Guía de prácticas de laboratorio de Microbiología - Universidad del Azuay PDF

Universidad del Azuay - LOGOS CON ALMA **FACULTAD DE MEDICINA** **Guía de prácticas de laboratorio de Microbiología** **Practica No.** 7 **Tema:** Urocultivo **Sesión:** Sesión 2. **INTRODUCCIÓN** El propósito del análisis microbiológico de una muestra de orina es en primer lugar determinar s...

Universidad del Azuay - LOGOS CON ALMA **FACULTAD DE MEDICINA** **Guía de prácticas de laboratorio de Microbiología** **Practica No.** 7 **Tema:** Urocultivo **Sesión:** Sesión 2. **INTRODUCCIÓN** El propósito del análisis microbiológico de una muestra de orina es en primer lugar determinar si existe una infección y, si existe, identificar el microorganismo que la produce. Para determinar si existe infección debemos hacer un recuento del número de microorganismos que hay por mL de orina. Si el número de microorganismos es: \> 10^5^ /mL hay infección. Para determinar el microorganismo que produce la infección hay que hacer una identificación del microorganismo que previamente hemos aislado. **Identificación** Revisar los resultados obtenidos en los diferentes medios en los que se hicieron cultivos, y determinar las características de crecimiento en dichos medios. **Agar MacConkey.** Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Neutro. Si el microorganismo fermenta la lactosa el pH del medio disminuye y el indicador vira a rosa-rojo, a diferencia de aquellas bacterias que no fermenta la lactosa utilizan la peptona en su lugar, formando amoniaco, lo que incrementa el pH del medio dando origen a colonias blancas o incoloras y el medio igualmente cambia de color. \*E. coli (izquierda) \* Klebsiella Pneumoniae (derecha) **Colonias** **Microorganismo** ------------------------------------------- -------------------------------------- Incoloras, transparentes Salmonella, Shigella y otros. Grandes, rojas, halo turbio Escherichia coli. Grandes rosadas mucosas Enterobacter, Klebsiella. Diminutas, de crecimiento aislado, opacas Enterococos, Estafilococos, y otros.  Si crecen colonias rosas-rojas el microorganismo es lactosa positiva. Si crecen colonias incoloras el microorganismo es lactosa negativa. **Agar EMB.** Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Colonias Microorganismos ------------------------------------------------------------------------------ ----------------------------------- Transparentes de color ambar Salmonella, Shigella Verdosas con brillo metálico a la luz reflejada, con el centro negroazulado. Escherichia coli. Mas grandes que las E. coli, mucosas, con el centro pardo-grisaceo. Enterobacter, Klebsiella y otros. Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico. Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio, incoloras. **Agar Sangre.**  Se usa para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de Virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee: - *alfa*: halos verdosos (oxidación de la hemoglobina de los glóbulos rojos a metahemoglobina en el medio) - *beta*: halos incoloros (hemolisis total) - *gamma*: inexistencia de halos (sin hemolisis) **Agar Manitol Salado** Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Fenol. Si el microorganismo fermenta el manitol el pH del medio disminuye y el indicador vira a amarillo. Colonias Microorganismo ------------------------------------------------- ----------------------------------------------------- Con halo amarillo luminoso, crecimiento intenso Manitol positivo: Staphylococcus aureus. Sin cambio de color, crecimiento débil. Manitol negativo: Staphylococcus epidermis y otros. Si crecen colonias amarillas el microorganismo es manitol positivo Si crecen colonias incoloras el microorganismo es manitol negativo Fundamento: **Agar Cetrimide.** El agar Cetrimide se fundamenta en la capacidad que tiene el medio para favorecer el crecimiento de *P. aeruginosa*, estimular la producción de sus pigmentos y a su vez inhibir el crecimiento de otros microorganismos. La Cetrimide es un detergente catiónico que actúa como agente inhibidor, libera el nitrógeno y el fósforo de las células de casi toda la flora acompañante, aunque inhibe también algunas especies de Pseudomonas. La observación de colonias redondas, lisas, de bordes regulares, con producción de pigmentos azul-verdoso, verde, marrón o rojizo, más la emisión de olor frutal (aminoacetofenona), es un resultado presuntivo de la presencia de esta bacteria en dicha muestra. Por otra parte, es indicativo de *P. aeruginosa* la observación de un pigmento amarillo-verdoso brillante sobre las colonias cuando la placa es expuesta a luz ultravioleta. Agar cetrimida con fluorescencia. **AGAR CLED** **RESULTADOS DE APRENDIZAJE** Identificar las diferentes condiciones de crecimiento de bacterias que pueden estar presentes en muestras de orina, en los diferentes medios de cultivo utilizados. **MATERIALES / REACTIVOS** Portaobjetos Cubreobjetos Asas de siembra Colorantes de Gram. **METODOLOGÍA.** 1. Revisar los resultados en los diferentes medios de cultivo empleados. 2. Realizar tinción de Gram a las colonias de interés. 3. Repicar las colonias de interés. 4. Realizar el recuento de bacterias. a. b. Número de colonias contadas X el factor de dilución de la caja en la que se observa y cuentan las colonias bacterianas = Unidades Formadoras de Colonias por ml. (UFC/ml). **Refuerzo académico.** 1. **Defina que es un Urocultivo.** 2. **Indique si es falso o verdadero.** a. b. c. d. e. f. g. h. 3. **Al revisar los resultados de los cultivos encontramos los siguientes resultados:** **Medio de cultivo** **Observación** ---------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- **MacConkey** Colonias Rojas, con halo que sugiere la presencia de Salmonella. Colonias Rojas, con halo que sugiere la presencia de E. Coli. Colonias rosadas mucosas, y aumento de pH en el medio evidencia presencia de Klebsiella. **EMB** Este medio evita el crecimiento de Salmonella, por esta razón no se existe crecimiento en el medio. Bacterias verdosas con brillo metálico, sugieren presencia de E.coli **Manitol** Crecimiento de bacterias en abundancia y el medio cambia de tonalidad por la fermentación del manitol, que evidencia la presencia de S. aureus. Crecimiento de bacterias en abundancia y el medio cambia de tonalidad por la fermentación del manitol, que evidencia la presencia de S. epidermis **Cetrimide** Colonias azuladas sin brillo indican la presencia de E. Coli. Crecimiento de colonias redondas, lisas, de bordes regulares, con producción de pigmentos azul-verdoso, verde, marrón o rojizo sugieren la presencia de Pseudomona aeruginosa. **CLED** Colonias de color azul brillante igual al color del medio que sugiere la presencia de S. aureus. Colonias de color amarillo o rojizas con cambio del color del medio a rosa o rojo pálido que sugiere la presencia de E. Coli