Pruebas de Laboratorio Para Transfusión de Hemoderivados y Componentes Sanguíneos PDF

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INSTITUTO DE ESTUDIOS SUPRIORES DEL ISTMO DE TEHUANTEPEC PRUEBAS DE LABORATORIO PARA TRANSFUSIÓN DE HEMODERIVADOS Y COMPONENTES SANGUÍNEOS Equipo 2: Asignatura: José Ángel Crispín Barrera Hematologia Ilse Janet Gordon Carvajal Semestre y grupo: 5º C Juan Pedro Nolasco Gonzáles Dulce Juquila Jarquín Gallegos Docente: Alison Michell Vazquez Romero Quím. Abraham Cruz Enríquez Yahir Federico García Valdivieso  Introducción Gran utilidad clínica. Fundamental para la atención médica en pacientes con deficiencia de sangre. Existen riesgos asociados como VIH/SIDA. Debe existir profesionalismo y ética por las malas aplicaciones. Problemas legales y el compromiso con la salud y vida del paciente.  Introducción Las pruebas de laboratorio para transfusión de hemoderivados y componentes sanguíneos son procesos cruciales para garantizar la seguridad y compatibilidad de la sangre antes de su transfusión a pacientes. Estas pruebas ayudan a prevenir reacciones adversas y complicaciones graves. A continuación, se presentan las principales pruebas de laboratorio realizadas: Tipificación de grupo sanguíneo (ABO) y Rh: Se determina el grupo sanguíneo del donante y del receptor para asegurar la compatibilidad. Prueba de Coombs Directa (PCR) o Prueba de Anticuerpos: Detecta anticuerpos contra antígenos sanguíneos en el suero del receptor.  Introducción Prueba de Coombs Indirecta (PCI): Identifica anticuerpos contra antígenos sanguíneos en la sangre del donante. Prueba de compatibilidad cruzada: Verifica la compatibilidad entre la sangre del donante y el suero del receptor. Detección de marcadores de infecciones transmitidas por transfusión: Se buscan evidencia de infecciones como VIH,Hepatitis B, chagas, sífilis. Análisis de componentes sanguíneos específicos: Según el tipo de componente a transfundir, como plasma, plaquetas, crioprecipitados, etc.  PRUEBAS CRUZADAS Pruebas cruzadas Son una serie de ensayos realizados sobre la sangre del presunto donador y del presunto receptor de una transfusión sanguínea que tiene por objeto el detectar cualquier incompatibilidad existente entre ambas. Es necesario realizar la prueba cruzada que pondrá de manifiesto la existencia de otros anticuerpos dirigidos contra antígenos. Hay dos tipos de pruebas cruzadas, ambas de reacción de aglutinación directa: Prueba cruzada mayor (PM) → se enfrentan GR del donante + suero del receptor Prueba cruzada menor (pm) → GR del receptor + suero del donante Condiciones que favorecen la reacción antígeno-anticuerpo: solución salina fisiológica (0.85%) o un medio rico en proteínas. Pruebas cruzadas:  Centrifugación inmediata o prueba rápida: se realiza en SSF 0.85% a temperatura ambiente. Fase I Permite la aglutinación de anticuerpos (IgM) a antígenos diferentes del sistema ABO y Rh. Se inicia con una incubación a 37°C y se utilizan diferentes medios de reacción: albúmina, solución de baja fuerza iónica Fase II (LISS), polietilenglicol y enzimas como ficina y papaína. Permite la identificación de anticuerpos de la clase IgG, ya que su capacidad aglutinante, generalmente se ve limitada por el potencial Z. Consiste en la adición del reactivo Coombs, inmunoglobulina Fase III IgM anti-IgG + anti-C3b del complemento o anti-IgG. Permite la detección de anticuerpos, sin capacidad aglutinante, unidos a la membrana de los eritrocitos. Técnica: Prueba cruzada mayor Prueba cruzada menor Preparación de las muestras: sangre del Preparación de las muestras: sangre del donante y suero del recepto. receptor y suero del donante. Mezcla de las muestras: 1:1 ( sangre del Mezcla de las muestras: 1:1 (sangre del donante: suero del receptor). receptor: suero del donante). Incubación: Se incuban las mezclas a 37°C Incubación: Se incuban las mezclas a 37°C durante 15-30 minutos. durante 15-30 minutos. Centrifugación: 1000-1500xg, 5 minutos. Centrifugación: 1000-1500xg, 5 minutos. Lectura: Se observa la aglutinación o lisis de Lectura: Se observa la aglutinación o lisis las células sanguíneas. de las células sanguíneas.  Resultados: Compatibilidad: No hay aglutinación o lisis (Artículo 173). Incompatibilidad: Aglutinación o lisis (Artículo 174). Indeterminado: Resultados no concluyentes (Artículo 175). Interpretación de resultados: Compatibilidad: La sangre del donante es compatible con el receptor (Artículo 176). Incompatibilidad: La sangre del donante no es compatible con el receptor (Artículo 177). Indeterminado: Se requiere repetir la prueba o utilizar otro método (Artículo 178). PRUEBA DE GRUPO SANGUÍNEO  GRUPO SANGUINEO AB0: DIRECTO Permite identificar la presencia o ausencia de los antígenos A y B en los eritrocitos, mediante el empleo de reactivos hemoclasificadores anti-A, anti-B y anti-AB de origen monoclonal (3).  GRUPO SANGUINEO AB0: DIRECTO PROCEDIMIENTO Prueba en placa 1. Marcar la placa de aglutinación por: A, B, AB y Rh. 2. Con torunda desinfectar el pulpejo de un dedo, secar al aire y puncionar con una lanceta estéril. 3. Presionar el dedo de arriba hacia abajo, colocar 1 gota de sangre sobre la placa, en cada uno de los 4 pozos de aglutinación en su fila correspondiente. 4. Adicionar a cada muestra de sangre, 1 gota de suero: anti-A, anti-B, anti- AB y anti-D según la columna. 5. Mezclar con aplicador de madera (1 diferente en cada pozo). 6. Observar presencia o ausencia de aglutinación en cada muestra (10 seg hasta 2 min). 7. Interpretar los resultados. 8. Anotar resultados (10,11). GRUPO SANGUINEO AB0: DIRECTO GRUPO SANGUINEO AB0: DIRECTO  GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA ¿EN QUE CONSISTE? Permite identificar la presencia o ausencia de los anticuerpos regulares anti-A y anti-B en suero o plasma, utilizando eritrocitos con antígeno A y B. En cada clasificación de grupo AB0, se deberá incluir un control o testigo que incluya glóbulos rojos de la muestra estudiada y solución salina o el medio en el que se realice la suspensión globular, a fin de demostrar la ausencia de autoaglutinación (3).  GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA FUNDAMENTO El suero del paciente que contiene antigenos se ponen en contacto con los criterios de los eritrocitos que continen anticuerpos formando un complejo Ag-Ac, que se manifiesta microscópicamente mediante una aglutinación. Por eso importante usar suero Anti A, Anti B el cual detecta casi todos los subgrupos débiles.  GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA METODOLOGIA Técnica en tubo: 1. Se realiza la venopunción en los pacientes para tomar muestras de eritrocitos. 2. Se preparan suspensiones de glóbulos rojos al 2% en la siguiente forma. 3. En un tubo de ensayo marcado con la letra A se agrega 1 gota de sangre A, otro tubo marcado con la letra B se agrega una gota de sangre B. 4. Se llenan los tubos con sol salina y se centrifugan a 3400 rpm durante 3 minutos y se decanta liquido sobrenadante invirtiendo los tubos. GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA INTERPRETACIÓN  GRUPO SANGUINEO AB0: INVERSA No será necesario efectuar la prueba inversa referida en los casos siguientes: A) Para ratificar el grupo sanguíneo de los concentrados de eritrocitos ricos en solución aditiva o con muy bajo contenido plasmático; B) En receptores de cuatro meses o menores, C) Cuando la clasificación del grupo AB0 se hubiera realizado mediante genotipificación sanguínea.(3) PRUEBA DE COOMBS  PRUEBA DE COOMBS: ¿Qué es? DIRECTA También conocida como prueba directa de antiglobulina (DAT, por sus siglas en inglés). ¿Para que sirve? Es una herramienta clave en inmunohematología utilizada para detectar la presencia de anticuerpos o proteínas del sistema de complemento adheridas a la superficie de los eritrocitos en el paciente. Esta prueba es fundamental para el diagnóstico de anemias hemolíticas autoinmunes, enfermedad hemolítica del recién nacido, y reacciones transfusionales. Su objetivo es identificar hemólisis inmunomediada, donde el propio sistema inmunitario daña los glóbulos rojos del organismo. (7)  PRUEBA DE COOMBS DIRECTA TÉCNICA Recolección y preparación de la muestra: Se obtiene una muestra de sangre venosa del paciente. Es fundamental recolectarla en un tubo con anticoagulante adecuado (como EDTA) para prevenir la formación de coágulos que podrían interferir con los resultados. (5) PRUEBA DE COOMBS DIRECTA TÉCNICA PRUEBA DE COOMBS DIRECTA TÉCNICA  PRUEBA DE COOMBS DIRECTA TÉCNICA Suero reactivo de Coombs (antihumano): Contiene anticuerpos específicos contra inmunoglobulinas humanas (como IgG) y proteínas del complemento, como el factor C3d. Este reactivo está diseñado para aglutinar células a las que se han adherido estos anticuerpos o proteínas del complemento. (8) PRUEBA DE COOMBS DIRECTA TÉCNICA PRUEBA DE COOMBS DIRECTA TÉCNICA  Incorrecta agitación (del tubo) Aglutinación espontanea de eritrocitos FALSOS Sobre centrifugación POSITIVOS (16) Pobre lavado de eritrocitos Muestras coaguladas  PRUEBA DE COOMBS DIRECTA RESULTADOS Resultado positivo: Indica la presencia de anticuerpos o componentes del complemento adheridos a los eritrocitos. Las inmunoglobulinas más comúnmente implicadas en hemólisis inmunitaria son IgG y, en menor medida, IgM y IgA. Además, los componentes del complemento (C3d) pueden estar presentes. (8) Resultado negativo: Indica que no hay anticuerpos ni proteínas del complemento adheridos a los eritrocitos del paciente, descartando hemólisis inmunitaria como causa de la anemia. Sin embargo, no descarta completamente otras causas de anemia o de hemólisis no inmunitaria. (8)  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA Análisis que permite detectar en suero o en plasma anticuerpos específicos contra algún antígeno de fenotipo conocido de la membrana del eritrocito, mediante el uso anticuerpos contra la gamaglobulina humana (suero de Coombs).3 es especialmente útil para comprobar la compatibilidad en transfusiones sanguíneas, para evaluar el riesgo de enfermedad hemolítica en recién nacidos y en situaciones de anemia hemolítica autoinmune.4  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA UTILIDAD Compatibilidad cruzada en transfusiones de sangre: Para detectar si el receptor tiene anticuerpos contra los antígenos de los glóbulos rojos del donante. Enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN): Para detectar anticuerpos maternos que pueden causar hemólisis en el feto. Anemia hemolítica autoinmune: Para detectar anticuerpos autoinmunes contra los glóbulos rojos. Control prenatal: Para determinar si la madre presenta anticuerpos anti-Rh que podrían afectar a un feto Rh positivo.5  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA PROCEDIMIENTO Extracción de sangre: Se obtiene una muestra de suero del paciente. Incubación con glóbulos rojos de tipo conocido: El suero se mezcla con glóbulos rojos de tipo conocido, que pueden ser de un grupo sanguíneo estándar. Estos glóbulos rojos sirven como "antígenos de prueba" para ver si el suero del paciente contiene anticuerpos que puedan reaccionar contra ciertos antígenos en la superficie de los glóbulos rojos. Si el paciente tiene anticuerpos contra un antígeno específico (como el antígeno Rh), estos anticuerpos se unirán a los glóbulos rojos del grupo conocido.6  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA PROCEDIMIENTO Adición del reactivo de Coombs: Se añade suero de Coombs, que contiene anticuerpos contra anticuerpos humanos (por ejemplo, anticuerpos humanos contra los anticuerpos que pueda tener el paciente). El suero de Coombs se une a los anticuerpos presentes en el suero del paciente si estos están adheridos a los glóbulos rojos.6  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA PROCEDIMIENTO Observación de la aglutinación: Si los anticuerpos del Px se han unido a los glóbulos rojos durante la incubación, el suero de Coombs inducirá una aglutinación de los glóbulos rojos.6 —> Si hay aglutinación, el resultado es positivo. —> Si no hay aglutinación, el resultado es negativo. PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA PROCEDIMIENTO  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA RESULTADOS Positivo: Indica la presencia de anticuerpos en el suero del paciente. En un contexto de transfusión, esto sugiere que el paciente puede tener anticuerpos que atacarán los glóbulos rojos del donante, lo que hace que esa sangre sea incompatible. En la EHRN, podría implicar que la madre tiene anticuerpos que pueden atacar los glóbulos rojos del feto. Negativo: No hay anticuerpos detectables en el suero del paciente, lo que sugiere que no hay riesgo de reacción inmunitaria contra los glóbulos rojos probados. Esto es indicativo de una transfusión compatible o de que no existe sensibilización en el embarazo en cuanto a la incompatibilidad Rh.4  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA CONTROL DE LA PRUEBA Como un control del procedimiento, en cada prueba interpretada como negativa se deben agregar eritrocitos D+ sensibilizados con IgG anti-D, a lo cual se conoce como “control de la antiglobulina”. 9  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA INTERPRETACIÓN DEL CONTROL Cuando la aglutinación es positiva, se confirma que la prueba es una verdadera negativa. Si la aglutinación es negativa se trata de una prueba falsa negativa.9  PRUEBA DE COOMBS: INDIRECTA DISCREPANCIAS La calidad de los reactivos y las condiciones de la muestra también juegan un papel importante. Errores en la preparación de los reactivos o en el manejo de la muestra pueden dar lugar a resultados inexactos.4 Falsos positivo: Pueden ser causados por la presencia de otras proteínas en el suero, como proteínas de fase aguda o anticuerpos no específicos. También puede haber interferencia por la presencia de medicamentos, como los que se usan para tratar enfermedades autoinmunes o infecciones.6 Falsos Negativo: Puede ocurrir si los anticuerpos presentes en el suero del px son de baja afinidad o si la cantidad de anticuerpos es insuficiente para causar una reacción visible. También puede ser consecuencia de un mal procedimiento en el laboratorio o de una incubación inapropiada.5  CONCLUSIÓN: La Transfusion posee numerosos beneficios clínicos: Mejora el abastecimiento de oxígeno en cuadros de anemia. Es parte esencial de la atención médica para pacientes con deficiencia de uno o más de estos componentes sanguíneos. [13,14) Existen diferentes factores que intervienen en la seguridad del suministro de sangre: Políticas, decretos y regulaciones gubernamentales Y normas por sociedades de profesionistas que proporcionan a el marco legal para bancos de sangre y medicina transfusional. Se debe de tomar en cuenta a los donantes, siendo la búsqueda altruista el objetivo de las organizaciones del ámbito. (15,16) ¡Muchas gracias!  REFERENCIAS 1. Galindo E, Mata A, Chávez R, Lascurain S. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE MEDICINA PLAN DE ESTUDIOS DE LA LICENCIATURA DE MÉDICO CIRUJANO Práctica de laboratorio Departamento responsable: Bioquímica Aglutinación activa: Determinación de los Grupos sanguíneos ABO Realización por [Internet]. Available from: http://www.facmed.unam.mx/fm/pa/2010/practicas/practicas_inmuno.pdf 2. Busari O, Ojo O, Akingbola T. Bacterial Contamination of Blood and Blood Components: Reducing the Risks in Nigeria. 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