La Biologie Cellulaire PDF

La Biologie Cellulaire 1-La cellule La résolution est la distance minimale qui doit séparer a-Microscopie et résolution deux objets pour quils apparaissent distincts. b-Microscopes simples et composés c-Le sec...

La Biologie Cellulaire 1-La cellule La résolution est la distance minimale qui doit séparer a-Microscopie et résolution deux objets pour quils apparaissent distincts. b-Microscopes simples et composés c-Le secret de la lentille achromatique D d-La théorie cellulaire 2-La biologie cellulaire Objet a-Le microscope électronique b-L’ultramicrotome c-Les compartiments intracellulaires 3-La biologie cellulaire et moléculaire a-Les anticorps b-Immunodétection et microscopie c-La troisième dimension: microscopie confocale Image d-La quatrième dimension: GFP et cellules vivantes Une lentille convergente Un microscope simple: la loupe Distance focale Image virtuelle Objet Un microscope composé (deux lentilles convergentes) Robert Hooke (1665) Microtome Découverte de la cellule Objet Microscope optique Objectif Oculaire Grossissement G1xG2  Les aberrations chromatiques La lentille achromatique Chester Hall (1730) Verre Crown Verre Flint Résolution: la limite théorique Schwann et Schleiden, 1839 Longueur d’onde Résolution=0,61.l n.sin(q) Découverte de la Théorie cellule cellulaire Résolution optimale : l 2 Microscopie optique avancée Pour la lumière visible: 200nm (200.10-9m) Tous les êtres vivants sont faits d’une ou plusieurs cellules Microscope optique classique Microscope électronique à transmission Ernst Ruska 1906-1987 Ecran Photons Objet Lentille Electrons Lentille électromagnétique  L’art de couper les cheveux en 2000 Prix Nobel de Chimie 2017 Keith Porter & Joseph Blum 1950 Jacques Dubochet (Lausanne) 0.1mm «Pour ses travaux sur la cryo-microscopie électronique » x2000 50 nm -Un microtome très précis -Un couteau très coupant (verre, diamant) -Un échantillon très résistant (résine, congélation) Microscopie Microscopie George Palade optique électronique Albert Claude Nobel 1974 Christian de Duve Source photons électrons Observation Oui Non Ultra-microtome Cellules vivantes Pénétration 10-20µm 100nm (coupes fines) Théorie Biologie cellulaire Cellulaire Aspects simple et rapide difficile pratiques peu coûteux coûteux Résolution Microscope électronique 200nm 1nm Découverte des antitoxines (=anticorps) Structure des anticorps Emil von Behring, Kitasato Shibasaburo, Paul Ehrlich Gerald Edelman, Roney Porter 1890-1900 1972 Toxine diphtérique (TD) Antigène Ac1 Ac2 Mort YY Y TD, dose Région croissante variable Survie TD + serum Région Survie ! constante 1901 “He has placed in the hands of the physician a victorious weapon against illness and deaths”  Les molécules fluorescentes (3) Rendre un anticorps fluorescent (1) Principe 1-Absorption-Excitation 2-Relaxation-Emission Une molécule fluorescente, la fluorescéine 494nm 521nm 494nm 521nm Immunofluorescence simple Rendre un anticorps fluorescent (2) 1-Fixation (formaldéhyde) 2-Perméabilisation (saponine) Un dérivé réactif de la fluorescéine: 3-Anticorps fluorescent Fluorescein Iso Thio Cyanate (FITC) 4-Observation 510nm 545nm N C S + H2N-Anticorps N C N Ac S Immunofluorescence double Microscope à fluorescence Anti-Y (Emission 520nm) Y lapin, anti-X (545nm) X Filtre  Immuno-microscopie électronique Microscope à fluorescence confocal 1-Fixation 2-Coupe fine (50nm) 3-Anticorps couplé à un grain d’or Un voxel Détecteur 50nm de photons Filtre La GFP (Green Fluorescent Protein) Immunologie ADN GFP X GFP Immunomarquage Biologie Biologie Protéine X cellulaire cellulaire et GFP moléculaire Biologie moléculaire