Biología - Cultivos Celulares Tema 3

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Questions and Answers

¿Cuál de los siguientes equipos es necesario para realizar cultivos celulares?

Microscopio estereoscópico

Espectrofotómetro

Centrífuga de alta velocidad

Campanas de flujo laminar (correct)

¿Qué tipo de cultivo celular se origina a partir de un fragmento de un órgano?

Cultivo in vitro de plantas

Cultivo de órganos (correct)

Cultivo de tejidos

Cultivo de células

¿Cuál es la función principal de los incubadores de CO2 en un laboratorio de cultivos celulares?

Controlar la temperatura

Mantener el nivel adecuado de CO2 (correct)

Almacenar muestras biológicas

Purificar el aire

Durante la esterilización en un laboratorio de cultivos celulares, ¿qué se utiliza para eliminar microorganismos?

Autoclave (C) Signup and view all the answers

¿Qué factor no es crítico en el mantenimiento de cultivos celulares?

El volumen de las pipetas (D) Signup and view all the answers

Los cultivos de tejidos son utilizados principalmente para estudiar:

Interacciones y relaciones intercelulares (D) Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes no es un tipo de cultivo celular?

Cultivo de microorganismos (A) Signup and view all the answers

Para la conservación a largo plazo de células, ¿qué equipo es indicado?

Depósito de N líquido a -200ºC (D) Signup and view all the answers

En un cultivo celular primario, ¿de dónde se obtienen las células?

Directamente de un tejido disgregado (A) Signup and view all the answers

Durante qué fase de la curva de crecimiento las células no muestran aumento en número?

Fase de latencia (C) Signup and view all the answers

Cuál de las siguientes afirmaciones sobre el cultivo celular secundario es correcta?

Obtiene células de un cultivo primario o de otro secundario (C) Signup and view all the answers

Cuál es la duración típica de la fase exponencial en la curva de crecimiento celular?

6-7 días (C) Signup and view all the answers

Qué ocurre en la fase estacionaria de la curva de crecimiento?

El medio no admite más células y el número se mantiene constante (C) Signup and view all the answers

Cuál es una de las aplicaciones de los cultivos celulares?

Producción de anticuerpos y vacunas (A) Signup and view all the answers

Qué tipo de células se obtienen típicamente en un cultivo celular primario?

Células de varios tipos (B) Signup and view all the answers

Qué fase se caracteriza por el crecimiento exponencial del número de células?

Fase exponencial (D) Signup and view all the answers

¿Qué es la senescencia en las células?

Fase en la que las células pierden su capacidad de dividirse y mueren. (C) Signup and view all the answers

¿Cuál es el efecto del acortamiento de los telómeros en las células?

Induce la senescencia celular. (B) Signup and view all the answers

¿Cuáles son las características de las líneas celulares continuas?

Sus células son siempre indiferenciadas. (A) Signup and view all the answers

¿Qué aspecto es esencial controlar para el cultivo celular adecuado?

La composición de medios de cultivo. (D) Signup and view all the answers

¿Qué procedimiento NO forma parte de la cronología en el cultivo celular?

Congelación de las células. (A) Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes es un ejemplo de línea celular continua?

Células HeLa. (C) Signup and view all the answers

¿Qué se busca en el procedimiento de recuento y viabilidad celular?

Evaluar cuántas células son capaces de sobrevivir y funcionar. (B) Signup and view all the answers

¿Qué se entiende por disgregación celular?

Procedimiento que busca obtener una suspensión del tipo celular deseado. (C) Signup and view all the answers

¿Cuál es uno de los métodos mecánicos utilizados para la disgregación celular?

Cortar o triturar fragmentos de tejido (A) Signup and view all the answers

¿Qué se obtiene tras realizar la disgregación de tejido?

Una mezcla de varios tipos celulares (A) Signup and view all the answers

¿Cuál es un método inmunológico para la selección de células?

Uso de anticuerpos específicos (B) Signup and view all the answers

¿Qué se requiere para realizar un recuento y determinar la viabilidad celular?

Un colorante vital (B) Signup and view all the answers

¿Qué función tienen las enzimas proteolíticas en la disgregación celular?

Digestionar la matriz extracelular (C) Signup and view all the answers

¿Cuál es la finalidad de conocer la densidad celular tras la disgregación?

Saber cuántas células han sido obtenidas (D) Signup and view all the answers

¿Qué caracteriza a los métodos mecánicos frente a los enzimáticos?

Utilizan herramientas manuales o mecanizadas (D) Signup and view all the answers

¿Qué tipo de métodos se utilizan para separar distintos tipos celulares por su adhesión?

Métodos inmunológicos (D) Signup and view all the answers

¿Cuál es el color del Tripan azul cuando se utiliza en la identificación de células muertas?

Azul (A) Signup and view all the answers

¿Qué herramienta se utiliza para el recuento de células viables y no viables?

Cámara de Neubauer (D) Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes es una consideración importante antes de sembrar células en un cultivo?

Tipo de medio de cultivo (C) Signup and view all the answers

Cuando se habla de 'cambio de medio' en el mantenimiento de cultivos, ¿qué se busca lograr?

Renovar nutrientes y eliminar desechos (A) Signup and view all the answers

¿A qué temperatura óptima deben incubarse los cultivos celulares?

37ºC (B) Signup and view all the answers

¿Cuál es la frecuencia recomendada para observar los cultivos celulares bajo el microscopio en el control periódico?

Cada 1-3 días (C) Signup and view all the answers

¿Qué aspecto se observa al contar las células muertas con Tripan azul?

Tienen un color azul (D) Signup and view all the answers

En el cultivo celular, el término 'monocapa' se refiere a:

La aspiración de células para cambio de medio (C) Signup and view all the answers

¿Cuál es el porcentaje de FBS que se debe añadir al medio de cultivo?

10% (B) Signup and view all the answers

¿Qué pasos debe seguir un investigador para realizar el subcultivo de células?

Despegar células con tripsina y suspender en medio de cultivo. (D) Signup and view all the answers

¿Cuál es el criterio para realizar el subcultivo de las células?

Cuando las células están en una fase de crecimiento exponencial. (D) Signup and view all the answers

¿Qué temperatura y concentración de CO2 se requiere para incubar las células?

37 ºC y 5% CO2 (B) Signup and view all the answers

¿Qué procedimiento se utiliza para despegar las células adheridas al medio?

Uso de tripsina seguida de un lavado con PBS. (D) Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes opciones describe incorrectamente el uso de la tripsina?

Se utiliza para fijar las células en el recipiente. (A) Signup and view all the answers

¿Qué se debe hacer inmediatamente después de centrifugar las células en un falcon?

Eliminar el sobrenadante y resuspender el pellet. (B) Signup and view all the answers

¿Cuál es el objetivo del recuento celular con la cámara de Neubauer?

Calcular el número de células viables. (C) Signup and view all the answers

Study Notes

Tema 3: Cultivos Celulares

Los cultivos celulares son un conjunto de procedimientos que permiten el mantenimiento de células vivas in vitro.
Para realizar cultivos celulares, se necesita un laboratorio especializado con equipos específicos.
Estos equipos incluyen: campanas de flujo laminar, incubadores de CO2, microscopios invertidos, depósitos de nitrógeno líquido, neveras y congeladores a diferentes temperaturas (-200°C, 4°C, -20°C, -80°C), equipos de esterilización (autoclave, sistemas de filtración, luz UV), contadores, pHmetros, placas calefactoras y pipetas automáticas.

Contenidos

Introducción a los cultivos celulares.
Biología de las células en cultivo (incluyendo curvas de crecimiento).
Factores que influyen en el desarrollo de los cultivos celulares (soporte físico, medio de cultivo y atmósfera gaseosa).
Procedimientos de cultivo celular (disgregación, recuento, siembra, mantenimiento, conservación y descongelación de cultivos).
Contaminaciones en cultivos celulares (bacterias, levaduras, hongos, micoplasmas y virus).

1. Introducción

Definición: cultivo celular como procedimientos para mantener células vivas in vitro.
Necesidad de un laboratorio especializado con equipos específicos.

1.1 Tipos de cultivo celular

Tres tipos principales: cultivos de órganos, de tejidos y de células.

1.1.1 Cultivo de órganos (o fragmentos de órganos)

Se originan a partir de un fragmento de órgano, preservando parte de las características histológicas del tejido in vivo.
Aplicaciones: estudio de interacciones intercelulares, respuestas a estímulos, estudios regenerativos, etc.
Se mantiene en la interfase entre el medio de cultivo y una atmósfera controlada.

1.1.2 Cultivo de explantes (fragmentos de tejido)

Los fragmentos de tejido se adhieren a una superficie y se les añade el medio de cultivo apropiado.

1.1.3 Cultivo de células

Se introduce una suspensión de células en un recipiente con medio de cultivo y se incuban en condiciones óptimas para su proliferación y multiplicación.
Diversas aplicaciones: investigación básica (metabolismo celular, interacciones celulares), investigación aplicada (producción de anticuerpos, vacunas, fármacos, estudios de toxicidad, uso de células madre para terapia celular, ingeniería e investigación de tejidos y órganos in vitro).

1.2 Cultivo celular primario y secundario

Cultivo celular primario: Se obtiene directamente a partir de un tejido, disgregando sus células. Generalmente, hay varios tipos de células. Ejemplo: Vellosidades coriónicas
Cultivo celular secundario: se obtiene a partir de un cultivo primario o de otro secundario mediante un subcultivo o "pase", normalmente con un único tipo de células.

2. Biología de las células en cultivo

2.1 La curva de crecimiento

Una vez añadidas las células al medio de cultivo adecuado en un frasco y con condiciones óptimas, el crecimiento de las células presenta una dinámica particular.
Fases de la curva sigmoide: latencia, exponencial y estacionaria.

2.1.1 Fase de latencia (primeras 24 horas)

Las células se adaptan al medio. No hay crecimiento, el número de células se mantiene constante o incluso disminuye.

2.1.2 Fase exponencial (6-7 días)

Las células crecen y se dividen rápidamente, el número de células aumenta exponencialmente hasta alcanzar un máximo.

2.1.3 Fase estacionaria

El medio no admite más células, el crecimiento se detiene, y el número de células se mantiene constante.

2.2 Formas de crecimiento

Crecimiento en monocapa: las células necesitan adherirse a una superficie sólida para proliferar y forman colonias. La proliferación puede detenerse por contacto entre las células.
Crecimiento en suspensión: las células no requieren adherirse para crecer, como las células sanguíneas o células madre, y pueden crecer en suspensión, pero la proliferación puede detenerse por la densidad del cultivo.

2.3 Comportamiento tras varios pases

Tras múltiples subcultivos (o "pases"), el cultivo primario da origen a una línea celular.
Línea celular es una colonia de células obtenidas de un cultivo primario tras varios subcultivos.
Tipos de líneas celulares:
- Primarias: se originan de un cultivo primario y su mantenimiento dura un tiempo limitado.
- Continuas: se originan de un cultivo primario y se mantienen sin límites temporales.
Senescencia: tras cierto número de pases, las células pierden la capacidad de dividirse y mueren.
Conservación de cultivos celulares primarios: se congelan para preservar la vida de las células y volver a usarlas después.

3. Factores que intervienen en el cultivo

Soporte físico: tipo de recipiente, tratamiento de superficies.
Composición y propiedades del medio de cultivo (composición, características fisicoquímicas).
Atmósfera gaseosa.
Condiciones de incubación (temperatura, humedad, etc.).

4. Procedimientos de Cultivo Celular

Disgregación celular: procedimientos para obtener una suspensión celular que contiene los tipos de células deseados.
Métodos mecánicos y enzimáticos para la disgregación.
Selección de células.
Recuento y viabilidad celular (densidad celular).
Inicio del cultivo celular (siembra)
Mantenimiento del cultivo (control periódico microscópico, cambio de medio y subcultivo o pase).
Conservación de cultivos celulares mediante congelación.
Descongelación de cultivos.

5. Contaminaciones

Presencia de microorganismos en cultivos.
Tres tipos: bacterias, levaduras/hongos y micoplasmas/virus, principalmente proveniente de los sueros animales.
Medidas para prevenir contaminaciones.

6. Aplicaciones del cultivo celular

Aplicaciones en investigación aplicada (virología, biotecnología, inmunología, farmacología, ingeniería de tejidos, toxicología)
Aplicaciones en investigación básica (actividad intracelular, flujo intracelular de biomoléculas, genómica y proteómica, ecología celular, interacciones celulares.

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Este cuestionario explora los fundamentos de los cultivos celulares, incluyendo su biología, equipos necesarios y factores que afectan su desarrollo. Se abordarán procedimientos esenciales como siembra, mantenimiento y conservación de cultivos celulares. Ideal para estudiantes de biología que deseen profundizar en el cultivo celular.