Techniques de DFG chez le rat

Le débit de filtration glomérulaire (DFG) est mesuré par la clairance de l'inuline.
Cette technique nécessite une anesthésie et une préparation chirurgicale.
C'est la méthode de référence pour mesurer le DFG.
L'inuline marquée par la fluorescéine-isothiocyanate (FITC) permet une mesure facile des concentrations plasmatique et urinaire.
Le dosage de la concentration est réalisé à plusieurs temps pour calculer le DFG.

L'expérience se déroule chez des rats anesthésiés à l'isoflurane à 5%.
Un cathéter est placé dans l'artère fémorale pour surveiller la pression artérielle et la fréquence cardiaque, et pour prélever le sang.
Un autre cathéter est placé dans la veine fémorale pour la perfusion d'inuline-FITC. Le débit d'inuline est fixé à 1 ml/h pour 100 g de poids corporel. Ce cathéter est aussi utilisé pour injecter la furosémide.
Un troisième cathéter est dans la vessie pour collecter l'urine.
Les échantillons d'urine sont prélevés sur une période de 10 minutes.
Le volume urinaire est mesuré grâce à une balance numérique et doit être d'environ 0,2 ml.
L'urine collectée sert pour doser la FITC-inuline.
Des échantillons de sang et d'urine sont collectés avant et après l'injection de furosemide. Les échantillons sont pre, et post - médicamenteux avec les prélèvements séparés par 5, 10 et 15 minutes après.
Remarques:* La technique nécessite une anesthésie et une intervention chirurgicale. La concentration de FITC-inuline dans le sang et l'urine doit être mesurée scrupuleusement.

L'inuline combinée à la fluorescéine-isothiocyanate (FITC) est dosée à l'aide d'un fluorimètre.
Elle sert à déterminer le débit de filtration glomérulaire (DFG).

La méthode utilise une injection unique de FITC-inuline chez la souris anesthésiée.
L'analyse de la fluorescence est faite sur plusieurs échantillons de sang pour mesurer le DFG.
La procédure prend environ 75 minutes.
L'injection est faite dans le plexus rétro-orbitaire et les prélèvements se font dans la veine caudale de la souris.
Un rapport de dilution de 1:10 est utilisé, ce qui réduit la quantité de sang nécessaire.

La fonction rénale est explorée par la mesure du débit de filtration glomérulaire (DFG) et l'effet du furosemide sur le DFG.

Mesurer le taux de fluorescence en fonction de la concentration de FITC-inuline.
Tracer la courbe standard.

Volume urinaire pré-médicament est faible, entre 0,20 et 0,30 mL en 20 minutes.
Volume urinaire post-médicament est fort à 5,80 mL initialement avec une diminution progressive à 3,10 et 2,00 mL.
L'administration du médicament provoque une diurèse immédiate et une augmentation remarquable du volume urinaire, ce qui est caractéristique d'une action diurétique.

Sodium (Na) plasmatique pré-médicament est stable à 141–142 µmol/mL.
Sodium (Na) plasmatique post-médicament augmente à 143 µmol/mL.
Sodium urinaire pré-médicament diminue de 49 à 45 µmol/mL.
Sodium urinaire post-médicament augmente à 110 µmol/mL, puis se stabilise à 117 µmol/mL.
L'augmentation post-médicament de l'excrétion urinaire de Na indique que le médicament agit probablement sur la réabsorption tubulaire du sodium.

Potassium (K) plasmatique pré-médicament diminue de 5,1 à 5,0 µmol/mL.
Potassium (K) plasmatique post-médicament chute notablement à 4,6 µmol/mL puis se stabilise entre 4,0 et 3,7 µmol/mL.
Potassium urinaire pré-médicament diminue de 375 à 341,0 µmol/mL.
Potassium urinaire post-médicament diminue fortement à 19,5 µmol/mL. puis augmente à 33,5 µmol/mL.
Le médicament semble affecter la sécrétion tubulaire de potassium suite à une réduction de l'excrétion urinaire de K.

Inuline plasmatique pré-médicament : 17700–15250 µg/mL.
Inuline plasmatique post-médicament : chute importante à 447 µg/mL (Post-drug 1), avec une augmentation progressive à 970 et 1244 µg/mL.
Inuline urinaire : légères variations entre 62,9 et 66,9 µg/mL.
La concentration plasmatique d'inuline diminue après l'administration du médicament, probablement du à l'augmentation du volume urinaire. Les constantes concentrations urinaires indiquent que l'excrétion de l'inuline n'est pas affectée, ce qui confirme que l'inuline sert comme marqueur de filtration glomérulaire.

Les résultats sont rassemblés dans un tableau qui comprend les données de l'urine.
Les données sont reportées à la courbe pour déterminer la concentration de la FITC inuline dans les urines.

Les valeurs pré-médicaments de l'élimination de l'inuline (µg/mL) sont stables, suggérant une fonction rénale normale sans stimulation diurétique.
L'augmentation progressive post-médicament du débit de filtration glomérulaire est probablement due à l'effet diurétique du furosemide, qui inhibe la réabsorption du sodium dans l'anse de Henlé.
Le furosemide est un puissant diurétique qui agit au niveau de la branche ascendante de l'anse de Henlé en inhibant la réabsorption du sodium.
L'inhibition du co-transport des électrolytes (Na+, K+, et 2Cl-) sur la membrane cellulaire luminal de la branche ascendante de l'anse de Henlé par le furosémide.