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Questions and Answers
Quel est l'objectif principal des méthodes de dissection et enzymatiques pour les cellules organisées en tissu ?
Quel est l'objectif principal des méthodes de dissection et enzymatiques pour les cellules organisées en tissu ?
Les PBMC sont des cellules poly-nucléaires du sang périphérique.
Les PBMC sont des cellules poly-nucléaires du sang périphérique.
False
Quel est le pH du tampon PBS utilisé pour la dilution des cellules ?
Quel est le pH du tampon PBS utilisé pour la dilution des cellules ?
7,4
Le test de viabilité des cellules peut être effectué avec le colorant ________.
Le test de viabilité des cellules peut être effectué avec le colorant ________.
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Associez les méthodes de culture aux conditions appropriées :
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Quelle est la fréquence générale du renouvellement du milieu pour les cellules?
Quelle est la fréquence générale du renouvellement du milieu pour les cellules?
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Le pH neutre est défini comme étant entre 6.5 et 7.5.
Le pH neutre est défini comme étant entre 6.5 et 7.5.
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Quels agents peuvent contaminer les cultures cellulaires?
Quels agents peuvent contaminer les cultures cellulaires?
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Un pH inférieur à ______ menace la viabilité des cellules.
Un pH inférieur à ______ menace la viabilité des cellules.
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Associez les types de contaminants aux effets qu'ils peuvent avoir sur les cultures cellulaires:
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Quelle est la première étape de la validation d'une molécule thérapeutique?
Quelle est la première étape de la validation d'une molécule thérapeutique?
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Les cultures primaires sont immortelles et peuvent se diviser indéfiniment.
Les cultures primaires sont immortelles et peuvent se diviser indéfiniment.
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Qu'est-ce qu'une lignée cellulaire?
Qu'est-ce qu'une lignée cellulaire?
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La ______________ représente le transfert de cellules d’un flacon de culture à un ou plusieurs autres.
La ______________ représente le transfert de cellules d’un flacon de culture à un ou plusieurs autres.
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Associez les étapes de production des biomolécules à leur description:
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Quel exemple de biomolécule peut être produit grâce aux biotechnologies?
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Les essais cliniques se déroulent en plusieurs phases.
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Quel est le rôle de la FDA dans le processus de validation des molécules thérapeutiques?
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Quel est le pH optimal pour le milieu de culture cellulaire?
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Le CO2 présent dans l'incubateur aide uniquement à la prolifération des cellules.
Le CO2 présent dans l'incubateur aide uniquement à la prolifération des cellules.
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Quel indicateur de pH est utilisé dans le milieu de culture pour contrôler les variations de pH?
Quel indicateur de pH est utilisé dans le milieu de culture pour contrôler les variations de pH?
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Dans le système d'incubation, l'atmosphère est constituée de 95% d'air et de ______% de CO2.
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Associez les additifs aux besoins qu'ils satisfont dans la culture cellulaire:
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Quelles sont les conséquences d'une modification du pH du milieu de culture?
Quelles sont les conséquences d'une modification du pH du milieu de culture?
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La température du milieu de culture doit être ajustée pour correspondre à celle de l'hôte d'origine.
La température du milieu de culture doit être ajustée pour correspondre à celle de l'hôte d'origine.
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Le _______ est responsable de la dégradation des sucres, conduisant à l'acidification du milieu de culture.
Le _______ est responsable de la dégradation des sucres, conduisant à l'acidification du milieu de culture.
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Quel procédé est utilisé pour détacher les cellules de leur support?
Quel procédé est utilisé pour détacher les cellules de leur support?
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Les cellules adhérentes dans un système Transwell ne peuvent pas développer de polarité.
Les cellules adhérentes dans un système Transwell ne peuvent pas développer de polarité.
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Quel type de cellules est utilisé pour le test de perméabilité cellulaire dans un Transwell?
Quel type de cellules est utilisé pour le test de perméabilité cellulaire dans un Transwell?
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Les ______ sont des récipients avec des supports perméables à base de membrane dans un système Transwell.
Les ______ sont des récipients avec des supports perméables à base de membrane dans un système Transwell.
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Associez les méthodes de culture aux descriptions appropriées:
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Quel test permet de déterminer la toxicité des molécules pour les cellules endothéliales?
Quel test permet de déterminer la toxicité des molécules pour les cellules endothéliales?
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Les cellules dendritiques tolérogènes et TCD8+ peuvent être étudiées grâce à la co-culture.
Les cellules dendritiques tolérogènes et TCD8+ peuvent être étudiées grâce à la co-culture.
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Le chimiotactisme implique l'interaction ______ qui permet aux cellules de migrer.
Le chimiotactisme implique l'interaction ______ qui permet aux cellules de migrer.
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À quelle température se réalise la cryoconservation pour une durée prolongée?
À quelle température se réalise la cryoconservation pour une durée prolongée?
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Le glycérol est plus efficace que le DMSO comme cryoprotecteur.
Le glycérol est plus efficace que le DMSO comme cryoprotecteur.
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Qui a découvert l'effet cryoprotecteur du glycérol?
Qui a découvert l'effet cryoprotecteur du glycérol?
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Les cellules sont conservées à des températures allant de ________ °C à ________ °C.
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Quel est le rôle des cryoprotecteurs?
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La déshydratation peut affecter la viabilité lors de la cryoconservation.
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Associez les cryoprotecteurs avec leur année de découverte :
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Quel est le mécanisme d'action du DMSO?
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Study Notes
Introduction et Définitions
- En biologie, la culture cellulaire est un ensemble de techniques pour faire croître des cellules en dehors de leur organisme d'origine.
- La culture de cellules animales permet l'observation des cellules vivantes dans des conditions favorables.
- Une culture cellulaire est un système expérimental simple par rapport à un animal entier et fournit un système qui peut être étudié dans des conditions contrôlées.
- La culture cellulaire est un outil majeur en sciences de la vie.
- La culture de cellules animales fait partie de la culture de tissu, qui est constituée des cultures d'organes, de tissus et de cellules.
- La culture d'organes implique le maintien d'organes en dehors de l'organisme.
- La culture de tissu implique le maintien de tissus en dehors de l'organisme pour conserver leurs fonctions spécifiques.
- La culture cellulaire implique le maintien de cellules non organisées en tissu, capables de se diviser et exprimer des métabolismes et fonctions spécifiques in vitro.
Applications
- La culture cellulaire est utilisée dans la biologie cellulaire pour étudier la différenciation, le vieillissement cellulaire, l'inflammation et les mécanismes du cancer.
- En santé, elle est employée pour diagnostiquer des maladies, tester des molécules thérapeutiques pharmacologiquement actives sur des cellules.
- La culture cellulaire est utilisée en biotechnologie pour la production des biomolécules à usage thérapeutique. (ex: insuline, interférons, cytokines, anticorps monoclonaux, vaccins).
Méthodes d'Obtention et Purification
- Deux types de cellules sont distingués : les cellules circulantes et les cellules en cohésion/adhérentes.
- Les cellules circulantes (ex: PBMC, monocytes, lymphocytes) sont obtenues par les techniques habituelles de prélèvement suivi de centrifugation/gradient de densité (Ficoll d=1,077).
- Les cellules organisées en tissu (ex: cellules dendritiques, macrophages, hépatocytes, épithéliales) sont obtenues soit par dissection soit par des méthodes enzymatiques.
- L'exemple 1 des PBMC (cellules mononuclées du sang périphérique) implique:
- Prélèvement sanguin/anticoagulant
- Décantation à +4°C
- Récupération du plasma
- Dilution du culot
- Utilisation d'un tampon PBS, (Phosphate Buffer Saline), pH 7,4.
- Verser le sang dilué sur le Ficoll d=1,077
- Centrifugation
- Prélever l'anneau de PBMC et procéder à un lavage par PBS-NH Cl /4 centrifugation et suspension du culot cellulaire dans un volume minimum de RPMI-1640.
Méthodes de Culture
- Les flacons de culture (boites Falcon/Flasks) sont des boites stériles en polystyrène qui ne présentent pas de toxicité pour les cellules et permettent l'observation au microscope optique.
- Les flacons/boites peuvent être à bouchon fermé (système clos), ou ventilés (semi-clos) ; ces derniers sont mieux adaptés à la culture cellulaire.
- Les tubes à échantillons (Falcon), les grattoirs, les boites de Pétri, les plaques multipuits (microplaques) à 6, 12, 48 et 96 puits, les agitateur pour spinner, les centrifugeuses, les réfrigérateurs/congélateurs, les microscopes à phase inversée, les cellules Malassez, le système de filtration (sous vide), et les filtres pour seringues sont des équipements importants en culture cellulaire.
- Les flacons spinner, les cryotubes et les microtubules sont utilisés pour la culture cellulaire.
- L'appareil et les équipements en culture cellulaire nécessitent des conditions de stérilité absolues, car toute contamination microbienne entraine la lyse cellulaire.
- Des hottes à flux laminaire sont utilisées pour créer une zone de manipulation stérile.
Méthodes d'entretien des cellules en culture
- Le changement du milieu de culture: le milieu doit être changé toutes les 2 à 3 jours. Un indicateur de pH (rouge de phénol) est utilisé pour suivre les variations de pH.
- Le repiquage: les cellules adhérentes sont repiquées dans de nouveaux contenants après la formation d'une nappe confluente. Le détachement des cellules de leur support et la séparation des cellules impliqueront un grattage mécanique ou une action enzymatique (Trypsine).
- Le système Transwell: utilise un récipient avec un support de membrane perméable qui permet aux cellules adhérentes de développer une polarité et d'acquérir des fonctions spéciales comme le transport.
Méthodes de co-culture
- Cette méthode est utilisée pour étudier des interactions entre deux types de cellules distincts, comme par exemple les cellules dendritiques tolérogènes et TCD8+.
Types de cultures cellulaires
- In vitro : lignées cellulaires
- Ex vivo : cellules primaires
- In situ : culture des explants
- In vivo-like : 3D
Culture cellulaire 3D
- Les cellules normales du corps humain vivent dans un environnement à trois dimensions, entourées par des cellules, des membranes, des couches fibreuses et des protéines.
- Les matrices extracellulaires jouent un rôle crucial dans la morphologie et la fonctionnalité in vivo.
Systèmes microfluidiques/Microfluidic device : Organ-on-chip
- La combinaison de la culture 3D et de la technologie microfluidique permet l'étude de l'efficacité de la thérapie cellulaire adoptive T/cancer en utilisant les tissus d'un patient.
Les besoins nutritifs des cellules en culture
-
Les besoins des cellules en culture sont similaires aux besoins trouvés in vivo.
-
Le milieu de culture doit fournir des nutriments, maintenir un pH et une osmolarité constants.
-
Les milieux de culture peuvent être empiriques (classiques) ou définis.
-
Le milieu empirique contient des sels minéraux, des métaux, du glucose, des acides aminés, des vitamines et des tampons.
-
Le milieu défini quant à lui a une composition quantifiée et précise pour supporter la culture d'un seul type de cellule.
-
Un milieu de culture est composé d'un milieu de base et d'additifs.
-
Le milieu de base contient: les sels minéraux, les métaux, les molécules énergétiques (sucres : Glucose, galactose, mannose, fructose, acides cétoniques, Acides aminés ), les vitamines, et des tampons.
-
les additifs sont le sérum, les facteurs de croissance, les antibiotiques).
-
Le sérum contient des hormones, des facteurs de croissance, des molécules d'adhésion, des protéines de transport, etc.
-
Les facteurs de croissance sont des molécules polypeptidiques qui participent à la prolifération cellulaire, à la différenciation et la survie.
- Les facteurs de croissance importants sont: l'EGF, l'IGF, le NGF,le PDGF, le FGF, le TGF.
Contrôle fonctionnel et contrôle des contaminations des cultures cellulaires
- Le maintien fonctionnel des cultures cellulaires nécessite la préservation des fonctions spécifiques des cellules tout en assurant leur prolifération.
- Le contrôle des contaminations (biologiques et chimiques) est essentiel pour la qualité des résultats de recherche. Les contaminations peuvent altérer les fonctions cellulaires et impacter les résultats.
- Les contaminations chimiques sont causées par: Endotoxines, ions métalliques, traces de détergents chimiques, résidus de germicides/pesticides, impuretés du CO2.
- Les contaminations biologiques sont causées par: Levures, moisissures, bactéries, mycoplasmes, virus.
- Contrôle des mycoplasmes: La détection se fait via des méthodes directes ou indirectes(ex: coloration de l'ADN).
La conservation des cellules en culture
- La cryoconservation est un procédé qui permet de préserver les cellules et leurs fonctions pendant de nombreuses années.
- Les cryoprotecteurs (ex: DMSO, glycérol) sont utilisés pour protéger les cellules contre la formation de glace.
- La congélation et la décongélation doivent être progressives.
- Un test de viabilité est effectué systématiquement après la décongélation.
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Description
Testez vos connaissances sur les méthodes de culture cellulaire et la validation des molécules thérapeutiques. Ce quiz couvre des sujets tels que les conditions de culture, le pH des tampons et les agents contaminant. Préparez-vous à répondre à des questions pratiques sur la biologie cellulaire et la viabilité cellulaire.
