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Questions and Answers
Qual è il meccanismo attraverso il quale il trypan blue permette di valutare la vitalità cellulare?
Qual è il meccanismo attraverso il quale il trypan blue permette di valutare la vitalità cellulare?
- Attraversa la membrana cellulare solo quando questa è compromessa, colorando la cellula di blu. (correct)
- Reagisce chimicamente con le proteine cellulari, alterandone il colore.
- Si lega specificamente ai mitocondri, inibendo la respirazione cellulare e colorandoli.
- Stimola la produzione di enzimi fluorescenti nelle cellule vive, rendendole visibili.
Quale tra le seguenti NON è una ragione valida per l'utilizzo di colture cellulari?
Quale tra le seguenti NON è una ragione valida per l'utilizzo di colture cellulari?
- Analisi della composizione elementare delle cellule tramite spettrometria di massa. (correct)
- Produzione di vaccini attraverso la replicazione virale nelle cellule.
- Studio dell'effetto dei farmaci e dell'invecchiamento cellulare.
- Test di tossicità di nuovi composti farmaceutici e cosmetici.
Qual è il ruolo dei crioprotettori come il DMSO nel processo di crioconservazione delle cellule?
Qual è il ruolo dei crioprotettori come il DMSO nel processo di crioconservazione delle cellule?
- Rimuovere l'acqua dalle cellule per prevenire la lisi cellulare durante lo scongelamento.
- Indurre la differenziazione cellulare prima del congelamento per preservare specifiche caratteristiche.
- Aumentare la velocità di congelamento per prevenire la formazione di cristalli di ghiaccio.
- Proteggere le cellule dalla formazione di cristalli di ghiaccio intracellulari durante il congelamento. (correct)
Quale tipo di cellula animale coltivata in vitro tende a crescere in sospensione anziché aderire al substrato?
Quale tipo di cellula animale coltivata in vitro tende a crescere in sospensione anziché aderire al substrato?
In che modo la trasformazione genetica delle cellule contribuisce alla terapia genica?
In che modo la trasformazione genetica delle cellule contribuisce alla terapia genica?
Cosa distingue principalmente una coltura primaria da una subcoltura (coltura secondaria) di cellule animali?
Cosa distingue principalmente una coltura primaria da una subcoltura (coltura secondaria) di cellule animali?
Quale tra i seguenti componenti del terreno di coltura cellulare ha la funzione primaria di fornire fattori di crescita e altre molecole essenziali?
Quale tra i seguenti componenti del terreno di coltura cellulare ha la funzione primaria di fornire fattori di crescita e altre molecole essenziali?
Quale applicazione delle colture cellulari è più direttamente collegata alla ricerca e sviluppo di nuovi vaccini?
Quale applicazione delle colture cellulari è più direttamente collegata alla ricerca e sviluppo di nuovi vaccini?
Qual è il ruolo principale degli essudati rilasciati dalla cellula vegetale ferita nel meccanismo di trasferimento del T-DNA?
Qual è il ruolo principale degli essudati rilasciati dalla cellula vegetale ferita nel meccanismo di trasferimento del T-DNA?
Qual è la funzione delle proteine VirA e VirG nel processo di trasferimento del T-DNA?
Qual è la funzione delle proteine VirA e VirG nel processo di trasferimento del T-DNA?
Quale processo avviene al singolo filamento complementare che rimane sul plasmide dopo che il T-strand si è staccato?
Quale processo avviene al singolo filamento complementare che rimane sul plasmide dopo che il T-strand si è staccato?
Perché è necessario un NIC (nick) o una rottura nel DNA della doppia elica all'interno della cellula vegetale durante il trasferimento del T-DNA?
Perché è necessario un NIC (nick) o una rottura nel DNA della doppia elica all'interno della cellula vegetale durante il trasferimento del T-DNA?
Cosa comporta l'interazione della proteina al 5’ del T-strand con un punto aperto del DNA genomico?
Cosa comporta l'interazione della proteina al 5’ del T-strand con un punto aperto del DNA genomico?
Qual è il passo cruciale che permette la separazione delle cellule durante la preparazione di una coltura primaria di cellule animali, considerando l'importanza di mantenere l'integrità cellulare?
Qual è il passo cruciale che permette la separazione delle cellule durante la preparazione di una coltura primaria di cellule animali, considerando l'importanza di mantenere l'integrità cellulare?
Qual è il ruolo della replicazione e riparazione del DNA della cellula vegetale nell'integrazione del T-strand?
Qual è il ruolo della replicazione e riparazione del DNA della cellula vegetale nell'integrazione del T-strand?
Nella trasformazione genetica di cellule vegetali, quale vantaggio offre l'utilizzo di protoplasti rispetto alle cellule con parete cellulare?
Nella trasformazione genetica di cellule vegetali, quale vantaggio offre l'utilizzo di protoplasti rispetto alle cellule con parete cellulare?
Cosa codificano i geni virA e virG?
Cosa codificano i geni virA e virG?
Qual è il vantaggio principale della trasformazione genetica dei cloroplasti rispetto alla trasformazione del nucleo cellulare?
Qual è il vantaggio principale della trasformazione genetica dei cloroplasti rispetto alla trasformazione del nucleo cellulare?
Qual è la principale sfida che le cellule affrontano quando vengono trasferite da un organismo a una coltura di tessuti in vitro?
Qual è la principale sfida che le cellule affrontano quando vengono trasferite da un organismo a una coltura di tessuti in vitro?
In che modo il T-strand entra nella cellula vegetale?
In che modo il T-strand entra nella cellula vegetale?
Qual è una caratteristica distintiva del genoma dei cloroplasti che facilita l'inserimento di nuovi geni?
Qual è una caratteristica distintiva del genoma dei cloroplasti che facilita l'inserimento di nuovi geni?
Quante copie del genoma sono stimate essere presenti in una singola cellula vegetale grazie alla presenza dei cloroplasti?
Quante copie del genoma sono stimate essere presenti in una singola cellula vegetale grazie alla presenza dei cloroplasti?
Considerando l'importanza delle tecnologie del DNA ricombinante, quale ruolo specifico svolge il vettore nel processo di trasformazione genetica?
Considerando l'importanza delle tecnologie del DNA ricombinante, quale ruolo specifico svolge il vettore nel processo di trasformazione genetica?
Perché è essenziale aggiungere un inibitore dopo il trattamento con tripsina durante la preparazione di colture primarie di cellule animali?
Perché è essenziale aggiungere un inibitore dopo il trattamento con tripsina durante la preparazione di colture primarie di cellule animali?
Qual è l'implicazione principale del sistema di trascrizione e traduzione di tipo procariotico nei cloroplasti per l'ingegneria genetica?
Qual è l'implicazione principale del sistema di trascrizione e traduzione di tipo procariotico nei cloroplasti per l'ingegneria genetica?
Durante la trasformazione genetica, quale elemento tra i seguenti, una volta trasferito in una cellula ospite, può influenzare l'espressione di altri geni presenti nel genoma dell'organismo ricevente?
Durante la trasformazione genetica, quale elemento tra i seguenti, una volta trasferito in una cellula ospite, può influenzare l'espressione di altri geni presenti nel genoma dell'organismo ricevente?
Oltre all'integrazione nel genoma, quale altro fattore è cruciale per garantire che un gene inserito in una pianta sia ereditabile?
Oltre all'integrazione nel genoma, quale altro fattore è cruciale per garantire che un gene inserito in una pianta sia ereditabile?
Qual è la differenza fondamentale tra una coltura cellulare primaria e una linea cellulare stabilizzata, in termini di comportamento e potenziale di ricerca?
Qual è la differenza fondamentale tra una coltura cellulare primaria e una linea cellulare stabilizzata, in termini di comportamento e potenziale di ricerca?
Perché le colture in vitro sono essenziali per la rigenerazione di una pianta intera a partire da una singola cellula trasformata?
Perché le colture in vitro sono essenziali per la rigenerazione di una pianta intera a partire da una singola cellula trasformata?
In che modo la conoscenza approfondita dei geni facilita il processo di trasformazione genetica nelle cellule eucariotiche?
In che modo la conoscenza approfondita dei geni facilita il processo di trasformazione genetica nelle cellule eucariotiche?
Quale tra le seguenti NON è una caratteristica dei cloroplasti rilevante per la trasformazione genetica?
Quale tra le seguenti NON è una caratteristica dei cloroplasti rilevante per la trasformazione genetica?
Quale dei seguenti rappresenta lo svantaggio principale dell'inserimento casuale di un gene nel nucleo della cellula vegetale?
Quale dei seguenti rappresenta lo svantaggio principale dell'inserimento casuale di un gene nel nucleo della cellula vegetale?
Qual è il vantaggio principale della trasformazione dei cloroplasti rispetto alla trasformazione nucleare nelle piante transgeniche?
Qual è il vantaggio principale della trasformazione dei cloroplasti rispetto alla trasformazione nucleare nelle piante transgeniche?
Cosa si intende per 'omoplastoma' nel contesto della trasformazione dei cloroplasti?
Cosa si intende per 'omoplastoma' nel contesto della trasformazione dei cloroplasti?
Quale dei seguenti metodi viene utilizzato per introdurre DNA estraneo nei protoplasti?
Quale dei seguenti metodi viene utilizzato per introdurre DNA estraneo nei protoplasti?
Perché i protoplasti sono importanti negli approcci di manipolazione genetica?
Perché i protoplasti sono importanti negli approcci di manipolazione genetica?
Cosa comporta la tecnica di 'fusione dei protoplasti'?
Cosa comporta la tecnica di 'fusione dei protoplasti'?
Qual è una caratteristica chiave della trasformazione dei cloroplasti che la distingue dalla trasformazione nucleare?
Qual è una caratteristica chiave della trasformazione dei cloroplasti che la distingue dalla trasformazione nucleare?
Quale tecnica di trasformazione prevede l'utilizzo di un dispositivo per sparare fisicamente il DNA nelle cellule vegetali?
Quale tecnica di trasformazione prevede l'utilizzo di un dispositivo per sparare fisicamente il DNA nelle cellule vegetali?
Perché è necessario un terreno selettivo dopo la trasformazione dei protoplasti?
Perché è necessario un terreno selettivo dopo la trasformazione dei protoplasti?
Qual è lo scopo principale del taglio dei fiori in Arabidopsis thaliana prima dell'immersione in Agrobacterium?
Qual è lo scopo principale del taglio dei fiori in Arabidopsis thaliana prima dell'immersione in Agrobacterium?
Quale passaggio nel metodo di trasformazione di Arabidopsis thaliana tramite dipping è cruciale per garantire un'alta frequenza di trasformazione e perché?
Quale passaggio nel metodo di trasformazione di Arabidopsis thaliana tramite dipping è cruciale per garantire un'alta frequenza di trasformazione e perché?
Qual è il criterio principale per valutare l'efficacia della trasformazione genetica di Arabidopsis thaliana tramite il metodo dipping?
Qual è il criterio principale per valutare l'efficacia della trasformazione genetica di Arabidopsis thaliana tramite il metodo dipping?
Perché è essenziale mantenere le piante di Arabidopsis thaliana in serra dopo l'immersione in Agrobacterium?
Perché è essenziale mantenere le piante di Arabidopsis thaliana in serra dopo l'immersione in Agrobacterium?
Quale potenziale svantaggio presenta il metodo dipping per la trasformazione di Arabidopsis thaliana rispetto ad altri metodi più sofisticati?
Quale potenziale svantaggio presenta il metodo dipping per la trasformazione di Arabidopsis thaliana rispetto ad altri metodi più sofisticati?
Considerando che la trasformazione tramite Agrobacterium si basa sull'integrazione del DNA batterico nel genoma della pianta, quale fattore potrebbe limitare l'efficienza del metodo dipping in Arabidopsis thaliana?
Considerando che la trasformazione tramite Agrobacterium si basa sull'integrazione del DNA batterico nel genoma della pianta, quale fattore potrebbe limitare l'efficienza del metodo dipping in Arabidopsis thaliana?
Se dopo aver effettuato il metodo dipping su Arabidopsis thaliana, si riscontra una bassa percentuale di semi contenenti il transgene, quale potrebbe essere una strategia per migliorare l'efficienza della trasformazione?
Se dopo aver effettuato il metodo dipping su Arabidopsis thaliana, si riscontra una bassa percentuale di semi contenenti il transgene, quale potrebbe essere una strategia per migliorare l'efficienza della trasformazione?
Dopo aver trasformato Arabidopsis thaliana con il metodo dipping, come si potrebbe confermare che il transgene è stabilmente integrato nel genoma e non presente solo come DNA episomale?
Dopo aver trasformato Arabidopsis thaliana con il metodo dipping, come si potrebbe confermare che il transgene è stabilmente integrato nel genoma e non presente solo come DNA episomale?
Flashcards
Trasformazione genetica
Trasformazione genetica
Il trasferimento di un frammento di DNA tra organismi.
Frammento di DNA
Frammento di DNA
Può essere un gene, promotore o DNA non noto.
Tecnologie del DNA ricombinante
Tecnologie del DNA ricombinante
Clonazione del frammento di DNA all'interno di un vettore.
Coltura cellulare
Coltura cellulare
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Coltura in vitro
Coltura in vitro
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Coltura primaria di cellule
Coltura primaria di cellule
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Tripsina
Tripsina
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Inibitori della tripsina
Inibitori della tripsina
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Trypan blue
Trypan blue
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Subcolture
Subcolture
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Crioprotettori
Crioprotettori
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Cellule epiteliali
Cellule epiteliali
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Cellule fibroblasti
Cellule fibroblasti
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Cellule linfoblasti
Cellule linfoblasti
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Tossicità
Tossicità
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Terapia genica
Terapia genica
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T-DNA
T-DNA
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T-strand
T-strand
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L'azione degli essudati
L'azione degli essudati
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Geni vir
Geni vir
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Vir A e Vir G
Vir A e Vir G
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NIC
NIC
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Integrazione del T-strand
Integrazione del T-strand
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Formazione di sequenze ripetute
Formazione di sequenze ripetute
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Trasformazione di Arabidopsis thaliana
Trasformazione di Arabidopsis thaliana
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Metodo di immersione
Metodo di immersione
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Stimolazione della crescita
Stimolazione della crescita
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Agrobatterio
Agrobatterio
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Serra
Serra
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Fioritura
Fioritura
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Produzione di semi
Produzione di semi
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Transgene
Transgene
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Protoplasti
Protoplasti
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Cloroplasti
Cloroplasti
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Omo Plastoma
Omo Plastoma
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Fuga del transgenico
Fuga del transgenico
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Particle gun
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PEG
PEG
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Microiniezioni
Microiniezioni
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Fusione dei protoplasti
Fusione dei protoplasti
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Rigenerazione della pianta
Rigenerazione della pianta
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Gene stabile
Gene stabile
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DNA cloroplastico
DNA cloroplastico
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Ricombinazione omologa
Ricombinazione omologa
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Effetto di posizione
Effetto di posizione
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Traduzione e trascrizione
Traduzione e trascrizione
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Numero di cloroplasti
Numero di cloroplasti
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Study Notes
Trasformazione Genetica negli Eucarioti
- La trasformazione genetica permette il trasferimento di un frammento di DNA da una cellula a un'altra.
- Il frammento può essere un gene, una regione regolatrice, una regione codificante o un promotore.
- Sono necessarie conoscenze sulle sequenze geniche da trasformare.
- La tecnologia del DNA ricombinante consente di clonare il frammento di interesse in un vettore per garantire l'espressione della proteina.
Colture Cellulari
- Le colture cellulari dipendono dal tipo di organismo (eucarioti o procarioti, ad es. E. coli e cellule vegetali).
- Le colture vengono effettuate in vitro (in ambiente artificiale) per studiare le cellule senza parete come i protoplasti o altri organi/tessuti/cellule animali/vegetali.
- La coltura in vitro permette la coltivazione di cellule vegetali, tessuti o organi per studiare la biologia di cellule animali/piante.
Coltura di Tessuti
- Le cellule vengono rimosse da un organismo e coltivate artificialmente.
- Tale ambiente è diverso da quello naturale a causa della separazione dalle cellule dell'organismo.
- Le cellule vengono sottoposte a stress.
- Vi sono diversi metodi per isolare le cellule: meccanico o uso di enzimi come la tripsina.
- Le cellule isolate possono essere sottoposte a controlli di vitalità cellulare utilizzando il colorante trypan blue.
Coltura Primarie di Cellule Animali
- Le cellule vengono prelevate da campioni di tessuti (adulti, embrioni).
- Le cellule vengono separate tramite digestione con Tripsina.
- L'aggiunta di un inibitore della tripsina impedisce la sua ulteriore attività (FBS – siero bovino, ovomucina e STI – soia tripsina inibitore).
- Si controlla la vitalità delle cellule mediante colorazione con trypan blue. Il colorante è rilevabile al microscopio.
Tipi di Cellule in Coltura
- Epiteliali: forma poligonale, adese al substrato.
- Fibroblasti: forma allungata e bipolare, adese al substrato.
- Linfoblasti: forma sferica, in sospensione.
Perché si usano le cellule in coltura?
- Per studiare la biologia cellulare.
- Per testare modelli di cellule su composti biochimici o farmaceutici.
- Per ricerche sul cancro.
- Per virologia.
- Per la produzione di vaccini, tessuti, anticorpi e per approfondire le possibilità di differenziare le cellule.
Transfezione
- Processo per introdurre DNA in cellule eucariotiche.
- Può essere stabile (integrazione nel genoma) o transitoria (non integrazione, solo espressione temporanea).
- Il metodo più comune è l'elettroporazione.
- Altre tecniche includono: pistola a particelle, microiniezione e uso di liposomi.
Trasformazione di Cellule Animali (Transfezione)
- Consiste nell'inserimento di DNA nel nucleo di una cellula eucariotica.
- Può avvenire in modo stabile (integrazione nel genoma) o transitorio (non integrazione).
- Tra le strategie vi è la tecnica di elettroporazione.
- La cellula viene sottoposta a un impulso elettrico che determina la formazione di pori temporanei nella membrana cellulare, permettendo l'ingresso del DNA.
Trasformazione di Cellule Vegetali
- La trasformazione genetica è un processo che avviene anche in natura.
- Agrobacterium tumefaciens è un batterio che causa tumori nelle piante, ma può essere utilizzato per inserire DNA a scopo di trasformazione genetica.
- Il suo plasmide Ti contiene il T-DNA, che viene trasferito nella cellula vegetale.
- La tecnica è utile per la manipolazione genetica delle piante.
Vettore Binario
- Struttura progettata in laboratorio.
- Ha dimensioni ridotte rispetto ai plasmidi Ti.
- Include un promotore e un gene marcatore (resistenza ad antibiotici).
- Utilizzato per studiare la trasformazione di cellule vegetali.
Marcatori più utilizzati
- NPTII (Kanamicina): resistenza all'antibiotico kanamicina.
- HPT (Igro): resistenza all'antibiotico igromicina.
- Resistenza ad erbicidi come la phosphinotricina.
Arabidopsis Thaliana
- Pianta modello per lo studio della biologia vegetale, a causa del suo rapido ciclo di vita e piccola taglia.
- Può essere utilizzata per gli studi di trasformazione grazie alla sua rapida crescita.
- Si utilizza il metodo di dipping per la trasformazione di Arabidopsis thaliana.
Meccanismo di Trasferimento del T-DNA
- Interazione dei geni vir con i fattori di virulenza.
- Intervento delle endonucleasi.
- Integrazione del DNA nel genoma della pianta.
- Riconoscimento di siti di rottura/integrazione del DNA nel genoma della pianta ricevente.
Preparazione e Trasformazione dei Protoplasti
- I protoplasti sono cellule vegetali prive di parete cellulare.
- La preparazione dei protoplasti include la digestione enzimatica per rimuovere la parete.
- La trasformazione dei protoplasti prevede metodi come il PEG-mediato e la microiniezione.
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