Obecná mikrobiologie II Praktika 2024 PDF

Obecná mikrobiologie II praktika 2. ročník všeobecného lékařství Vyšetřovací proces v mikrobiologii Kolik fází má vyšetřovací proces v mikrobiologii? Co patří do preanalytické fáze? Fáze vyšetřovacího procesu v mikrobiologii  Preanalytická fáze Indikace vyšetření...

Obecná mikrobiologie II praktika 2. ročník všeobecného lékařství Vyšetřovací proces v mikrobiologii Kolik fází má vyšetřovací proces v mikrobiologii? Co patří do preanalytické fáze? Fáze vyšetřovacího procesu v mikrobiologii  Preanalytická fáze Indikace vyšetření Odběr materiálu Uchování vzorku Transport do laboratoře Příjem vzorku v laboratoři Rozhodnutí, jak zpracovat  Vlastní analýza Zpracování vzorku Uzavření vyšetření (zhodnocení nálezů…)  Postanalytická fáze Interpretace výsledku v kontextu ostatních výsledků a celkového stavu pacienta (komentáře do výsledku, konzultace s klinikem …) Odeslání výsledku Preanalytická fáze Indikace Laboratoř Odběr vzorku Transport Příjem Předání do vzorku laboratoře Příprava k vyšetření Vyšetření Postanalytická fáze („analýza“) Mikroskopie Kultivace PCR Výsledek Sérologie kontrola Stanovení citlivosti verifikace … odeslání Přenos dat LIS – NIS  Indikace mikrobiologického vyšetření Mikrobiologické vyšetření vždy indikuje lékař Zásadní otázka při indikaci: Ovlivní výsledek vyšetření další postup (léčbu, diagnostiku…)? Rozhodování: vyšetření ano x ne jaké vyšetření forma odběru materiálu (invazivní odběr – dobře rozhodnout, nelze opakovat) hledisko ekonomické, zátěž pacienta, personálu... Žádanka o vyšetření (průvodka) Uveďte, jaký význam má žádanka na mikrobiologické vyšetření.  Žádanka o vyšetření (průvodka) Význam:  lékařský (údaje o pacientovi)  ekonomický („objednávka služby“, doklad pro proplacení)  právní (součást zdravotnické dokumentace) Uvedení údajů není formalita  Co musí žádanka obsahovat identifikace pacienta (jméno, rodné číslo) identifikace plátce (zdravotní pojišťovna…) identifikace odesílajícího pracoviště údaje o materiálu datum a čas odběru, druh materiálu vč. podrobností – lokalizace apod. druh požadovaného vyšetření diagnóza ATB léčba, alergie … důležité údaje z anamnézy (pobyt v cizině, pracovní apod.) další důležité informace Odběr a transport materiálu na mikrobiologické vyšetření Pro získání správného výsledku mikrobiologického vyšetření je zapotřebí: správným způsobem odebrat vhodný biologický materiál správně jej uchovat a transportovat do mikrobiologické laboratoře Informace ohledně odběru a transportu materiálu v laboratorní příručce Odběr materiálu na mikrobiologické vyšetření Vysvětlete, co je klinická a co technická validita vzorku materiálu na mikrobiologické vyšetření.  Odběr materiálu na mikrobiologické vyšetření klinická validita z místa, kde očekáváme přítomnost mikroba technická validita ve správný čas (před podáním ATB) správným způsobem (asepticky) do správné odběrové soupravy některé odběry materiálu se provádí opakovaně – zvýší se pravděpodobnost záchytu infekčního agens Odběrové soupravy pro mikrobiologické vyšetření komerčně vyráběné soupravy jednorázové a sterilní různé typy souprav pro jednotlivé materiály mohou obsahovat různá transportní média  Stěry a výtěry na bakteriologické a mykologické vyšetření sterilní tampon na plastové tyčince či na drátku + sterilní zkumavka s polotuhou transportní půdou uchování a transport při pokojové teplotě www.brainstudy.info/ Stěry a výtěry na PCR vyšetření sterilní tampon na plastové tyčince či na drátku + zkumavka s tekutým transportním médiem skladování a transport při 2–8 °C  Konkrétní typy stěrů a výtěrů Výtěr z krku - sterilním tamponem setřít povrch obou tonzil a zadní části pharyngu https://www.sgh.com ýtěr z nosu těr okraje nosního vchodu a nosního sekretu z dutiny nosní ouze k detekci Staphylococcus aureus a MRSA Výtěr z nosohltanu - lze provést přes nos i přes dutinu ústní - stěr zadní stěny nosohltanu https://www.rapidmicrobiology.com https://images.myupchar.com  Konkrétní typy stěrů a výtěrů Výtěr z urethry - na bakteriologické vyšetření - tampon s transportním médiem - na PCR (chlamydie) - speciální tekuté médium - na mykoplazmata, ureaplazmata - speciální odběrová souprava Výtěr z rekta - šroubovitým pohybem do hloubky 3-4 cm, na střevní patogeny - vyšetření na Campylobacter sp. vyznačit na žádance Výtěr z pochvy a děložního hrdla za pomoci gynekologických zrcadel  Specifika odběru na kultivaci gonokoků Neisseria gonorrhoeae - extrémně citlivý patogen! výtěry z pochvy, urethry, cervixu, rekta, krku, oční spojivky (novorozenci) vždy v transportní půdě, odběrová souprava nesmí být studená, vyznačit na žádance kultivaci na GO, okamžitý transport při pokojové teplotě rovněž plotny na kultivaci musí být vytemperované Odběr moče na mikrobiologické vyšetření Jak poučíte pacienta ohledně odběru moče ? Jak se uchovává moč, pokud není možné ji okamžitě transportovat do laboratoře?  Odběr moče do sterilní zkumavky (běžně se používá užší zkumavka s červeným víčkem) před nasazením ATB léčby po řádném omytí zevního ústí uretry střední proud moče spontánním vymočením Moč je ideální pomnožovací médium – transportovat do 2 hodin! Pokud to nelze, uchovat v chladničkové teplotě Uricult - kultivační půda přímo v odběrové soupravě - nedává se do ledničky  Další typy odběrů moče jednorázové vycévkování z permanentního močového katetru riziko kontaminace, kolonizace katetru jen není-li jiná možnost z nefrostomie suprapubická punkce adhezní sáčky u kojenců a batolat Odběr materiálu z dolních cest dýchacích Jak poučíte pacienta ohledně odběru sputa? Co je to BAL? Odběr materiálu z dolních cest dýchacích sputum ráno před hygienou DÚ nebo jen vyčištění kartáčkem bez pasty hluboké odkašlání do sputovky pacienti se zubní protézou – po jejím vynětí a výplachu fyziologickým r. indukované sputum (provokace expektorace) pacient inhaluje fyziologický roztok a poté odkašle do sputovky bronchoalveolární laváž (BAL) tracheální aspirát  Bronchoalveolární laváž (BAL)  metoda umožňující získat bronchalveolární sekret a v něm buněčné a nebuněčné složky z DCD a alveolů https://ose.zshk.cz/media.aspx?id=V4004 Odběr materiálu, u kterého očekáváme přítomnost anaerobů Kdy očekáváte v materiálu přítomnost anaerobů? Jak provedete odběr tekutého materiálu? Jakou odběrovou soupravu zvolíte pro stěr či výtěr? Odběr materiálu, u kterého očekáváme přítomnost anaerobů přednostně tekutý materiál (hnis, výpotek, punktát, žluč) do stříkačky s kombi zátkou, desinfekce místa vpichu výtěr z hloubky rány – dvojvýtěrovka s transportním médiem materiál odebírat před nasazením ATB na žádance požadavek na aerobní i anaerobní kultivaci  Odběr tkáně za aseptických podmínek do sterilní nádobky bez fixačního či konzervačního roztoku rychlý transport  Odběr likvoru odběr asepticky lumbální punkcí nebo z drénů 2–3 ml do sterilní zkumavky s pevným uzávěrem možnost odběru a transportu v hemokultivační lahvičce transport ihned případně uchování při pokojové teplotě Lumbální punkce (mojemedicina.cz) Odběr krve na hemokultivaci Kdy indikujete odběr hemokultur? Do jaké odběrové soupravy na naberete krev na hemokultivaci? Na co je třeba zvláště dbát při odběru hemokultur?  Odběr krve na hemokultivaci Různé strategie podle diagnózy odběry z různých míst s časovým odstupem odběr z jedné venepunkce do několika lahviček najednou Zásadní je odběr dostatečného objemu krve Obecně platí: odběr při vzestupu tělesné teploty před nasazením ATB 2–3 sady (sada = lahvička pro aerobní + anaerobní kultivaci) v každé lahvičce 5–10 ml krve odběr po dezinfekci kůže a dezinfekci zátky na lahvičce odběr z periferní žíly venepunkcí, nikoliv z katétru Hemokultivační lahvičky různé typy lahviček podle typu přístroje obsahují tekutou kultivační půdu a antikoagulační činidlo https://slideplayer.cz/slide/15961505/  Odběr hemokultury 1 4 2 5 3 6 Zdroj: https://www.youtube.com/watch? Hemokultivační přístroj Odběr krve na sérologické vyšetření odběr za aseptických podmínek venepunkcí 5–10 ml srážlivé krve transport ve sterilní zkumavce s pevným uzávěrem uchování v chladničkové teplotě Pro sledování dynamiky protilátek opakovaný odběr po 1–3 týdnech  Odběr stolice širší nádobka s lopatičkou - nemusí být sterilní Indikace:  parazitologické vyšetření  virologické vyšetření - průkaz antigenu  průkaz toxinu Clostridium difficile ! na bakteriologické vyšetření se provádí výtěr z rekta! Odběry pro mykologická vyšetření šupiny kůže z okraje ložiska sterilním skalpelem do sterilní zkumavky nehty – seškrab sterilním skalpelem z okraje ložiska mokvající plochy – stěr do transportní půdy  Odběr katetru Pouze cévní katetry Močové katetry se nevyšetřují Odstřižení konce katetru cca 5 cm Transport ve sterilní zkumavce nasucho https://www.semanticscholar.org Uchování materiálu na mikrobiologické vyšetření Které materiály budete uchovávat při pokojové teplotě? Které materiály budete uchovávat v chladničce?  Uchování materiálu načasovat odběr tak, aby transport byl co nejrychlejší pokud nelze, uchovávat předepsaným způsobem V chladničkové teplotě Při pokojové teplotě (4–8 °C) Moč Stěry a výtěry v Stolice na průkaz toxinu C. transportní půdě difficile Punktáty Krev na sérologické Hemokultury vyšetření Likvor Pitevní materiál Transport materiálu do laboratoře fyzická osoba (sanitář) svozová služba potrubní pošta https://synlabianer.cz/  Příjem vzorku v laboratoři kontrola údajů na vzorku a na žádance očíslování vzorku protokolovým číslem a zápis do LISu předání vzorku ke zpracování Mikrobiologická diagnostika Co je cílem mikrobiologické diagnostiky? Vysvětlete pojmy přímý a nepřímý průkaz.  Mikrobiologická diagnostika Cíl: prokázat etiologické agens infekce = zjistit, který mikrob je příčinou onemocnění zjistit, jaká by byla vhodná antimikrobiální léčba Metody: přímý průkaz prokážeme mikroba nebo jeho části v makroorganismu nepřímý průkaz prokážeme reakci organismu na určitého mikroba  Základní schéma mikrobiologické diagnostiky Přímý průkaz Nepřímý průkaz Mikroskopie Kultivace Průkaz Průkaz antigenů specifických Ab Průkaz NK Detekce buněčné Pokus na zvířeti imunity Identifikace a stanovení citlivosti Schéma mikrobiologické diagnostiky – Přímý průkaz Přímý průkaz  Průkaz celého mikroba Mikroskopické vyšetření Viz různá mikroskopická barvení, techniky, … Kultivační vyšetření Kultivace bakterií a hub, tkáňové kultury u virů, … → identifikace a stanovení citlivosti  Průkaz mikrobiálních složek Průkaz antigenů Povrchové struktury (buněčná stěna, cytoplasmatická membrána, bičíky, pouzdra, extracelulární … – protein, polysacharid, …) Intracelulární struktury (i endotoxin G- bakterií) Exotoxiny, enzymy … Průkaz NK Molekulární metody (PCR, …) Schéma mikrobiologické diagnostiky – Nepřímý průkaz Nepřímý průkaz = detekce reakce organismu na přítomnost mikroba  Průkaz specifických Ab Různé sérologické metody Celkové specifické Ig Ig ve třídách (IgG, IgM, IgA,…)  Detekce buněčné imunity Speciální techniky