Techniques de coupe en histologie

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Questions and Answers

Quelle est l'épaisseur des coupes nécessaires pour permettre le passage des photons ou des électrons?

1-2 µM

5-15 µM

3-10 µM (correct)

10-12 µM

Quel est l'objectif principal du démoulage du bloc figé?

Réduire la taille du bloc

Faciliter la coupe en sections (correct)

Éliminer l'excès de paraffine

Rendre le bloc plus solide

Quel est le rôle du microtome dans le processus de coupe des échantillons?

Coupe le bloc en sections fines (correct)

Chauffe le bloc pour démouler

Élimine la paraffine de l'échantillon

Colle le bloc sur le support

Comment le bloc avance-t-il après chaque coupe?

Sept micromètres Signup and view all the answers

Que se passe-t-il après que le ruban est découpé en groupes?

Chaque morceau est déposé sur une lame humide Signup and view all the answers

Pourquoi les lames sont-elles placées sur une platine chauffante?

Pour déplier les rubans Signup and view all the answers

Quel matériau est utilisé pour coller le bloc sur le support?

Paraffine liquide Signup and view all the answers

Quel est l'aspect important à considérer lors de la préparation des coupes?

Les sections doivent être lisses pour un meilleur passage des photons Signup and view all the answers

Quel est l'objectif principal de la fixation lors de préparation des échantillons?

Rendre l'échantillon imputrescible. Signup and view all the answers

Quelle méthode n'est PAS utilisée dans le processus de fixation?

Inclusion dans paraffine Signup and view all the answers

Quel est le but de la déshydratation dans la préparation des échantillons?

Remplacer l’eau par un solvant compatible. Signup and view all the answers

Quel processus suit directement la déshydratation?

Inclusion Signup and view all the answers

Quel type de résine est couramment utilisé pour l'inclusion dans les préparations histologiques?

Paraffine Signup and view all the answers

Quelles structures sont stabilisées par les fixateurs comme le glutaraldéhyde?

Les protéines Signup and view all the answers

Pourquoi est-il nécessaire de réaliser des coupes après inclusion?

Pour observer les détails cellulaires. Signup and view all the answers

Quel est le rôle des techniques histologiques dans l'observation de cellules?

Préparer des échantillons visibles au microscope Signup and view all the answers

Quel est l'objectif principal des techniques de coloration et de contraste ?

Rendre visible certaines structures Signup and view all the answers

Quelle technique est utilisée pour mettre en évidence les polysaccharides ?

Technique APS Signup and view all the answers

Quel réactif est utilisé en combinaison avec l'acide chlorhydrique pour mettre en évidence l'ADN ?

Réactif de Schiff Signup and view all the answers

Quelles structures les polysaccharides tels que le glycogène et l'amidon libèrent-ils lors de leur hydrolyse par l'acide périodique ?

Groupements aldéhydiques Signup and view all the answers

Pourquoi est-il nécessaire d'effectuer un contrôle lors de la mise en évidence de l'ADN ?

Pour s'assurer de l'absence d'aldehydes non spécifiques Signup and view all the answers

Quel type de précipité est observé lors de la coloration de l'ADN par la réaction de Feulgen ?

Précipité rouge Signup and view all the answers

Quel est le rôle de l'acide chlorhydrique dans la mise en évidence de l'ADN ?

Hydrolyse des bases puriques de l'ADN Signup and view all the answers

Quelle est la première étape de la mise en évidence des polysaccharides avec la technique APS ?

Hydrolyse des liaisons a-glycol Signup and view all the answers

Quel est le but principal de la réaction de Feulgen ?

Mettre en évidence l'ADN Signup and view all the answers

Pourquoi est-il nécessaire d'avoir un contrôle lors de la mise en évidence de l'ADN ?

Pour s'assurer que la coloration n'est pas due à des fonctions aldéhydiques non spécifiques Signup and view all the answers

Quel traitement est appliqué à la coupe contrôle pour la mise en évidence de l'ADN ?

Traitement avec DNAse Signup and view all the answers

Que démontre l'absence de coloration dans la coupe avec Feulgen ?

L'absence d'ADN Signup and view all the answers

Quels résultats peuvent indiquer la présence de polysaccharides dans une préparation ?

Coloration positive après traitement avec APS Signup and view all the answers

Comment peut-on différencier les polysaccharides des fonctions aldéhydiques dans une coupe ?

En utilisant des contrôles spécifiques comme le traitement à l'APS Signup and view all the answers

Quelle est la fonction de la réaction de Schiff dans les méthodes de coloration ?

Détecter les aldéhydes et les sucres Signup and view all the answers

Quel serait le résultat attendu si un échantillon contient de l'ADN après traitement avec DNAse ?

Absence de coloration Signup and view all the answers

Quelle est la principale fonction de la coloration dans la préparation des lames?

Rendre visible certaines structures Signup and view all the answers

Quel est le rôle des colorants acides et basiques dans la coloration au May-Grünwald?

Avoir des affinités sélectives pour certaines structures Signup and view all the answers

Quel est l'effet de l'acidophilie dans la coloration des cellules?

Les éléments basiques retiennent l'éosine Signup and view all the answers

Quelles cellules sont principalement colorées en bleu violet en raison de la basophilie?

Les monocytes et plaquettes Signup and view all the answers

Qu'est-ce que la neutrophilie dans le contexte de la coloration?

Les colorants acide et basique sont retenus l'un et l'autre Signup and view all the answers

Quel type de coloration est utilisé pour les granulations des éosinophiles?

Coloration au Giemsa Signup and view all the answers

Quel changement de couleur est caractérisé par la métachromasie?

Une modification de couleur en se fixant sur une structure Signup and view all the answers

Pourquoi les noyaux des cellules peuvent apparaître colorés en rose/violacé?

Ils contiennent des protéines basiques Signup and view all the answers

Qu'est-ce qui est principalement coloré en rouge par l'azur de méthylène?

Les granulations azurophiles Signup and view all the answers

Quelle durée de séchage est requise après l'élimination de l'eau excédentaire?

48 heures Signup and view all the answers

Study Notes

TD3: Préparation d'échantillons pour l'observation en microscopie à champ clair

Objectif principal : Préparer des échantillons biologiques pour une observation microscopique claire.
Techniques histologiques : Nécessaires pour observer les cellules dans un tissu.
Étapes de préparation :
- Fixation : Conserver l'échantillon dans un état proche du vivant tout en le préservant de la décomposition. Méthodes possibles : congélation à -20°C, fixation à la chaleur (frottis), fixateurs chimiques (formol, glutaraldéhyde, acide acétique, acide picrique). Stabilisation des protéines par pontage.
- Déshydratation : Remplacer l'eau par un solvant compatible avec le milieu d'inclusion, exemple: une série d'alcools (70%, 80%, 90%, 95%, 100% EtOH), suivis d'un solvant comme le xylène, avant l'inclusion en paraffine.
- Inclusion : Durcir l'échantillon dans un milieu solide (par exemple la paraffine), ce qui le rend découpable. Ceci permet la réalisation d'un bloc. Cela nécessite l'emploi de moules.
- Coupes : Prélever des tranches très fines (3-10 μm) de l'échantillon durci à l'aide d'un microtome.
- Coloration : Rendre visibles certaines structures cellulaires à l'aide de colorants (affinités topographiques ou cytochimiques ou de fluorochromes). Exemple: coloration acide et basique (MGG sur frottis sanguin).

1. Fixation

But : Préserver l'intégrité structurale et la composition chimique de l'échantillon.
Méthodes physiques : Congélation à -20°C ou fixation à la chaleur (frottis).
Méthodes chimiques : Fixateurs chimiques comme le formol, le glutaraldéhyde ou l'acide acétique.

2. Déshydratation

But : Remplacer l'eau de l'échantillon par un solvant compatible avec le milieu d'inclusion.
Mécanisme : Une série d'alcools croissants à 100% d'éthanol (EtOH), suivis d'un solvant organique (xylène) pour être inclu en paraffine.

3. Inclusion

But : Durcir l'échantillon pour permettre sa découpe.
Méthode : Immersion dans une résine liquide (par exemple la paraffine). Ceci forme un bloc.

4. Coupes

But : Obtenir des sections très fines de l'échantillon pour la microscopie.
Technique : Utiliser un microtome pour obtenir des coupes fines (3-10 μm).

5. Coloration

But : Mettre en évidence des structures cellulaires ou des molécules spécifiques.
Méthodes : Une coloration topographique, réactions cytologiques, utilisation de fluorochromes. Exemple donné de la coloration acide-basique (MGG).

Autres aspects importants

Préparation des moules d'inclusion : Créez des formes permettant le maintien de l'échantillon à durcir dans la paraffine.
Coulage de la paraffine : Insérer l'échantillon dans un moule et le remplir avec la paraffine fondue.
Dépot dans la paraffine : Placer l'échantillon dans le moule avant que la paraffine ne soit durcie.
Déhumage du bloc figé : Retirer l'échantillon du moule.
Préparation du bloc à être coloré : Préparation des lames avec l'échantillon correctement disposé pour la coloration après le traitement.
Collage du bloc : Fixer le bloc correctement sur le support pour le microtome.
Mise en place du bloc sur le microtome
Création d'un ruban : Coupes successives assemblées pour la coloration
Mise en évidence de l'ADN : La réaction de Feulgen est utilisée pour mettre en évidence l'ADN.
Mise en évidence du polysaccharide utilisant la réaction APS (Acide périodique - Schiff)
Contrôle : Contrôles nécessaires dans les experiements de coloration pour garantir la validité des observations (ex : coupe contrôle sans le traitement du Feulgen).

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Description

Ce quiz teste vos connaissances sur les techniques de coupe utilisées en histologie. Vous découvrirez l'importance des coupes, le fonctionnement du microtome et les protocoles essentiels dans le processus d'histotechnique. Êtes-vous prêt à mettre à l'épreuve votre expertise en préparation d'échantillons?