25 Questions
¿Cuál es el nombre del método de electroforesis en gel más utilizado para separar proteínas?
Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE)
¿Cuál es el propósito de utilizar SDS en la electroforesis de proteínas?
Para desnaturalizar la proteína
¿Qué tipo de modificaciones pueden ser detectadas después de la electroforesis y la tinción con Coomassie Blue?
Modificaciones post-traduccionales
¿Cuál es el mecanismo de formación del gel de poliacrilamida?
La molécula de acrilamida forma polímeros lineales
¿Qué es el objetivo principal de utilizar la electroforesis de proteínas en la purificación de proteínas?
Monitorear el proceso de purificación
¿Cuál es el título de la proteína que no se puede determinar con certeza en el marcador Broad Range?
GAPDH
¿Cuál es el propósito de la centrifugación a 4,000 rpm durante 30 segundos?
Eliminar impurezas de las muestras
¿Cómo se ajusta el voltaje para la electroforesis?
A 90 voltios
¿Cuál es el volumen total de la muestra y el buffer Laemmli?
20 µL
¿Cuál es el propósito de la electroforesis en el gel de poliacrilamida?
Separar las proteínas de acuerdo a su tamaño
¿Cuál es el propósito del buffer de Laemmli en la preparación de muestras para la electroforesis de proteínas?
Desnaturalizar las proteínas antes de la corrida
¿Qué característica de los poros en los geles de electroforesis permite la separación de proteínas por peso molecular?
El tamaño de los poros es inversamente proporcional al peso molecular
¿Cuál es el efecto del SDS en las proteínas durante la preparación de muestras para la electroforesis?
Desnaturaliza la proteína e interrumpe sus interacciones hidrofóbicas
¿Qué tipo de electroforesis es la SDS-PAGE?
Electroforesis desnaturalizante
¿Cuál es el propósito del stacking gel en la electroforesis de proteínas?
Concentrar las proteínas en una banda
¿Cuál es el efecto del β-mercaptoetanol en las proteínas?
Rompe los puentes disulfuro de las proteínas
¿Por qué se utiliza el calor en el proceso de preparación de proteínas?
Para romper los puentes de hidrógeno y alterar la estructura terciaria
¿Qué es el propósito del tinte Coomassie Blue en la gel de poliacrilamida?
Confirma la presencia de proteínas totales
¿Qué es el papel del Sample buffer en el proceso de electroforesis?
Prepara la muestra para la electroforesis
¿Qué es el propósito del Persulfato de amonio en el proceso de electroforesis?
Inactiva proteasas presentes en la muestra
¿Cuál es el propósito principal de dibujar una línea debajo de cada fosa de la peinilla?
Servir de guía para cuando se carga la fosa con la muestra
¿Cuál es el pH del Electrode Buffer utilizado en este protocolo?
pH 8.3
¿Cuánto volumen de muestra se utiliza por lo general en este laboratorio?
5 o 7 µg
¿Qué pasa cuando se alcanza una distancia de 0.5 cm en el cristal externo?
El voltaje cambia
¿Cuál es el propósito del soporte del electrodo dentro del soporte de desarrollo?
Presionar hacia abajo el soporte del electrodo
Study Notes
Electróforesis de Proteínas - SDS-PAGE
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La electroforesis de proteínas SDS-PAGE es un método común para separar proteínas utilizando un gel de poliacrilamida como soporte y SDS para desnaturalizar la proteína.
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El objetivo de la electroforesis de proteínas SDS-PAGE es identificar una proteína específica o de interés basado en tamaño o peso molecular, monitorear el proceso de lisis y recuperación, monitorear el proceso de purificación de una proteína y detectar modificaciones post-traduccionales.
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La técnica de electroforesis de proteínas SDS-PAGE fue formulada originalmente por Laemmli en 1971.
Mecanismo de la Formación del Gel
- La molécula de acrilamida forma polímeros lineales que se utilizan para separar las proteínas.
- La concentración de la acrilamida se calcula en función del volumen del agua y la sample de proteínas.
Preparación de las Muestras
- La preparación de las muestras implica la calculación del volumen de la muestra de proteínas totales necesarias para preparar la muestra.
- El Laemmli Buffer se utiliza para preparar las muestras y contiene SDS, β-mercaptoetanol, glicerol y bromofenol azul.
Electroforesis y Tinción del Gel
- La electroforesis se lleva a cabo en un campo eléctrico que separa las proteínas por peso molecular.
- El sistema discontinuo fue originalmente desarrollado por Laemmli en 1971 y consiste en dos geles: uno de separación y otro de montaje.
- La tinción del gel se realiza con Coomassie Blue para detectar las proteínas totales en la gel de poliacrilamida.
Importancia del SDS-PAGE
- La electroforesis de proteínas SDS-PAGE es la técnica más ampliamente utilizada para separar proteínas.
- La técnica es desnaturalizante, lo que significa que las proteínas son desnaturalizadas antes de correr la electroforesis.
- La desnaturalización se logra mediante la exposición a calor y agentes químicos como SDS y β-mercaptoetanol.
Aprende sobre los principios básicos de la electroforesis de proteínas SDS-PAGE y cómo calcular los microlitros necesarios para preparar la muestra de proteínas totales del citoplasma de las células trabajadas. Identifica las proteínas totales de mayor y menor peso molecular después de la electroforesis.
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