30 Questions
¿Cuál es el objetivo principal de la electroforesis en gel de agarosa en la técnica de PCR?
Separar los fragmentos de ADN generados según su longitud
¿Qué tipo de electroforesis se utiliza para fragmentos de ADN pequeños?
Electroforesis en acrilamida
¿Qué se utiliza para determinar el tamaño de los productos de la PCR?
Un marcador de peso molecular de ADN
¿Cuál es la característica de la agarosa que permite la migración de las moléculas cargadas?
Sus espacios entre sí
¿Cómo se aplican las moléculas cargadas en la electroforesis en gel de agarosa?
Con un campo eléctrico
¿Por qué los fragmentos de ADN migran hacia el polo positivo en la electroforesis en gel de agarosa?
Porque tienen carga negativa
¿Cuál es la relación entre la velocidad de migración y el tamaño de los fragmentos de ADN en la electroforesis en gel de agarosa?
La velocidad de migración es inversamente proporcional al tamaño de los fragmentos de ADN
¿Cuál es el propósito del paso 12 en el proceso de extracción de ADN?
Secar la membrana completamente para evitar interferencias en aplicaciones posteriores
¿Cuál es la concentración mínima de ADN requerida para la PCR?
100 a 500 ng/µl
¿Cuál es el objetivo del paso 14 en el proceso de extracción de ADN?
Despegar el ADN de la membrana
¿Qué se utiliza para medir la calidad y cantidad de ADN presente en cada una de las muestras?
Espectrofotómetro (Biodrop)
¿Por qué es importante evitar el contacto entre la columna QIAamp MinElute y el líquido de desecho?
Para evitar el arrastre de etanol en el eluido
¿Cuál es el valor de pureza del ADN que se obtiene del nanodrop?
Relación de Absorbancia a 260/280 nm
¿Cuál es la temperatura ambiente requerida para el paso 14 en el proceso de extracción de ADN?
15-25°C
¿Cuál es el objetivo principal del kit QIAamp DNA Micro?
Purificar ADN genómico a partir de sangre
¿Qué característica del kit QIAamp DNA Micro asegura la manipulación segura de muestras potencialmente infecciosas?
La ausencia de contaminación cruzada entre muestras
¿Cuál es el producto final del procedimiento QIAamp DNA Micro?
ADN purificado
¿Cuál es el objetivo principal de la electroforesis en gel de agarosa?
Separar fragmentos de ADN según su peso molecular
¿Qué propiedad del kit QIAamp DNA Micro permite la manipulación segura de muestras potencialmente infecciosas?
La desnaturalización de las proteínas
¿Cuál es el resultado final del procedimiento QIAamp DNA Micro en términos de pureza del ADN?
ADN puro libre de impurezas
¿Cuántos pasos generales tiene el procedimiento QIAamp DNA Micro?
4
¿Cuál es la concentración mínima de agarosa para separar fragmentos de ADN grandes de varias kpb?
0.7%
¿Por qué se mezclan las muestras de ADN con un tampón de carga que contiene glicerol?
Para incrementar la densidad de las muestras
¿Qué propiedad tiene el colorante gel red que permite visualizar el ADN en los geles?
Es fluorescente cuando se ilumina con luz ultravioleta
¿Qué tipo de enzima se utiliza para generar fragmentos de ADN conocidos para utilizarlos como marcadores de peso molecular?
Enzima de restricción
¿Cuál es el propósito de utilizar marcadores de tamaño conocido en la electroforesis en gel de agarosa?
Para calcular el peso molecular de las muestras de ADN
¿Cómo se prepara un gel de agarosa al 1,2%?
Pesar 1 g de agarosa y llevarlo a un erlenmeyer conteniendo 80 ml de TBE 1x
¿Qué se utiliza para sumergir los geles en la electroforesis en gel de agarosa?
Un tampón comúnmente utilizado es TBE 1x
¿Por qué se utiliza la electroforesis en gel de agarosa en la técnica de PCR?
Para separar fragmentos de ADN de diferentes tamaños
¿Cuál es la función de los colorantes visibles cargados negativamente en la electroforesis en gel de agarosa?
Actúan de indicadores del avance de las muestras
Study Notes
Extracción de ADN genómico
- El método de extracción de ADN genómico utilizado es óptimo para muestras de sangre pequeñas y utiliza el kit comercial QIAamp DNA Micro Kit.
- El kit combina propiedades de unión selectiva para purificar ADN genómico en menos de 30 minutos.
- El procedimiento consta de 4 pasos generales: lisis de la muestra, desnaturalización, carga secuencial y elución del ADN en agua.
Electroforesis en gel de agarosa
- La electroforesis en gel de agarosa es una técnica que permite separar fragmentos de ADN según su tamaño y carga.
- La técnica se basa en la migración de moléculas cargadas en un medio que contiene un tampón cuando se aplica un campo eléctrico.
- La velocidad de migración de los fragmentos de ADN es inversamente proporcional a su tamaño.
- La matriz utilizada es la agarosa, que se caracteriza por tener espacios entre sí donde se aloja el líquido y por los que migran las moléculas cargadas.
Preparación del gel de agarosa
- La concentración del gel de agarosa depende del tamaño de los fragmentos de ADN a separar.
- La concentración mínima es del 0.7% para fragmentos grandes (varias kpb) y la máxima es del 4% para fragmentos pequeños (50-150 pb).
- Para preparar un gel de agarosa al 1,2%, se pesa 1 g de agarosa y se lleva a un erlenmeyer conteniendo 80 ml de TBE 1x (o TAE 1x).
Carga de muestras y visualización
- Las muestras de ADN deben tener una elevada densidad para que permanezcan en el interior del pocillo durante el proceso de carga.
- Se utilizan tampones de carga que contienen glicerol (incrementa la densidad) y uno o dos colorantes visibles cargados negativamente (azul de bromofenol y/o xylen cyanol) que actúan de indicadores del avance de las muestras.
- La visualización del ADN en los geles se hace mediante tinción con el colorante fluorescente gel red, que se intercala entre las bases nitrogenadas del ADN y es fluorescente cuando se ilumina con luz ultravioleta.
Verifica que la PCR ha generado el fragmento de ADN previsto y aprende a identificarlo utilizando electroforesis en gel de agarosa. Aprende los pasos para ejecutar la reacción en cadena de la polimerasa y analizar los resultados. Conoce la teoría detrás de este importante técnica en biología molecular.
Make Your Own Quizzes and Flashcards
Convert your notes into interactive study material.
Get started for free
