Histoquímica de iones inorgánicos PDF

Histoquímica de iones inorgánicos Jorge Carrasco Sanhueza Tecnólogo Médico Morfofisiopatología y Citodiagnóstico Hospital Dr. Luis Calvo Mackenna  Generalidades En la categoría de iones inorgánicos se encuentran una serie de metales y algu...

Histoquímica de iones inorgánicos Jorge Carrasco Sanhueza Tecnólogo Médico Morfofisiopatología y Citodiagnóstico Hospital Dr. Luis Calvo Mackenna  Generalidades En la categoría de iones inorgánicos se encuentran una serie de metales y algunos no metales encontrados en estado fisiológico o patológico, y se organizan en: Minerales endógenos – Cobre – Calcio Minerales exógenos – Carbón – Silicio – Asbestos – Plomo – Berilio y aluminio – Plata Generalidades Su detección depende del grado de solubilidad y concentración Iones solubles: difunden a través del tejido y su localización no es in situ Iones insolubles, no difunden y permiten detección in situ: – compuestos insolubles: Sales de carbonato de calcio – complejos unidos a proteínas: Hemosiderina Generalidades Concentración: – Normal: – calcio , hierro y zinc – Elevada: – pueden ser demostrados solo cuando se presentan en alguna enfermedad. Ejemplo: depósitos de cobre. – Intoxicaciones: Métodos de estudio Histoquimico Los métodos histoquímicos para iones inorgánicos se clasifican en dos categorías: – El Producto visible coloreado es negro o del color de la sustancia inorgánica Ej: Perls – El compuesto coloreado es formado por quelación del metal con un ligando orgánico.  Métodos de estudio Histoquimico Quelacion: Fenómeno fisico-quimico donde una sustancia conocida “quelante” captura un ion metálico pesado formando un compuesto estable denominado “quelato” Se estabiliza por enlaces iónicos y enlaces coordinados Combinación Metal-EDTA= Quelato Métodos de estudio Histoquimico Quelación Metales fuertemente unidos a ligandos orgánicos no permiten su demostración. Ej: El hierro unido al grupo hemo de la hemoglobina en los eritrocitos.  Métodos de estudio Histoquimico Calcio: Alizarin red S Fosfatos y carbonatos: Von Kossa Hierro: Azul de Perls Cobre: Método de rodamina, método del acido rubeánico. Detección HQ de calcio: Calcio insoluble En forma de sal constituye hueso y dientes en forma de hidroxiapatita ((Ca10(PO4) 6(OH)2). Se detecta por método de Von Kossa. Los iones libres de calcio En sangre no se pueden detectar (Kiernan). El método del Yeso y del Oxalato causa formación de cristales de calcio insolubles, pero de localización imprecisa (Lynch) Depósitos anormales de calcio se presentan en: – Áreas necróticas con tuberculosis, infartos, ateromas – Forman sales de fosfato y carbonato de calcio. Detección HQ de calcio: Método de Alizarin Red S Fijación: NBF Cortes: en parafina o congelación El Alizarin Red S es un colorante derivado de la antraquinona.( C.I: 58005). Forma quelatos con el calcio, demostrando una gran cantidad de depósitos de color naranjo o rojo Es especifico a pH 4.2. (Bancroft), puede variar de 4 a 9 (Kiernan) Quelacion del calcio por parte del Alizarin Red S Método de Alizarin Red S – Depósitos de calcio en túbulos renales Método de Alizarin Red S – Depósitos de calcio en embrión de rata HE/Alizarin Red S en vaso calcificado Detección de iones de calcio: Método de Von Kossa Es un método para fosfatos y carbonatos asociados al calcio en tejidos calcificados. Se tratan los tejidos con nitrato de plata 1% Se reduce con luz solar o bajo un ampolleta de 100 watts durante 15 minutos Detección HQ de fosfatos y carbonatos: Método de Von Kossa Reacción química de los iones de plata, tras su reducción, forman complejos con los fosfatos y carbonatos. Forma depósitos de color negro Detección HQ de fosfatos y carbonatos: Método de Von Kossa Se trata con solución de tiosulfato de sodio Se contrasta con safranina. Es menos especifico que el Alizarin Red S Resultados: Sitios con fosfatos y carbonatos insolubles negro, café o amarillo Núcleos rosados o rojos Osteoide patológico (negro) con método de Von Kossa Depósitos de calcio con método de Von Kossa Detección HQ de Hierro: Método de Azul de Perls Detecta depósitos de Ferritina o hemosiderina que contienen Fe+3 Se tratan tejidos con solución de ferrocianuro y acido clorhídrico El HCL desenmascara el hierro de su forma de hidróxido Fe(OH)3 El ferrocianuro se une a los iones de fierro +3 y forma un compuesto coloreado insoluble de color azul 4Fe+3 + 3[Fe(CN)6]-4 Fe4[Fe(CN)6]3 Sustrato + Reactivo Producto final coloreado azul Azul de Pearls Detección HQ de Cobre Solo detectable en la enfermedad de Wilson (degeneración hepato-lenticular) se acumulan grandes cantidades del metal en fagocitos de: – Cerebro, hígado y cornea. El cobre se encuentra unido a proteínas y se libera con vapores de HCL. Métodos de estudio: Método del acido rubeánico. Método de la Rodamina. Detección HQ de Cobre: Método del acido rubeanico Permite usar cortes en parafina o congelación El acido rubeánico forma quelatos insolubles con el cobre, color verde oscuro El acido rubeánico solo reacciona con iones cuprosos Cu+1 Acido rubeanico y quelatos con el cobre Tinción de cobre con acido rubeánico Detección HQ de Cobre: Método de la rodanina La rodamina se une solo a iones cupricos Cu+2 Útil para detectar cobre unido a proteínas Probablemente el cobre se une al hidrogeno unido al nitrógeno. Forma un compuesto de color rojo cuando se une al cobre. Rodamina y sitio de unión del cobre Detección HQ de Cobre: Método de la rodamina El acido rubeánico y la rodamina poseen la misma sensibilidad histoquímica para detectar cobre. La rodamina entrega una coloración proporcional a la concentración de cobre en el tejido. Tinción con rodamina de depósito de cobre en hígado.