Tema 6: Microorganismos Industriales y Enología

La identificación de microorganismos en la industria es crítica para conocer la enología de la fermentación, determinar la dominancia de las levaduras inoculadas, y evitar la reselección de cepas vínicas.

Técnicas clásicas como el análisis morfológico, bioquímico y fisiológico se utilizan para identificar microorganismos.

Las levaduras se clasifican según su morfología, reproducción y formación de pseudomicelio.

La observación microscópica de la morfología de colonia, la reproducción (asexual y sexual) y la formación de pseudomicelio son esenciales para la identificación de levaduras.

El medio de esporulación a 25ºC durante 3-7 días permite observar la formación de esporas en las levaduras.

Las esporas de las levaduras se pueden observar mejor mediante tinción en un medio de esporulación.

El pseudomicelio es un signo de crecimiento específico de las levaduras e indica diversas formas de alargamiento y formación de blastosporas.

El análisis morfológico, bioquímico y fisiológico de las levaduras es un proceso complejo que requiere tiempo y experiencia.

Un método para determinar si un microorganismo puede utilizar un compuesto específico como fuente de nitrógeno.

Un método para determinar si un microorganismo puede utilizar un compuesto específico como fuente de carbono.

Un método para evaluar la capacidad de utilización de una fuente de carbono o nitrógeno por parte de un microorganismo. Se utiliza un medio sólido sin fuente de carbono o nitrógeno, y se coloca el compuesto a probar en un punto de la placa.

Conjunto de pruebas que se realizan de forma rápida y con pequeños volúmenes para identificar un microorganismo.

Conjunto de pruebas para la identificación de levaduras en el vino.

Prueba que se realiza en medios sólidos para determinar la capacidad de un microorganismo para asimilar un compuesto. En lugar de una fuente de carbono o nitrógeno, se utiliza el compuesto a analizar en un punto determinado de la placa.

Método para determinar si un microorganismo puede utilizar un compuesto específico como fuente de carbono en un medio sólido.

Método para determinar si un microorganismo puede utilizar un compuesto específico como fuente de nitrógeno en un medio sólido.

Una variante de la RAPD que utiliza primers universales más largos y una temperatura de hibridación mayor, mejorando la reproducibilidad y estandarización.

Una modificación de RAPD que utiliza dos primers al mismo tiempo, uno específico y otro aleatorio, mejorando la reproducibilidad y reduciendo el número de bandas.

Una técnica utilizada para diferenciar microorganismos mediante el análisis de restriccion del ADN ribosomal amplificado.

Segmentos de espacio entre las regiones codificantes del ADN ribosomal (18S, 5.8S, 28S).

Espaciador que separa la unidad de repetición del gen 5S del ADN ribosomal.

Técnicas que dependen de la amplificación de secuencias de ADN espaciadoras que codifican para los RNA ribosómicos, sin afectar al organismo.

Un único cebador corto (10-15 nucleótidos) que híbrida aleatoriamente con numerosas zonas del ADN, permitiendo estimar la similitud entre organismos.

Diferencia entre las técnicas basadas en primers aleatorios: se utiliza un solo primer en RAPD, mientras que se emplean dos primers, uno específico y otro aleatorio, en Multiplex RAPD-PCR.

Las endonucleasas de restricción son enzimas que cortan el ADN en secuencias específicas. Esta técnica se utiliza para identificar fragmentos de ADN únicos en cada especie, creando un perfil de restricción característico.

La huella genética del ADN total, también conocida como 'fingerprint', es una técnica que utiliza endonucleasas de restricción para identificar diferencias en el ADN. Este método se utiliza para analizar la estabilidad genómica y el parentesco entre dos cepas.

El análisis de restricción (RFLP) del ADN mitocondrial es una técnica que identifica patrones de restricción específicos en el ADN mitocondrial. Este método se utiliza para diferenciar cepas de levaduras, seguir la propagación de una cepa inoculada y analizar polimorfismos intraespecíficos.

La técnica de PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) es una técnica de amplificación del ADN que permite copiar fragmentos específicos de ADN. Este método se utiliza para detectar y analizar fragmentos específicos de interés en una muestra.

La técnica de PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) es una técnica de amplificación del ADN que permite copiar fragmentos específicos de ADN. Este método se utiliza para detectar y analizar fragmentos específicos de interés en una muestra.

Esta técnica se utiliza para diferenciar distintas cepas de Saccharomyces cerevisiae, analizar el polimorfismo intraespecífico del ADN mitocondrial y seguir la implantación de una cepa inoculada en una fermentación.

Esta variante de la técnica RFLP separa el ADN nuclear del mitocondrial. Al utilizar enzimas que cortan preferentemente regiones ricas en G+C, el ADN nuclear es altamente fragmentado, mientras que el ADN mitocondrial permanece relativamente intacto, permitiendo su análisis.

Esta variante RFLP separa el ADN nuclear del mitocondrial. Al utilizar enzimas que cortan preferentemente regiones ricas en G+C, el ADN nuclear es altamente fragmentado, mientras que el ADN mitocondrial permanece relativamente intacto, permitiendo su análisis.

La observación microscópica de los mohos requiere un procedimiento especial debido a la fragilidad de sus hifas. Se cultivan directamente sobre el portaobjetos para facilitar la observación. El medio de cultivo utilizado es similar al empleado para el pseudomicelio, como PDA o Agar Sabouraud.

La reproducción de los mohos se caracteriza por la formación de esporas, que pueden ser asexuales (por ejemplo, conidios) o sexuales (por ejemplo, zigosporas). Estas esporas se dispersan en el ambiente y, al encontrar condiciones favorables, germinan para dar lugar a nuevos micelios.

El agar acetato al 1% es un medio selectivo para el crecimiento de Zygosaccharomyces, un tipo de levadura. El agar cicloheximida inhibe la síntesis de proteínas en eucariotas, excepto en Brettanomyces, que es resistente a este producto.

La fermentación de azúcares se utiliza para identificar levaduras. Se inocula una suspensión de levadura en un medio líquido con azúcar y se observa la producción de gas en una campana de Durham. La presencia de gas indica que la levadura está fermentando el azúcar.

La asimilación de compuestos carbonados se utiliza para identificar levaduras. Se inocula una suspensión de levadura en un medio sólido con un compuesto de carbono y se observa el crecimiento de la levadura. La presencia de crecimiento indica que la levadura está asimilando el compuesto.

Las Bacterias se pueden clasificar de acuerdo a su morfología, como esféricas (cocos), cilíndricas (bacilos), helicoidales (espirales) y formas intermedias. También se puede clasificar por cómo se agrupan: en cadena, en pareja, en tétradas, cubos, racimo.

Los bacilos son bacterias con forma alargada o cilíndrica. Pueden aparecer en cadena, empalizada o en otras formas, dependiendo de la especie bacteriana.

El método de cultivo en agar es una técnica común para el estudio de levaduras. El agar es un gel que se utiliza como base para el crecimiento de microorganismos. Se pueden usar diferentes nutrientes y sustancias para seleccionar el tipo de levadura que se quiere cultivar.

Las regiones ITS, ETS e IGS son secciones del ADN de las levaduras que varían mucho entre especies. Los genes ribosomales, por otro lado, son muy similares en diferentes especies. Al amplificar estas regiones y cortarlas con enzimas de restricción, se crean patrones únicos (ribotipos) para cada especie.

Método de PCR que se utiliza para diferenciar cepas e incluso especies de levaduras. Se basa en la amplificación y la posterior digestión con enzimas de restricción de regiones ITS, ETS o IGS, que son altamente variables entre especies.

Técnica sencilla que aprovecha las diferencias en la secuencia de ADN para diferenciar entre levaduras. Se amplifica un gen específico (RNAr) y luego se permite que las cadenas de ADN se hibriden (se unan). Si las cadenas son de la misma especie, se unirán perfectamente, pero si son de diferentes especies, se unirán de forma imperfecta, creando bandas de ADN de diferentes tamaños.

Los intrones son segmentos del ADN que no se traducen a proteínas y se eliminan durante el procesamiento del ARN mensajero (ARNm). Los intrones tienen secuencias específicas en sus extremos que son esenciales para su eliminación. Al utilizar cebadores (primers) que hibridan con estos extremos, se amplifican fragmentos de ADN que pueden usarse para diferenciar entre levaduras.

Repetición corta de secuencias de ADN que varían en número y en la distribución entre individuos. Estas repeticiones pueden usarse para crear perfiles de ADN únicos para cada estirpe de levadura.

Técnica de PCR que se utiliza para identificar diferentes estirpes de levaduras. Se basa en la amplificación de microsatélites (SSR), que son regiones altamente variables del genoma.