Buku Penuntun Praktikum Mikrobiologi Pewarnaan Gram 2018 PDF

# BUKU PENUNTUN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PEWARNAAN GRAM ## 2018 ### PENGECATAN GRAM #### ALAT DAN BAHAN: 1. Ose bulat (wire loop) 2. Objek glass 3. Set pewarna Gram (crystal violet, iodine/lugol, alcohol 96%, and safranin atau carbol fuchsin) 4. Api Bunsen 5. Rak pengecatan 6. Pensil kaca 7. Tisu...

# BUKU PENUNTUN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PEWARNAAN GRAM ## 2018 ### PENGECATAN GRAM #### ALAT DAN BAHAN: 1. Ose bulat (wire loop) 2. Objek glass 3. Set pewarna Gram (crystal violet, iodine/lugol, alcohol 96%, and safranin atau carbol fuchsin) 4. Api Bunsen 5. Rak pengecatan 6. Pensil kaca 7. Tisu 8. Label #### CARA KERJA: ##### PEMBUATAN PREPARAT HAPUSAN: 1. Tulis identitas (nama dan 3 digit NIM terakhir) pada region identitas dari objek glass (teraba kasar). 2. Balik objek glass. 3. Buatlah lingkaran (target circle) pada 2 bagian objek glas dengan menggunakan pensil kaca. 4. Balik objek glass. 5. Setelah itu ambil biakan bakteri/ specimen dengan menggunakan ose bulat, buatlah suspensi bakteri pada lingkaran yang sudah dibuat sebelumnya. 6. Jika specimen berupa cairan, langsung dapat dibuat hapusan di dalam lingkaran, tetapi jika bakteri berupa biakan, maka sebelumnya diambil aquades diletakkan pada kedua lingkaran, kemuadian diambil 1 ose biakan bakteri dan dibuat suspensi. 7. Setiap pengambilan specimen dan bahan lain ose selalu diseterilkan dengan cara membakar diatas api Bunsen sampai membara. 8. Suspensi bakteri dibuat se-homogen mungkin dan tidak terlalu tebal. 9. Tunggu hingga kering dengan diangin-angikan. 10. Lakukan fiksasi dengan cara melewatkan kaca objek diatas api bunsen 2-3 kali sehingga hapusan specimen kering. * **From ** **Liquid** **Media**: * Target circle on bottom of slide * Two loopfuls of liquid containing organisms are placed in the center of the "target circle" * Organisms are dispersed over entire area of the "target circle." * **From ** **Solid** **Media**: * Two loopfuls of water are placed in center of "target circle." * A very small amount of organisms is dispersed with inoculating needle in water over entire area of "target circle." * The smear is allowed to dry at room temperature. * **Fixation*: * Slide is passed through flame several times to heat-kill and fix organisms to slide. Use of clothespin is optional. #### PENGECATAN GRAM: | Number | Step | Time | |---|---|---| | 1 | Crystal Violet | 30 sec-1 min | | 2 | Wash | 2-5 sec | | 3 | Gram's Iodine | 1 minute | | 4 | Decolorize with alcohol | 10-20 seconds or until solvent flows colorlessly | | 5 | Wash | 2-5 sec | | 6 | Safranin | 1-2 minutes | | 7 | Wash | 2-5 sec | | 8 | Blot Dry | - | Figure 15.2: The gram-staining procedure #### INTERPRETASI HASIL Setelah pewarnaan, slide/ gelas objek dilihat dibawah mikroskop dengan perbesaran 1000X, dengan minyak imersi. Bakteri Gram positif akan berwarna biru/ungu dan bakteri Gram negative berwarna merah/pink. * **Gram-Positive** * **Gram-Negative** Hasil intepretasi pengecatan Gram adalah berupa identifikasi bentuk dan Gram (positif atau negatif) dari suatu bakteri. Contoh: bakteri batang Gram negatif, bakteri kokus Gram positif. ### ZIEHL-NEELSEN STAINING Put your slide at staining rack * Add ***CARBOL FUCHSIN*** (R1) into surface of slides, with a Bunsen burner, heat the smear gently until steaming 3 times (do not boiling) wait for 5 minutes * **Wash with running water** * Decolorize slide with **ACID ALCOHOL** (R2) until no more colour appear in the washing (15-30 second) * **Wash with running water** * Add **METHYLENE BLUE** (R3) into surface of slides, wait for 30-60 second * **Wash with running water** * **Air dry your slide**