Biología - Cultivos Celulares Tema 3
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Questions and Answers

¿Cuál de los siguientes equipos es necesario para realizar cultivos celulares?

  • Microscopio estereoscópico
  • Espectrofotómetro
  • Centrífuga de alta velocidad
  • Campanas de flujo laminar (correct)
  • ¿Qué tipo de cultivo celular se origina a partir de un fragmento de un órgano?

  • Cultivo in vitro de plantas
  • Cultivo de órganos (correct)
  • Cultivo de tejidos
  • Cultivo de células
  • ¿Cuál es la función principal de los incubadores de CO2 en un laboratorio de cultivos celulares?

  • Controlar la temperatura
  • Mantener el nivel adecuado de CO2 (correct)
  • Almacenar muestras biológicas
  • Purificar el aire
  • Durante la esterilización en un laboratorio de cultivos celulares, ¿qué se utiliza para eliminar microorganismos?

    <p>Autoclave</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué factor no es crítico en el mantenimiento de cultivos celulares?

    <p>El volumen de las pipetas</p> Signup and view all the answers

    Los cultivos de tejidos son utilizados principalmente para estudiar:

    <p>Interacciones y relaciones intercelulares</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál de los siguientes no es un tipo de cultivo celular?

    <p>Cultivo de microorganismos</p> Signup and view all the answers

    Para la conservación a largo plazo de células, ¿qué equipo es indicado?

    <p>Depósito de N líquido a -200ºC</p> Signup and view all the answers

    En un cultivo celular primario, ¿de dónde se obtienen las células?

    <p>Directamente de un tejido disgregado</p> Signup and view all the answers

    Durante qué fase de la curva de crecimiento las células no muestran aumento en número?

    <p>Fase de latencia</p> Signup and view all the answers

    Cuál de las siguientes afirmaciones sobre el cultivo celular secundario es correcta?

    <p>Obtiene células de un cultivo primario o de otro secundario</p> Signup and view all the answers

    Cuál es la duración típica de la fase exponencial en la curva de crecimiento celular?

    <p>6-7 días</p> Signup and view all the answers

    Qué ocurre en la fase estacionaria de la curva de crecimiento?

    <p>El medio no admite más células y el número se mantiene constante</p> Signup and view all the answers

    Cuál es una de las aplicaciones de los cultivos celulares?

    <p>Producción de anticuerpos y vacunas</p> Signup and view all the answers

    Qué tipo de células se obtienen típicamente en un cultivo celular primario?

    <p>Células de varios tipos</p> Signup and view all the answers

    Qué fase se caracteriza por el crecimiento exponencial del número de células?

    <p>Fase exponencial</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué es la senescencia en las células?

    <p>Fase en la que las células pierden su capacidad de dividirse y mueren.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el efecto del acortamiento de los telómeros en las células?

    <p>Induce la senescencia celular.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuáles son las características de las líneas celulares continuas?

    <p>Sus células son siempre indiferenciadas.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué aspecto es esencial controlar para el cultivo celular adecuado?

    <p>La composición de medios de cultivo.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué procedimiento NO forma parte de la cronología en el cultivo celular?

    <p>Congelación de las células.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál de los siguientes es un ejemplo de línea celular continua?

    <p>Células HeLa.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se busca en el procedimiento de recuento y viabilidad celular?

    <p>Evaluar cuántas células son capaces de sobrevivir y funcionar.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se entiende por disgregación celular?

    <p>Procedimiento que busca obtener una suspensión del tipo celular deseado.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es uno de los métodos mecánicos utilizados para la disgregación celular?

    <p>Cortar o triturar fragmentos de tejido</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se obtiene tras realizar la disgregación de tejido?

    <p>Una mezcla de varios tipos celulares</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es un método inmunológico para la selección de células?

    <p>Uso de anticuerpos específicos</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se requiere para realizar un recuento y determinar la viabilidad celular?

    <p>Un colorante vital</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué función tienen las enzimas proteolíticas en la disgregación celular?

    <p>Digestionar la matriz extracelular</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la finalidad de conocer la densidad celular tras la disgregación?

    <p>Saber cuántas células han sido obtenidas</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué caracteriza a los métodos mecánicos frente a los enzimáticos?

    <p>Utilizan herramientas manuales o mecanizadas</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de métodos se utilizan para separar distintos tipos celulares por su adhesión?

    <p>Métodos inmunológicos</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el color del Tripan azul cuando se utiliza en la identificación de células muertas?

    <p>Azul</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué herramienta se utiliza para el recuento de células viables y no viables?

    <p>Cámara de Neubauer</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál de las siguientes es una consideración importante antes de sembrar células en un cultivo?

    <p>Tipo de medio de cultivo</p> Signup and view all the answers

    Cuando se habla de 'cambio de medio' en el mantenimiento de cultivos, ¿qué se busca lograr?

    <p>Renovar nutrientes y eliminar desechos</p> Signup and view all the answers

    ¿A qué temperatura óptima deben incubarse los cultivos celulares?

    <p>37ºC</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la frecuencia recomendada para observar los cultivos celulares bajo el microscopio en el control periódico?

    <p>Cada 1-3 días</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué aspecto se observa al contar las células muertas con Tripan azul?

    <p>Tienen un color azul</p> Signup and view all the answers

    En el cultivo celular, el término 'monocapa' se refiere a:

    <p>La aspiración de células para cambio de medio</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el porcentaje de FBS que se debe añadir al medio de cultivo?

    <p>10%</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué pasos debe seguir un investigador para realizar el subcultivo de células?

    <p>Despegar células con tripsina y suspender en medio de cultivo.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el criterio para realizar el subcultivo de las células?

    <p>Cuando las células están en una fase de crecimiento exponencial.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué temperatura y concentración de CO2 se requiere para incubar las células?

    <p>37 ºC y 5% CO2</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué procedimiento se utiliza para despegar las células adheridas al medio?

    <p>Uso de tripsina seguida de un lavado con PBS.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál de las siguientes opciones describe incorrectamente el uso de la tripsina?

    <p>Se utiliza para fijar las células en el recipiente.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué se debe hacer inmediatamente después de centrifugar las células en un falcon?

    <p>Eliminar el sobrenadante y resuspender el pellet.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el objetivo del recuento celular con la cámara de Neubauer?

    <p>Calcular el número de células viables.</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Tema 3: Cultivos Celulares

    • Los cultivos celulares son un conjunto de procedimientos que permiten el mantenimiento de células vivas in vitro.
    • Para realizar cultivos celulares, se necesita un laboratorio especializado con equipos específicos.
    • Estos equipos incluyen: campanas de flujo laminar, incubadores de CO2, microscopios invertidos, depósitos de nitrógeno líquido, neveras y congeladores a diferentes temperaturas (-200°C, 4°C, -20°C, -80°C), equipos de esterilización (autoclave, sistemas de filtración, luz UV), contadores, pHmetros, placas calefactoras y pipetas automáticas.

    Contenidos

    • Introducción a los cultivos celulares.
    • Biología de las células en cultivo (incluyendo curvas de crecimiento).
    • Factores que influyen en el desarrollo de los cultivos celulares (soporte físico, medio de cultivo y atmósfera gaseosa).
    • Procedimientos de cultivo celular (disgregación, recuento, siembra, mantenimiento, conservación y descongelación de cultivos).
    • Contaminaciones en cultivos celulares (bacterias, levaduras, hongos, micoplasmas y virus).

    1. Introducción

    • Definición: cultivo celular como procedimientos para mantener células vivas in vitro.
    • Necesidad de un laboratorio especializado con equipos específicos.

    1.1 Tipos de cultivo celular

    • Tres tipos principales: cultivos de órganos, de tejidos y de células.

    1.1.1 Cultivo de órganos (o fragmentos de órganos)

    • Se originan a partir de un fragmento de órgano, preservando parte de las características histológicas del tejido in vivo.
    • Aplicaciones: estudio de interacciones intercelulares, respuestas a estímulos, estudios regenerativos, etc.
    • Se mantiene en la interfase entre el medio de cultivo y una atmósfera controlada.

    1.1.2 Cultivo de explantes (fragmentos de tejido)

    • Los fragmentos de tejido se adhieren a una superficie y se les añade el medio de cultivo apropiado.

    1.1.3 Cultivo de células

    • Se introduce una suspensión de células en un recipiente con medio de cultivo y se incuban en condiciones óptimas para su proliferación y multiplicación.
    • Diversas aplicaciones: investigación básica (metabolismo celular, interacciones celulares), investigación aplicada (producción de anticuerpos, vacunas, fármacos, estudios de toxicidad, uso de células madre para terapia celular, ingeniería e investigación de tejidos y órganos in vitro).

    1.2 Cultivo celular primario y secundario

    • Cultivo celular primario: Se obtiene directamente a partir de un tejido, disgregando sus células. Generalmente, hay varios tipos de células. Ejemplo: Vellosidades coriónicas
    • Cultivo celular secundario: se obtiene a partir de un cultivo primario o de otro secundario mediante un subcultivo o "pase", normalmente con un único tipo de células.

    2. Biología de las células en cultivo

    2.1 La curva de crecimiento

    • Una vez añadidas las células al medio de cultivo adecuado en un frasco y con condiciones óptimas, el crecimiento de las células presenta una dinámica particular.
    • Fases de la curva sigmoide: latencia, exponencial y estacionaria.

    2.1.1 Fase de latencia (primeras 24 horas)

    • Las células se adaptan al medio. No hay crecimiento, el número de células se mantiene constante o incluso disminuye.

    2.1.2 Fase exponencial (6-7 días)

    • Las células crecen y se dividen rápidamente, el número de células aumenta exponencialmente hasta alcanzar un máximo.

    2.1.3 Fase estacionaria

    • El medio no admite más células, el crecimiento se detiene, y el número de células se mantiene constante.

    2.2 Formas de crecimiento

    • Crecimiento en monocapa: las células necesitan adherirse a una superficie sólida para proliferar y forman colonias. La proliferación puede detenerse por contacto entre las células.
    • Crecimiento en suspensión: las células no requieren adherirse para crecer, como las células sanguíneas o células madre, y pueden crecer en suspensión, pero la proliferación puede detenerse por la densidad del cultivo.

    2.3 Comportamiento tras varios pases

    • Tras múltiples subcultivos (o "pases"), el cultivo primario da origen a una línea celular.
    • Línea celular es una colonia de células obtenidas de un cultivo primario tras varios subcultivos.
    • Tipos de líneas celulares:
      • Primarias: se originan de un cultivo primario y su mantenimiento dura un tiempo limitado.
      • Continuas: se originan de un cultivo primario y se mantienen sin límites temporales.
    • Senescencia: tras cierto número de pases, las células pierden la capacidad de dividirse y mueren.
    • Conservación de cultivos celulares primarios: se congelan para preservar la vida de las células y volver a usarlas después.

    3. Factores que intervienen en el cultivo

    • Soporte físico: tipo de recipiente, tratamiento de superficies.
    • Composición y propiedades del medio de cultivo (composición, características fisicoquímicas).
    • Atmósfera gaseosa.
    • Condiciones de incubación (temperatura, humedad, etc.).

    4. Procedimientos de Cultivo Celular

    • Disgregación celular: procedimientos para obtener una suspensión celular que contiene los tipos de células deseados.
    • Métodos mecánicos y enzimáticos para la disgregación.
    • Selección de células.
    • Recuento y viabilidad celular (densidad celular).
    • Inicio del cultivo celular (siembra)
    • Mantenimiento del cultivo (control periódico microscópico, cambio de medio y subcultivo o pase).
    • Conservación de cultivos celulares mediante congelación.
    • Descongelación de cultivos.

    5. Contaminaciones

    • Presencia de microorganismos en cultivos.
    • Tres tipos: bacterias, levaduras/hongos y micoplasmas/virus, principalmente proveniente de los sueros animales.
    • Medidas para prevenir contaminaciones.

    6. Aplicaciones del cultivo celular

    • Aplicaciones en investigación aplicada (virología, biotecnología, inmunología, farmacología, ingeniería de tejidos, toxicología)
    • Aplicaciones en investigación básica (actividad intracelular, flujo intracelular de biomoléculas, genómica y proteómica, ecología celular, interacciones celulares.

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