Pigmentos: Clasificación y Métodos de Estudio (PDF)

Pigmentos --> Sustancias coloreadas * Deficiencia enzimática - Hemosiderina (sólo en órganos de SRE --> Médula ósea, bazo e higado) Hemo = Hierro + Pirrol Histoquímica de pigmentos Jorge Carrasco Sanhueza T:M:Morfofisiopatología y Citodiagnóstico...

Pigmentos --> Sustancias coloreadas * Deficiencia enzimática - Hemosiderina (sólo en órganos de SRE --> Médula ósea, bazo e higado) Hemo = Hierro + Pirrol Histoquímica de pigmentos Jorge Carrasco Sanhueza T:M:Morfofisiopatología y Citodiagnóstico Hospital Dr. Luis Calvo Mackenna Clasificación general de pigmentos 1.- Origen endógeno 1.1.- Pigmentos endógenos a.- Hematógenos b.- No hematógenos 1.2.- Minerales endógenos 2.- Origen exógeno a. Pigmentos y minerales exógenos b. Artefactos 1. Pigmentos de origen endógeno: origen de su acumulación Se producen en el tejido y cumplen alguna función fisiológica o son parte del producto de alguna actividad metabólica. 1. Alteraciones metabólicas con productos celulares normales (ritmo metabólico inadecuado) 2. Alteraciones genéticas que afectan el metabolismo normal 3. Acumulación de sustancia anormal. Acúmulos intracelulares o daño celular 1. Pigmentos de origen endógeno: origen de acumulación  2.- Pigmentos de origen exógeno Pigmentos que ingresan al organismo por vía aérea o contacto. la mayoría de ellos son minerales con poca pigmentación. No cumple funciones biológicas. Los pigmentos de origen artefactual son producto de la interacción de los tejidos con sustancias químicas durante su procesamiento.  Pigmentos endógenos Pigmentos artefactuales Clasificación Hematogenos Formalina Malaria general de Hemosiderina Hemoglobina Mercurio Oxido crómico pigmentos Pigmentos biliares Almidón Precipitados de plata No hematogenos Pigmentos y minerales exógenos Pigmento de tatuajes Melanina Pigmento de amalgama Lipopigmentos Carbón Silicio Asbesto Minerales endógenos Plomo Calcio Berilio y aluminio Cobre Plata  Pigmento de color amarillo-café, intracelular y se acumula en macrófagos. Compuesto insoluble formado por hidróxido férrico mas una proteína llamada apoferritina (De vital importancia para el transporte de oxigeno en la hemoglobina). Hemosiderina 30% del hierro se almacena en el SRE, especialmente en la medula ósea.( hemosiderosis). El hierro se incorpora en la producción de hemoglobina durante la formación de hematíes.  Hemosiderina Por exceso de hierro (inyecciones o transfusión de sangre o problemas metabólicos) se produce sobrecarga de hemosiderina. Por descomposición de la hemoglobina en la globina y el grupo hemo, y posteriormente de éste en hemosiderina y biliverdina. Hemosiderina Soluble en ácidos, insoluble en álcalis, alcohol y agua La formalina no Ferritina remueve iones férricos Grupo Hemo  MÉTODO DE PERL’S PARA IONES FÉRRICOS Detecta depósitos de Ferritina o hemosiderina que contienen Fe+3 Se tratan tejidos con solución de ferrocianuro y ácido Hemosiderina clorhídrico El HCL desenmascara el hierro de su forma de hidróxido Fe(OH)3 El ferrocianuro se une a los iones de fierro +3 y forma un compuesto coloreado insoluble de color azul 4Fe+3 + 3[Fe(CN)6]-4 Fe4[Fe(CN)6]3 Sustrato + Reactivo Producto final coloreado azul Pigmentos de origen hematogenos: Hemosiderina La solución de HCL y MÉTODO DE PERL’S PARA tiempo de tinción varía ferrocianuro se debe IONES FÉRRICOS en función de la cantidad. preparar al momento de usar ( proporción 1:1). Otros métodos menos utilizados son: Se debe usar control Método de Lillie para iones Contraste positivo férricos y ferrosos Método de Hukill y Putt’s para iones férricos y ferrosos Control con exceso no es favorable - Ideal es ir al término medio Pearls contrastado con fast red Hemoglobina Proteína básica conjugada responsable del transporte de O2 y CO2 en la sangre. Hemoglobina Grupo Hemo  TECNICA DE LA BENCIDINA Aplicada sobre tejidos fijados en formalina e Hemoglobina incluidos en parafina Se ha dejado de utilizar debido al efecto carcinógeno de la bencidina Se basa en una reacción denominada “pseudoperoxidásica”  METODO DE LA BENCIDINA La hemoglobina libera oxigeno a partir de agua oxigenada este oxida la bencidina que es incolora hacia un compuesto de color verde Hemoglobina Actualmente se puede utilizar diaminobencidina que posee menor riesgo carcinógeno Reacción de pseudoperoxidas a en eritrocitos por técnica IHQ  Billirrubina --> Sin oxidar Biliverdina --> Oxidado Pigmentos biliares Pertenecen a este grupo la bilirrubina, biliverdina y hematoidina, todos con propiedades físicas y químicas distintas Estado del hígado trasplantado y/o eventos metastásicos Vida útil de G.R. El grupo hemo se fragmenta formando iones férricos y el anillo pirrolico Este anillo sin su ion de hierro se denomina biliverdina de color verde a azul Hematoidina --> Sólo se va a ver hemorrágico y ocurre por sobreoxidación  Pigmentos biliares La biliverdina se transporta a los riñones en donde se reduce a bilirrubina de color amarillo anaranjado En casos de hemorragias antiguas como en bazo o cerebro se forma un depósito extracelular denominado hematoidina de color amarillo brillante  Derivado de los lípidos por oxidación. Origen Tipo de pigmento Se acumula en múltiples órganos, pero es más complejo Ubicación en las fibras cardíacas. Los pigmentos biliares son microscópicamente parecidos a la Lipofucsina. PAS Nelsen Sudan Black Pigmentos Diferencia: Los pigmentos biliares no son biliares autofluorescentes y no generan birrefringencia, la lipofucsina si. Los pigmentos biliares en casos de ictericia acentuada puede acumularse en túbulos renales En general los acúmulos son de color café- amarillento Pigmento biliar en túbulos renales  TECNICA DE HALL PARA BILIRRUBINA Para tejido fijado en formalina y cortes en parafina, es permanente. Pigmentos Utiliza el reactivo de Fouchet recién biliares preparado (TCA y cloruro férrico) La bilirrubina adquiere un color verde. Se contrasta son solución de Van Gieson Técnica de Hall para bilirrubina  Es un pigmento de color café claro a negro Pigmentos de origen no Se encuentra normalmente en melanocitos de la hematogenos: piel, en ojos, folículos del cabello, sustancia gris del cerebro. Melanina Bajo condiciones patológicas se encuentra en: Células tumorales de nevos benignos Melanomas Lugol --> Sobreoxidación Hiperpigmentaciones de la melanina Se forma a partir de la fenilalanina Por oxidación y reoxidación forma melanina Catalizada por la tirosinasa o DOPA oxidasa  Se produce a partir de tirosina Pigmentos de origen no Mediante acción de la tirosinasa (DOPA oxidasa). hematogenos: Melanina Esta enzima actúa lentamente produciendo DOPA (dihidroxifenilalananina), La DOPA reacciona con la misma enzima polimerizando y formando melanina. Pigmentos de La melanina y sus precursores (DOPA) son origen no capaces de reducir plata y ferricianuro. hematogenos: Melanina Son insolubles en solventes orgánicos, debido a que se unen a proteínas en los melanosomas Se puede blanquear por agentes oxidantes fuertes Pigmentos de origen no Métodos de estudio hematogenos: Reducción de plata de Fontana-Masson Melanina Reducción de Schmorl’s con ferrocianuro-férrico Método enzimático de reacción DOPA Fluorescencia Inmunohistoquimica CD1A --> Productores de melanina CD68 --> Macrófagos e histiocitos Melan A --> 100% productoras de melanina HDB45 Langerina Melanina en piel con H-E  REDUCCIÓN DE PLATA DE FONTANA-MASSON Impregnación argentica: Es inespecífica Pigmentos de Se utiliza una solución de plata amoniacal durante 30 a 40 minutos a 56 ° C. origen no Contraste con rojo nuclear o safranina La melanina adquiere un color negro intenso hematogenos: Melanina Fontana Masson, contraste con safranina  REDUCCIÓN DE SCHMORL’S Pigmentos de La melanina reduce el ferricianuro a ferrocianuro origen no produciendo un color azul hematogenos: Método inespecífico, puede teñir lipofucsina y pigmento biliar Melanina Utiliza una solución de ferricianuro de potasio y cloruro férrico, preparada antes de usar. Se puede contrastar con rojo nuclear o safranina. La melanina adquiere un color azul oscuro Reducción de Schmorl’s  MÉTODO DE DOPA OXIDASA Pigmentos de origen no Utiliza la capacidad de la enzima DOPA oxidasa hematogenos: presente en los melanosomas para oxidar DOPA Melanina y formar un compuesto insoluble de color café. Altamente especifico para la melanina  MÉTODO DE DOPA OXIDASA Pigmentos de Debe usarse en cortes por congelación. origen no hematogenos: Utiliza dihidroxifenilalanina en tampón fosfato a Melanina pH 7.4 Se incuba durante 45 minutos a 37° C Utiliza contraste de carmín o verde metilo Las zonas con actividad DOPA-oxidasa adquieren color negro-parduzco Método de DOPA- oxidasa  Método de IHQ 1.1.b.- Es mucho mas especifica Pigmentos de Utiliza anticuerpos HMB-45, Melan-A y S100 para los cuales la melanina es + origen no hematogenos: Blanqueamiento de la melanina Melanina Utiliza peróxido de hidrogeno 10% durante 1 a 2 días También permanganato de potasio al 0,25% y acido oxálico al 5% IHQ con HMB-45 en piel  A este grupo pertenecen la lipofucsina y el Pigmentos de pigmento ceroide origen no hematogenos: Lipofucsina Lipopigmento De color amarillo-café a rojizo-café s Producto de procesos oxidativos de lípidos y lipoproteínas. Esta oxidación ocurre lenta y progresivamente. El pigmento proporciona una tinción variable, con diferentes colores, diferentes tamaños y textura.  Lipofucsina Pigmentos de Se puede encontrar en procesos fisiológicos o origen no patológicos, generalmente de células envejecidas Hepatocitos, mezclados con otros pigmentos hematogenos: Células musculares cardiacas de personas Lipopigmento ancianas s Corteza adrenal en pacientes tras prolongado stress Testículos, especialmente en células de leydig Ovario, tras la involución a cuerpo lúteo Cerebro tras hemorragia o infarto Desordenes lipídicos Células con acumulo de pigmento lipofucsina  Pigmentos de origen no hematógenos: Lipopigmentos Se puede demostrar por diversos métodos: Reacción de PAS Reducción de Schmorl’s Método de Zhiel-Neelsen Sudan Black B Fontana Masson Etc.  Pigmento ceroide Es una lipofucsina de fase inicial de formación. Pigmentos de Posee características químicas distintivas de la lipofucsina origen no Adopta un color parduzco hematogenos: Es PAS negativa Sudan Black negativa Lipopigmento Azul de Nilo negativo s Posee autofluorescencia y también se tiñe con el método de Zhiel-Neelsen Pigmentos Pigmento antracótico Se denomina a todo acúmulo de carbono de origen exógeno que se produce tras inhalación a través de los pulmones y que puede provenir exógeno: de Smog, polvo y humo de tabaco Pigmentos Pigmento de tatuajes Tintes con óxidos de hierro u orgánico son y digeridos por macrófagos que almacenan el material de por vida. minerales exógenos Tatuaje de amalgama es una lesión benigna causada por la implantación de material de relleno dental en los tejidos Pigmento antracotico en pulmón Tatuaje cutáneo Pigmentos de origen exógeno: Pigmentos artefactuales Pigmento formolado La fijación prolongada en formaldehído no tamponado provoca la formación de “pigmento formolado” Se elimina con ácido pícrico saturado en etanol durante 1 hora  Pigmento malarico se observa en macrófagos de diversos órganos junto a hemosiderina. Es negro y granular. Producido por los plasmodios de la malaria a partir de la hemoglobina, contiene fierro difícil de evidenciar. Se observa especialmente en el hígado, bazo, ganglio linfático, que adquieren un color gris o gris negruzco. Pigmentos de origen exógeno: Pigmentos artefactuales  Pigmentos de origen exógeno: Pigmentos artefactuales Pigmento de sales de mercurio precipitados de color negro-café interfieren con la morfología normal del tejido Pigmento de oxido crómico Tras la fijación con sales de cromo se deben lavar los tejidos durante 12 a 48 horas en agua corriendo para evitar la formación de precipitados pigmentados  Minerales endógenos Cobre Calcio Pigmentos y minerales exógenos PARA CLASE DE Carbón HISTOQUIMICA Silicio Asbestos DE IONES Plomo Berilio y aluminio INORGANICOS Plata ETC Pigmentos --> Sustancias coloreadas * Son insolubles en agua, alcohol y solventes orgánicos - Considerar: * Si son endógenos o exógenos * Si pueden teñirse - Coloración por oxidación * Deficiencia enzimática - Hemosiderina (sólo en órganos de SRE --> Médula ósea, bazo e higado) Hemo = Hierro + Pirrol Rupura forma hierro ferroso * Ferro K + HCL Ión férrico (Fe 3+) + --> Ferrocianuro férrico --> Azul de Prusia * Blanqueamiento como grupo control para bloquear melanina --> Acumulación debido a problemas de transporte activo de sustancias * Ac no puede utilizarse en amiloide debido a que puede tener posibles origenes y/ o la conformación física. * Puede darse en condiciones fisiológicas en el aumento de la edad