16 - Técnicas de detección de variación genética

Podcast

Play an AI-generated podcast conversation about this lesson

Questions and Answers

¿Qué función desempeñan los cebadores en el proceso de genotipado del ADN?

Sustituir el ADN del paciente por ADN sintético.

Formar puentes de hidrógeno con el ADN del paciente. (correct)

Fragmentar el ADN en pequeñas partes.

Incorporar nucleótidos no marcados.

Durante la secuenciación de ADN, ¿cuál es el principal propósito de la polimerasa?

Sintetizar la cadena complementaria. (correct)

Eliminar nucleótidos no deseados.

Leer la cadena molde sin síntesis.

Marcar el ADN con etiquetas fluorescentes.

¿Cuál es la principal ventaja de la PCR en tiempo real en comparación con métodos más tradicionales?

Permite el análisis de múltiples genomas al mismo tiempo.

Amplifica ADN y detecta variantes en tiempo real. (correct)

Requiere procedimientos adicionales como el uso de geles de agarosa.

Es más adecuada para estudios masivos que la técnica de geles.

En el proceso de síntesis de ADN, ¿cuál es la dirección en la que ocurre la síntesis?

5’ a 3’. Signup and view all the answers

¿Para qué tipo de estudio es más adecuado utilizar plataformas de genotipado de alta densidad?

Para estudios masivos y análisis detallados del genoma. Signup and view all the answers

¿Qué tecnología es mencionada como referente a nivel internacional en el contexto de la genética?

Illumina. Signup and view all the answers

¿Qué rol desempeña el oxígeno en el centro activo de la polimerasa durante la síntesis de ADN?

Actuar como nucleófilo reactivo. Signup and view all the answers

Al incorporar el nucleótido marcado durante la síntesis de ADN, ¿cuál es el sustrato usado por la polimerasa?

DNTP con tres fosfatos. Signup and view all the answers

¿Cómo se visualizan los resultados de la PCR en tiempo real?

Directamente en el monitor del termociclador. Signup and view all the answers

¿Qué ocurre con el nucleótido en la posición del genoma cuando se añade el nucleótido marcado?

Se incorpora el nucleótido complementario. Signup and view all the answers

¿Qué tipo de análisis permite realizar un array de ADN?

Análisis de aproximadamente 800.000 posiciones diferentes del genoma. Signup and view all the answers

En la estructura del ADN, ¿qué representa la secuencia TAGG en la cadena molde?

La secuencia original del genoma antes de la síntesis. Signup and view all the answers

¿Cuál es una desventaja de la PCR en tiempo real en el análisis del genoma?

No permite el análisis de cientos de miles de posiciones genómicas. Signup and view all the answers

¿Cuál es el enlace que se forma entre nucleótidos durante la síntesis de ADN?

Enlace fosfodiéster. Signup and view all the answers

¿Cuál es el propósito del láser utilizado en la PCR en tiempo real?

Excitar fluoróforos para la detección de señal. Signup and view all the answers

¿Qué característica resalta a las plataformas de genotipado de alta densidad frente a la PCR en tiempo real?

Son capaces de evaluar grandes volúmenes de datos genómicos a la vez. Signup and view all the answers

¿Cuál es la consecuencia principal de sustituir el grupo OH por un H en los nucleótidos trifosfatos?

Se detiene la síntesis del ADN. Signup and view all the answers

¿Qué se obtiene como subproducto durante la replicación cuando se producen enlaces covalentes entre nucleótidos?

Pirofosfato. Signup and view all the answers

¿Qué ocurrirá si se incorpora una adenina modificada con solo un 3' H en lugar de un 3' OH durante la síntesis de ADN?

La síntesis se detendrá. Signup and view all the answers

¿Qué técnica se utiliza para secuenciar el ADN humano a partir de nucleótidos artificiales y normal?

Secuenciación ion Sanger. Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes enunciados es incorrecto sobre los nucleótidos trifosfatos y su papel en la replicación?

Si solo se usan nucleótidos sin oxígeno se producirá ADN de longitud normal. Signup and view all the answers

¿Qué papel desempeña el magnesio en la síntesis de ADN durante la replicación?

Estabiliza la carga y la estructura del ADN. Signup and view all the answers

¿Qué resultado se obtiene al mezclar ADN molde, polimerasas, magnesio y nucleótidos con y sin grupo OH?

Surgen fragmentos de ADN de distintas longitudes. Signup and view all the answers

¿Qué función tiene el oxígeno en la estructura de los nucleótidos durante la replicación?

Permite la formación de enlaces covalentes entre nucleótidos. Signup and view all the answers

¿Cuál es el propósito de la desnaturalización del ADN en este proceso?

Convertir ADN bicatenario en monocatenario. Signup and view all the answers

¿Qué indica un exceso de señales fluorescentes rojas durante la hibridación?

Una ganancia de material genético en el paciente. Signup and view all the answers

¿Qué sucede si las señales fluorescentes rojas y verdes están equilibradas?

No hay diferencias estructurales en esa región. Signup and view all the answers

¿Cómo se puede identificar una deleción en el ADN del paciente?

Por un exceso de señales verdes. Signup and view all the answers

¿Qué función tiene el escáner en el proceso de hibridación?

Detectar y medir la intensidad de las señales fluorescentes. Signup and view all the answers

¿Qué caracteriza a las sondas del array de genotipado?

Están localizadas en posiciones predefinidas y diseñadas para ácidos nucleicos específicos. Signup and view all the answers

En el contexto del genotipado, ¿qué señal correlaciona con una duplicación en el ADN del paciente?

Un alto nivel de señales rojas. Signup and view all the answers

¿Qué ocurre con el ADN bicatenario durante el proceso de hibridación?

Se separa en cadenas individuales para hibridar con las sondas. Signup and view all the answers

¿Cuál es la función de los nucleótidos modificados en la secuenciación de Sanger?

Detener la síntesis del ADN al azar Signup and view all the answers

En el método de Sanger, ¿qué diferencia permite identificar nucleótidos modificados?

El fluoróforo marcado que contienen Signup and view all the answers

¿Cuál es una característica clave de la técnica de electroforesis en este método?

Distingue fragmentos con diferencias de un nucleótido Signup and view all the answers

¿Qué se puede deducir si se observa un pico de color en la lectura del ADN?

Es homocigótico en la posición de interés Signup and view all the answers

¿Qué papel desempeñan las polimerasas en la secuenciación Sanger?

Facilitan la introducción de nucleótidos normal y modificados Signup and view all the answers

¿Cómo se asegura que los nucleótidos se detengan en lugares al azar durante la síntesis?

Con nucleótidos normales y modificados Signup and view all the answers

¿Qué se determina si hay dos picos en la lectura correspondiente a un nucleótido?

Es heterocigótico en esa posición Signup and view all the answers

¿Cuál es la principal diferencia entre la secuenciación Sanger y la síntesis de ADN común?

El uso de nucleótidos modificados Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes propiedades del ADN no se utiliza en las técnicas de análisis genético?

Capacidad de absorción de luz visible Signup and view all the answers

Entre las siguientes técnicas de detección de variación genética, ¿cuál se utiliza principalmente para la caracterización de una secuencia específica de ADN en un cromosoma?

Hibridación fluorescente in situ (FISH) Signup and view all the answers

¿Qué técnica se basa en la amplificación de ADN y permite detectar la presencia de variantes genéticas?

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Signup and view all the answers

El uso de qué técnica depende fundamentalmente del presupuesto disponible para el análisis de variaciones genéticas?

Microarrays de genotipado Signup and view all the answers

Cada una de las siguientes opciones describe un tipo de variación genética, excepto:

RFLP Signup and view all the answers

En el contexto de la hibridación fluorescente in situ (FISH), ¿qué tipo de moléculas se utilizan como sondas?

Moléculas de ADN sintético Signup and view all the answers

La complementación de bases en las técnicas de análisis genético se refiere a:

La unión específica entre bases nitrogenadas Signup and view all the answers

La técnica de secuenciación masiva de ADN permite principalmente:

Analizar múltiples variantes genéticas simultáneamente Signup and view all the answers

Study Notes

Técnicas de Detección de Variación Genética

Las técnicas de análisis se basan en las características intrínsecas de la doble hélice del ADN, incluyendo absorción de luz UV, carga negativa, complementariedad de bases, desnaturalización y renaturalización.
Existen diversas técnicas, destacando la hibridación fluorescente in situ (FISH), la hibridación genómica comparativa (CGH), la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), PCR convencional, PCR en tiempo real, microarrays de genotipado, secuenciación Sanger y secuenciación masiva de ADN.
La elección de una o varias técnicas depende de la información previa disponible, la localización de la variación (somática o germinal), el tipo de variación (SNP, indel, STR, CNV), y el número de muestras y variantes a analizar, así como del presupuesto.

Hibridación Fluorescente In Situ (FISH)

FISH detecta y localiza una secuencia específica de ADN en un cromosoma.
Utiliza sondas de ADN marcadas con fluorocromos que se hibridan con la secuencia diana.
La fluorescencia se produce al excitar las sondas con una longitud de onda determinada, liberando energía en una longitud de onda superior.
La hibridación permite detectar secuencias específicas en cromosomas.

Hibridación Genómica Comparativa (CGH)

Técnica citogenética molecular que permite detectar variaciones estructurales a nivel genómico usando arrays.
Es útil para comparar dos muestras de ADN genómico (una de referencia y otra del paciente) para identificar variantes estructurales como inserciones, deleciones o duplicaciones.
Permite identificar diferencias en la cantidad de ADN en ciertas zonas del genoma.
Proporciona información sobre la cantidad de material genético en cada región.

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

Técnica que permite obtener un gran número de copias de una región de ADN específica a partir de una muestra de ADN molde.
Implica etapas repetitivas de desnaturalización, anillado y extensión, usando una ADN polimerasa termorresistente.
Se usa para amplificar regiones genómicas concretas para estudios posteriores.
Existe PCR en tiempo real, que permite visualizar la amplificación en tiempo real usando sustancias fluorescentes.

Micromatrices de ADN

Plataformas para analizar cientos de miles de posiciones genómicas en un individuo.
Permiten analizar variaciones de nucleótidos únicos (SNVs) e identificar ganancias o pérdidas de material genético.
Son esenciales para investigaciones genómicas a gran escala.
Proporcionan un método eficaz para estudiar variaciones genéticas.

Secuenciación Sanger

Método para determinar la secuencia de bases del ADN.
Utiliza didesoxinucleótidos que terminan la cadena de ADN en diferentes puntos, lo que permite determinar la secuencia.
Emplea electroforesis para separar fragmentos, y se utilizan fluoróforos para determinar las bases (A, C, G, o T).
Ofrece una resolución alta en la identificación de variantes genéticas pero tiene un costo mayor que la secuenciación masiva.

Secuenciación Masiva

Método de secuenciación de ADN que permite determinar la secuencia de bases de forma alta y rápida.
Permite analizar millones de secuencias de ADN en paralelo.
Ofrece una mejor resolución, alta velocidad, y un costo significativamente menor que la secuenciación Sanger.
Ideal para análisis a gran escala, como genomas completos.

Studying That Suits You

Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.