 **INTRODUCCIÓN** En una persona sana el tracto urinario está libre de microorganismos. Únicamente existe microbiota...

Universidad del Azuay - LOGOS CON ALMA **FACULTAD DE MEDICINA** **Guía de prácticas de laboratorio de Microbiología** **Practica No.** 7 **Tema:** Urocultivo **Sesión:** 1 de 2 **INTRODUCCIÓN** En una persona sana el tracto urinario está libre de microorganismos. Únicamente existe microbiota normal de forma permanente en la mucosa de la uretra. Una infección en las vías urinarias es la aparición de cantidades elevadas de bacterias en la orina. Estas infecciones son muy frecuentes y marcadamente resistentes al tratamiento; se consideran peligrosas por evolucionar a enfermedades renales graves como la pielonefritis, pudiendo diseminarse al torrente sanguíneo. La bacteriuria, puede ser asintomática o presentarse como enfermedad aguda o crónica. Las infecciones agudas, generalmente son producidas por un solo microorganismo, mientras que en las crónicas pueden intervenir varias bacterias**.** Las infecciones del tracto urinario están causadas generalmente por bacterias del microbiota intestinal que, ascendiendo por la uretra, alcanzan la vejiga urinaria y en algunos casos progresan afectando a los uréteres y los riñones. Las mujeres tienden a contraerlas con más frecuencia debido a que su uretra es más corta y está más cerca del ano que en los hombres. Debido a esto, las mujeres tienen mayor probabilidad de contraer una infección después de la actividad sexual o al usar un diafragma para el control de la natalidad. La menopausia también aumenta el riesgo de una infección urinaria. Los microorganismos que con mayor frecuencia colonizan estas vías son: *Escherichia coli, Proteus, Enterobacter, Klebsiella, Pseudomonas, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus* y *Streptococcus pyogenes.* Ocasionalmente pueden encontrarse *Neisseria gonorrhoeae, Candida albicans* y otros microorganismos oportunistas. **Características de la orina** [Físicas] En condiciones normales, **la orina es de color amarillo claro** y en función de su concentración (contenido de agua) puede adoptar una coloración amarillo claro (si está diluida) o amarillo oscuro (si está concentrada). La orina normal no suele contener sustancias químicas ni elementos anormales (células, cristales) o sólo trazas de ellos. Así, la orina puede tener una** apariencia turbia si en ella hay células** (leucocitos, hematíes) o **cristales**. O también si se están tomando ciertos medicamentos ya que la orina podría verse teñida por ellos. [Químicas] En el análisis de orina con tira reactiva se incluyen varios parámetros químicos. Dos de ellos son la esterasa (o esterasa leucocitaria) y los nitritos. La esterasa es una proteína que se encuentra en los glóbulos blancos o leucocitos y si éstos están en la orina, podemos detectar la presencia de esterasa con la tira reactiva. La presencia de **nitritos** indica la presencia de bacterias en la orina y, en consecuencia, una **probable infección** de las vías urinarias. La introducción de una tira reactiva en la muestra de orina hace que ésta cambie a color violeta ante la presencia de esterasa y de nitritos, poniéndonos tras la pista de una infección urinaria. **Toma de muestra.** La técnica más utilizada para la recogida de muestras de orina es la llamada **técnica del chorro medio**. Esta técnica, que vamos a describir seguidamente, es la correcta para establecer conclusiones válidas acerca del diagnóstico de un paciente. **TÉCNICA DEL CHORRO MEDIO** Se procede primero al lavado de las manos. Seguidamente, se lava con agua y jabón la zona genital, se enjuaga con abundante agua y se seca bien. **[Recogida del chorro medio: ]** Se empieza a orinar y se recoge en el bote solo la muestra del "chorro medio", es decir, **NO SE DEBE RECOGER NI LA PRIMERA NI LA ÚLTIMA PARTE DEL CHORRO DE ORINA**. Se tapa bien el bote, se rotula y se lleva al laboratorio lo más pronto posible. Si van a transcurrir más de dos horas hasta su llegada al laboratorio el transporte debe realizarse manteniendo la muestra en frío. **Urocultivo** El examen bacteriológico permite, en caso de infección de las vías urinarias, identificar el agente patógeno responsable. La recolección de orina para un urocultivo tiene exigencias mayores que para un análisis simple. Se deben utilizar envases estériles para evitar la contaminación de la muestra. El urocultivo se realiza mediante la siembra de una pequeña cantidad de orina homogeneizada, lo que permite la cuantificación de las eventuales bacterias presentes. Las bacterias se contabilizan utilizando el criterio de «UFC/ml», porque de acuerdo a esta técnica se considera que cada bacteria en la muestra diluida dará origen a una colonia. El conteo de las mismas se efectúa luego de un período de incubación de 24 horas a 37º C, para permitir la multiplicación bacteriana. Se considera generalmente que un conteo superior o igual a 10^5^ UFC /ml es altamente indicativo de infección bacteriana, mientras que recuentos menores a 10^3^ UFC /ml no se consideran relevantes. Los conteos intermedios se consideran dudosos y exigen la obtención de una nueva muestra y repetición del urocultivo. La muestra de orina se siembra en uno o más medios de cultivo específicos, generalmente MacConkey y CLED, que permiten el crecimiento de bacterias Gram negativas y Gram positivas, así como de hongos, en el 99% de las veces del género Cándida. En una segunda fase del examen, las bacterias que crecieron en la etapa de aislamiento son incubadas en los medios adecuados para su identificación y la susceptibilidad a los antibióticos, también llamado antibiograma. Los resultados representan importantes guías para el tratamiento médico individual, y colectivamente para la evaluación epidemiológica. **Examen microscópico** Mediante el examen al microscopio se comprueba la presencia de células epiteliales renales y de elementos de la sangre que, presentes por lo común en pequeño número, pueden aumentar en caso de enfermedad. En el **sedimento urinario** se investiga la **presencia de células** (incluyendo glóbulos blancos y glóbulos rojos), de cristales, de cilindros y de bacterias. Los cristales se deben a la cristalización de algunas sustancias que se encuentran disueltas en la orina, principalmente sales. Los cilindros son como huellas de los túbulos renales que se crean cuando las células urinarias, las proteínas o ambas precipitan en los túbulos renales y se eliminan en la orina. La presencia de **cristales y de cilindros** puede orientarnos a enfermedades renales o de la vía urinaria. Las células epiteliales, normalmente ausentes, proceden de la exfoliación de las vías urinarias y son indicativas de inflamación de las vías renales. Los leucocitos están presentes en condiciones fisiológicas, pero aumentan en caso de infecciones de las vías urinarias (como la pielonefritis) o de las vías genitales (epididimitis en el hombre, salpingitis en la mujer). La presencia de un número excesivo de leucocitos en la orina recibe el nombre de leucocituria. Los glóbulos rojos están presentes en la orina en caso de cistitis, cálculos o glomerulonefritis, así como en la tuberculosis y en las neoplasias de las vías urinarias. **RESULTADOS DE APRENDIZAJE** Conocer e identificar las bacterias que con mayor frecuencia ocasionan Infecciones del tracto urinario. Conocer los medios de cultivo, técnica de siembra y técnicas para el diagnóstico de las Infecciones Urinarias. **MATERIALES / REACTIVOS.** Muestra de orina tomada en frasco estéril Asa bacteriológica Portaobjetos Cubreobjetos Centrífuga Microscopio Incubadora Mechero Cajas de Petri desechables Pipetas de 1 ml estériles Tubo de ensayo conteniendo 9 ml de agua de peptona estéril Compact Dry Tc Agar EMB Agar Sangre (AS) Agar McConkey Agar Manitol Salado (AMS) Agar Cetrimide (AC) Agar CLED **METODOLOGÍA.** 1. Revisar las características físicas y químicas de la orina. 2. Urocultivo. El urocultivo incluye: 1\. Aislamiento e identificación de microorganismos 2\. Cuenta viable 3\. Antibiograma para los gérmenes patógenos aislados e identificados. Práctica 10. **1) Aislamiento e identificación de los microorganismos.** a\. Mezclar homogéneamente el frasco con la muestra de orina y depositar aproximadamente entre 5 y 10 ml de orina en un tubo estéril para centrifuga. b\. Centrifugar durante 5 minutos a 3500 rpm c\. Se desecha el sobrenadante dejando solo unas gotas de orina residual para emulsionar el sedimento. d\. Con la suspensión del sedimento se lleva a cabo el estudio microscópico directo, tomando una gota del sedimento que se deposita en un portaobjetos, colocándole un cubreobjetos. e\. Observarlo al microscopio, e identificar lo observado. f\. Mediante un asa bacteriológica se hacen siembras por aislamiento en estrías del sedimento, obtenido al centrifugar una muestra de la orina colocada en tubo estéril y centrifugada. La siembra se realiza en los siguientes medios de cultivo: A. Sangre, A. MacConkey, A. Cetrimide, A. Manitol, EMB y CLED g\. Los medios inoculados se incuban a 37°C entre 24 y 48 horas. h\. Preparar frotis para realizar una tinción de Gram para el estudio de morfología microscópica. h\. Observar los diversos medios. Realizar pruebas bioquímicas para confirmación de la especie bacteriana. Sesión 2. **2) Cuenta viable** a\. Realizar diluciones de la orina de la siguiente manera: i\. Disponer de 5 tubos estériles conteniendo 9 ml de agua de peptona. La cantidad de tubos utilizada dependerá de la carga bacteriana observada en el examen microscópico del sedimento urinario. ii\. Tomar 1 ml, de la orina problema con una pipeta estéril, y agregarlo al tubo N°1 (dilución 1:10), agitar el tubo y tomar de este 1 ml., para pasarlo al tubo N°2 (dil: 1:100) realizar el mismo paso las veces que sea necesario rotulando el tubo con la dilución correspondiente. Recuerde que el número de diluciones dependerá de la carga bacteriana. b\. Rotular cada placa Compact Dry TC. c\. Siembra. Inocular 1 ml de la dilución correspondiente en el centro de la placa Compact Dry Tc. d\. Incubar las cajas a 37°C durante 48 horas. e\. Contar el número de colonias desarrolladas, para esto seleccionar para su lectura, la placa que muestre entre 30 a 300 colonias. Sesión 2. f\. Reportar la cuenta bacteriana de la siguiente manera: Número de colonias contadas X el factor de dilución de la caja en la que se observa y cuentan las colonias bacterianas = Unidades Formadoras de Colonias por ml. (UFC/ml)