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Techniques de détermination du débit de filtration glomérulaire  Technique 1: Mesure du débit de filtration glomérulaire méthode classique avec chirurgie Technique in vivo chez le rat Le DFG est mesuré par la clairance de l'inuline. Bien que cette techniqu...

Techniques de détermination du débit de filtration glomérulaire  Technique 1: Mesure du débit de filtration glomérulaire méthode classique avec chirurgie Technique in vivo chez le rat Le DFG est mesuré par la clairance de l'inuline. Bien que cette technique nécessite une anesthésie, une préparation chirurgicale et une expérience terminale, elle est considérée comme l'étalon-or de la mesure du DFG. En utilisant de l'inuline marquée avec de la fluorescéine-isothiocyanate (FITC), la concentration plasmatique et urinaire de FITC-inuline peut être facilement mesurée dans de petits volumes et utilisée pour calculer le DFG à plusieurs points temporels d'une expérience. 1) Le rat anesthésié par d'isoflurane à 5 %. 2) un cathéter (1) est placé dans l'artère fémorale pour la surveillance de la pression artérielle et de la fréquence cardiaque, ainsi que pour le prélèvement de sang. Le sang est centrifugé et le plasma est récupéré pour dosage de FITC inuline et 3) Un cathéter (2) est placé dans la veine fémorale pour la perfusion d'inuline. FITC-inuline est placé dans un pousse-seringue dont le débit est fixé à 1 ml/h pour 100 g de poids corporel (3 ml/h pour un rat pesant 300 g). Ce cathéter sert également à injecter la furosémide. 4) Un cathéter (3) est placé dans la vessie pour la collecte de l’urine, un échantillon d'urine est colleté dans un flacon pré-pesé pendant une période de 10 minutes. le volume d'urine est déterminé par gravimétrie à l'aide d'une balance numérique. Un volume d'urine adéquat pour une période de collecte de 10 minutes est de 0,2 ml. L’urine est collecté pour le dosage de la FITC inuline. Le sang est toujours collecté au milieu de la période de collecte des urines (10 min) , après prélèvement du sang il est nécessaire de rincer le cathéter avec l’héparine pour éviter la coagulation du sang dans le cathéter Ainsi, 2 échantillons de sang et d’urine sont collectés avant l’injection de la drogue (furosémide ) et 3 après injection de la drogue Echantillon Pro-médicament 1 Echantillon prédicament 2 (10 min après) Pour l'échantillon post-médicament 1 - prélever 5 minutes après la prise de furosémide. Pour l'échantillon post- médicament prélever 10 minutes après le furosémide. Pour l'échantillon post-médicament 3 - prélever 15 minutes après le furosémide  Dosage de la FITC inuline Fluorescein isothiocyanate- Inulin L'inuline combiné à FITC pour déterminer le DFG, La FITC inuline est facilement dosé à l’aide d’un fluor-spectromètre.  Technique 2: Détermination du DFG chez la souris sans usage de chirurgie La présente étude décrit une technique de détermination du DFG chez des souris anesthésiée; celle-ci reçoit une injection unique de la FITC inuline. L’analyse de la fluorescence se fait dans 8 échantillons de sang par la décroissance exponentielle en deux phases. La mesure du DFG chez une souris prend 75 minutes. La manipulation ne nécessite aucune chirurgie, l’injection se fait dans le plexus rétro-orbitaire le prélèvement se fait dans la veine caudale. En utilisant des capillaires à hématocrite de 10 μl et une dilution de 1:10, il est possible de réduire la quantité totale de sang nécessaire à