Techniques de prélèvement et analyses PDF

Techniques de prélèvement et analyses Sang  1. Asepsie de la peau 2. Désinfection des Prélèvements...

Techniques de prélèvement et analyses Sang  1. Asepsie de la peau 2. Désinfection des Prélèvements opercules des flacons Avant antibiothérapie ! 3. Relier adaptateur au 4. Pratiquer la ponction Maximum d’asepsie dispositif de prélèvement veineuse de l’aiguille ▪ Préparation chirurgicale de la zone ▪ Aiguille stérile → cathéter ▪ Désinfection des bouchons des flacons 5. Placer adaptateur sur le 6. Identifier flacon correctement les flacons Quand ↗ T°, 3x/24h (> 20min entre chaque) 3 x 2 flacons – 5ml/flacon (moins si petit animal) ▪ 1er → pour aérobiose ▪ 2ème → pour anaérobiose Composition Incubation Si flacon + Bouillon TS ou cœur-cervelle Automate Croissance µbienne → CO2 produit + anticoagulant aéro / anaé Mélange constant milieu + sang Senseur dans le fond du flacon → Change de couleur avec ↗ CO2 + inhibiteur d’antibiotiques Lecture toutes les 10 minutes Analyse colorimétrique toutes les 10’ + réducteur dans le flacon « anaérobie » Alerte quand flacon + → Alarme si changement détecté Bactéries fréquentes Enterobacteriaceae CG + BG –, R. sels biliaires, non- fermentant Escherichia coli Enterococcus sp. Pseudomonas aeruginosa Salmonella enterica Saphylococcus aureus et intermedius Klebsiella pneumoniae Anaérobie stricte Proteus sp. Streptococcus β-hémolytiques Clostridium sp. Le sang d’un patient sain est stérile → prélèvement monomicrobien Quand flacon + 1. Coloration de Gram → orientation antibiothérapie 2. Isolement sur GS : 37°C / 24h / aérobiose → hémolyse , aspect colonie, gram GS : 37°C / 24h / anaérobiose → hémolyse, aspect colonie, Gram (+ comparaison GS aéro/anaéro) Mac Conkey : 37°C / 24h / aérobiose → BG – « intestinal », Lactose +/- 3. Tests supplémentaires (arbre décisionnel) Techniques de prélèvement et analyses Selles Prélèvements Avant antibiothérapie ! Récolte stimulée (thermomètre, gel de lavement) 3 selles espacées de 24h Fouille + gant stérile (vache, cheval, mouton, porc) (excrétion intermittente) Au sol/litière Écouvillonnage (rectal, cloaque) Fraicheur → récolte rapide Contaminations Quantités Groupes Quantités émise/24h Quantité prélevée Bovins Plusieurs dizaines de kg ̴ 500 g Équidés 10 – 20 kg ̴ 500 g Porcins 0,5 – 2 kg 100 – 350 g Petits ruminants 0,5 – 2 kg 100 – 350 g Carnivores 50 – qlqs centaines de g 5 – 10 g (chien) 2 – 5 g (chat) Transport / stockage + pathogènes fréquents Bactéries Virus Parasites Escherichia coli entéropathologie Rotavirus Giardia interstinalis Salmonella enterica Coronavirus (cour patho) Yersinia sp. (cours patho) Clostridium sp. Campylobacter sp. Contenant stérile (+ milieu de transport) Conservation au frais si analyse différée/bactériologie, kystes Si recherche de parasites « végétatifs » flagellés →Pas de réfrigération et analyse rapide (qques heures) Analyses Cultures et identification Examen macroscopique 1. Enrichissement dans RVS (pour Salmo) !! 37°C Aspect → score 2. Isolement directs de la selle sur XLD/brillance Salmonella → 24h/37°C/aéro Présence de vers CIN → 24h/29°C/aéro Milieux pour Clostridium et Campylobacter 3. Si XLD/Brillance – → isoler RVS sur autre milieu 4. Confirmation Oxydase → Galerie MALDI Si tous les milieux – → SMAC (EHEC) Examens microscopiques Parasites entre lame et lamelle (œufs, kystes, formes végétatives) Bactéries après coloration Gram → % Gram+ / Gram- Techniques de prélèvement et analyses Urine Prélèvements Bactéries pathogènes fréquents Escherichia coli → n°1 Avant antibiothérapie ! Klebsiella pneumoniae Autres coliformes (ETBacter sp., Serratia sp.) Pot stérile Proteus mirabilis Min 10 ml (si possible) Staphylococcus aureus, Sta. Intermedius + coagulase – Miction naturelle (éviter 1er jets) Enterococcus sp. ▪ Compression manuelle vessie → Urohydropropulsion antérograde Cathétérisation/urètre après désinfection du méat ▪ Éliminer les 1er jets Cystocentèse échoguidée Transport/stockage Mise en culture < 30 min Ou réfrigérées (4°C) et envoyées dans les 24h Ou prélevées dans milieu de transport avec bactériostatique (acide borique) → 48h Analyses Examen macroscopique Couleur normale : incolore à jaune Turbidité normale : limpide → Si trouble : leucocytes, bactéries, mucus, cristaux Densité au réfractomètre Tigette/bandelette urinaire → pH, leucocytes, protéines, glucose, hémoglobine Examens microscopiques Cristaux (après centrifugation → = sédiments) Ȼ de l’animal (épithéliales, GR, GB, spermatozoïdes) Bactéries (après coloration) Culture → dénombrement et identification Öse calibrée de 10 µl Isolement et numération Milieu polyvalent ChomID CPS Elite Ensemencement en « sapin » β-galactosidase Substrats chomogènes Chromogène polyvalent β-glucuronidase ▪ (+ GS+ANC) β-glucosidase Autres tests: Tryptophane Substrat non-chromogène ▪ Gram, catalase, galeries, Maldi tof désaminase E. coli Proteus sp. Enterococcus sp. Klebsiella + autres Staphylococcus coliformes sp. 1. β-galactosidase + Tryptophane désaminase + β-glucosidase + β-galactosidase + Colonies roses pâles (Lactose) Colonies/milieu brunâtres + halo Colonies turquoises β-glucosidase + possible Colonies jaunes β-glucuronidase + Colonies vertes (voire bleutées) (glucose) Colonies rouges à bordeaux 2. SIM → Indole Gram Gram Catalase 3. Indole + → Galerie Api Galerie ou maldi Staph-latex Indole - → Proteus mirabilis AB novobiocine