Techniques de Prélèvement et Analyses de selles (PDF)

Camille MOUCHART 2024 CHAPITRE 8 : TECHNIQUES DE PRÉLÈVEMENT ET ANALYSES DE SELLES 1. PRÉLÈVEMENT Les prélèvement doivent se faire avant antibiothérapie pour éviter les biais car si il y a une pr...

Camille MOUCHART 2024 CHAPITRE 8 : TECHNIQUES DE PRÉLÈVEMENT ET ANALYSES DE SELLES 1. PRÉLÈVEMENT Les prélèvement doivent se faire avant antibiothérapie pour éviter les biais car si il y a une présence d’antibiotiques les microorganismes ne pousseront pas sur un milieu. Ici on demande un prélèvement de 3 selles qui sont espacés de 24h (excrétion intermittente) car c’est pas dans tous les selles qu’on trouveras les microorganismes responsable de la maladie. On peut prélever au sol/litière : Fraîcheur → récolte rapide (plus c’est frais mieux c’est) Contaminations On peut fair une récolte stimulée (thermomètre, gel de lavement), déclanchement de la défécation. Une fouille avec des gant stérile (vache, cheval, mouton, porc). On va chercher avec la main, dans les espèces assez grosse, leurs matière fécals directement par leurs anus. L’écouvillonnage (rectal, cloaque) ce fait souvent chez les petits animaux. 2. TRANSPORT/STOCKAGE Après le prélèvement , les selles sont contenue dans un contenant stérile (+ milieu de transport) et conserver au frais si analyse différée/bactériologie, kystes. Si on est à la recherche de protozoaires ‘végétatifs’ flagellés on ne peut pas de réfrigér et les analyses doivent se faire rapidement (quelques heures). Les protozoaires sont des microorganisme sensible qui ne vivant pas longtemps à l’aire libres. 1 Camille MOUCHART 2024 3. BACTÉRIES PATHOGÈNES FRÉQUENTES Les bactéries les plus souvent rencontrer son : Escherichia coli Salmonella enterica Yersinia sp. Clostridium sp. … 4. ANALYSES 4.1. EXAMENS MACROSCOPIQUES La premier étape de l’analyse, sont les examens macroscopiques. Dans cette étape on porte l’attention sur plusieurs caractéristiques : Liquide? Consistance? Humidité? Forme? Craquelures? → L’aspect des selles nous permet d’attribuer un score au sel. L’examen macroscopique nous permet de voir si il y un présence de vers (parasites qui sont pluricellulaires). 4.2. EXAMENS MICROSCOPIQUES Après les examens macroscopiques, on passe aux examens microscopiques. Il existe deux type d’examens microscopiques concernant les selles : Examen a fraie c.à.d. que l’examen se fait sur du vivant. Examen après traitements → Parasites entre lame et lamelle → cf. cours de parasitologie TA3 Œufs Kystes Formes végétatives (flagellés) → Bactéries après coloration de Gram → % Gram+ / Gram- Le prélèvement est polymicrobiens (beaucoup beaucoup de bactéries dans l’intestin) donc sous le microscopes on ne pourras pas tous de suite trouver la bactéries pathogène. Cependant certains labos aime quand même l’avoir pour voir le rapport entre Gram + et Gram - qui devrais être dans les alentours de 50% 2 Camille MOUCHART 2024 4.3. CULTURE ET IDENTIFICATION JOUR 1 Lorsque nous avons un échantillon de selle et qu’on ne connais donc pas encore la souches pathogène, on ensemence le même jour : XLD → 24h/37°C/aérobiose (pour voir si ce n’est pas la Salmonella sp.) CIN → 24h/29°C/aérobiose (pour observer les bactéries intestinalles) Milieux pour Clostridium RVS (pour Salmonella sp.) →24h/37°C/aérobiose RVS = Rappaport Vassiliadis Soja Rappaport Vassiliadis sont les noms des personnes qui l’ont créer. Elle permet l’enrichissement l’échantillon de départ au cas où il n’y en aurais pas suffisamment beaucoup dans la selle. Il est quand même sélectif. Donc certaine n’y vont pas pousser. Il booste beaucoup la Salmonella sp.. Cette dernière peut être présente en très peu quantité et être pathogénique. Il n’y a qu’une espèce pathogène, on ne retrouvera pas les 4 dans un même échantillon. JOUR 2 Si CIN, XLD et le milieu Clostridium sont «négatifs » → isolementdu RVS sur autre milieu que XLD (Pour Salmonelle sp.) Si CIN ou XLD « positif » → galerie API 20 E ou NE pour BG- ou Maldi Si milieu milieu Clostridium « positif » → suite des tests pour BG+ : Camp ou Maldi JOUR 3 Si tous les milieux sont « négatifs » → SMAC (EHEC) SMAC est Sorbitol Mac Conkey (sorbitol remplace le lactose dans la gélose Mac Conkey classique). Les souches d’Escherichia coli non pathogène ne fermente pas le sorbitol tandis que les souches d’Escherichia coli pathogène oui. 3 Camille MOUCHART 2024 On ensemence la galerie seulement si on a un milieu positif sinon quand on a pas de résultat après « ? » on ensemence SMAC. 4.4. ANTIBIOGRAMME Attention à la standardisation ! Milieu gélosé Mueller Hinton Suspension 0,5 Mac Farland / sérum physiologique (9g/l NaCl) Ensemencement massif / écouvillon stérile Dépôt des AB distance 15mm bord / bord Incubation Mesure du diamètre des ZI Lecture : S, R ou SFP 4