Testes_citogenticos_e_moleculares_na_prtica_clnica.pdf

Testes citogenéticos e moleculares na prática clínica Doenças com Doenças com alteração no alterações em cromossomo um gene Exames Exames citogenéticos moleculares Exames citogenéticos Cariótipo Cariótipo: É o conjunto cromossômico de uma espécie....

Testes citogenéticos e moleculares na prática clínica Doenças com Doenças com alteração no alterações em cromossomo um gene Exames Exames citogenéticos moleculares Exames citogenéticos Cariótipo Cariótipo: É o conjunto cromossômico de uma espécie. 4  Cariótipo Os cromossomos estão dispostos em ordem decrescente. São classificados em 7 grupos: A – G. 1- maior metacêntrico. Grupo A 2- maior submetacêntrico. 3- metacêntrico. Grupo B 4 e 5 –submetacêntrico. 5  Cariótipo cromossomos 6 a 12 – submetacêntrico. Grupo C cromossomo sexual X. Grupo D cromossomos 13 a 15- acrocêntrico. 6  Cariótipo cromossomos 16–metacêntrico. Grupo E cromossomo 17- submetacêntrico. cromossomo 18 – submetacêntrico (com braço curto menor que o 17). Grupo F cromossomos 19 e 20- metacêntrico 7  Cariótipo Grupo G cromossomos 21 e 22–acrocêntrico. cromossomo sexual. Homem: 46, XY Mulher: 46, XX A- 6 A- 6 B-4 B-4 C-15 C-16 D-6 D-6 E- 6 E- 6 F- 4 F- 4 G-5 G-4 8  Cariótipo Características No. de Grupo Posição do Pares Cromossômicos Tamanho Cromossomos Centrômero Meta 1 A Grandes Submeta 6 2 Meta 3 B Grandes Submeta 4 5e6 ♀ 16 C Médios Submeta 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 e X ♂ 15 D Médios Acro 6 13, 14 e 15 E Pequenos Submeta 6 16, 17 e 18 F Pequenos Meta 4 19 e 20 ♀4 G Pequenos Acro 21, 22 e Y ♂5 Total 46 Cromossomos 9  Cariótipo Análise convencional Metáfase observada ao microscópio óptico. 10  Cariótipo Bandeamento cromossômico Técnicas de coloração especial que coram seletivamente o DNA padrão de bandas característico. Principais técnicas: Banda G Banda R Banda C Banda Q 11  Cariótipo Bandas G Cada par de cromossomos cora-se num padrão típico de bandas claras e escuras. -DNA rico em CG -DNA rico em AT -Replicação -Replicação tardia precoce -Poucos genes ativos -Muito genes ativos Os cromossomos são submetidos à ação de uma enzima – tripsina – que digere as proteínas cromossômicas. 12 Cariótipo Cariótipo em banda G 13  HIBRIDAÇÃO IN SITU FLUORESCENTE FISH: técnica de mapeamento físico de DNA em que uma sonda de DNA marcada com fluorocromo é hibridizada ao cromossomo ou núcleo interfásico e visualizado em microscópio de fluorescência SONDAS CENTROMÉRICAS SONDAS WCP – Cromossomo Total CARIOTIPAGEM ESPECTRAL - SKY Microarray GCH (Comparative Genomic Hybridization) Microarray GCH (Comparative Genomic Hybridization) Exames moleculares  Reação em Cadeia da Polimerase  PCR  ETAPAS DA PCR DNA Taq polimerase dATP Primers dCTP dGTP dTTP (nucleotídeos)  ETAPAS DA PCR DNA Taq polimerase dATP Primers dCTP dGTP dTTP (nucleotídeos) 94ºC DESNATURAÇÃO  ETAPAS DA PCR 1. Adição de reagentes DNA Taq polimerase dATP Primers dCTP dGTP dTTP (nucleotídeos) 94ºC 57ºC DESNATURAÇÃO ANELAMENTO Primer forward Primer reverse  ETAPAS DA PCR 1. Adição de reagentes DNA Taq polimerase dATP Primers dCTP Tampão dGTP Água dTTP (nucleotídeos) 94ºC 57ºC 72ºC DESNATURAÇÃO ANELAMENTO EXTENSÃO  Taq DNA polimerase Eletroforese  Detecção do HPV por PCR 450 pb Detecção do Mycobacterium leprae por PCR RT (Reverse Transcriptase) - PCR Detecção do Gene PCA3 em Biópsia de CaP por RT-PCR M 1R1 1R2 2R1 2R2 3R1 3R2 4R1 4R2 5R1 5R2 6R1 6R2 7R1 7R2 8R1 8R2 500pb 300pb 9R1 9R2 10R1 10R2 11R1 11R2 12R1 12R2 13R1 13R2 14R1 14R2 15R1 15R2 500pb 300pb Sequenciamento de DNA  Polimorfismo da Proteína G C C C T T T Homozigoto Heterozigoto Homozigoto 825C C825T 825T  Controle da Obesidade e a Proteína G SIBUTRAMINA : inibidor de reabsorção de neurotransmissores que ajuda a elevar a saciedade - usado no controle da obesidade  Perfil TT : Pacientes - o uso aumenta a pressão arterial além de trazer riscos cardiovasculares.  Perfis CC e TC : Pacientes - Sibutramina oferece ótimos resultados no controle da obesidade.