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Questions and Answers
¿Cuál de los siguientes equipos es necesario para realizar cultivos celulares?
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¿Qué tipo de cultivo celular se origina a partir de un fragmento de un órgano?
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¿Cuál es la función principal de los incubadores de CO2 en un laboratorio de cultivos celulares?
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Durante la esterilización en un laboratorio de cultivos celulares, ¿qué se utiliza para eliminar microorganismos?
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¿Qué factor no es crítico en el mantenimiento de cultivos celulares?
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Los cultivos de tejidos son utilizados principalmente para estudiar:
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¿Cuál de los siguientes no es un tipo de cultivo celular?
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Para la conservación a largo plazo de células, ¿qué equipo es indicado?
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En un cultivo celular primario, ¿de dónde se obtienen las células?
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Durante qué fase de la curva de crecimiento las células no muestran aumento en número?
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Cuál de las siguientes afirmaciones sobre el cultivo celular secundario es correcta?
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Cuál es la duración típica de la fase exponencial en la curva de crecimiento celular?
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Qué ocurre en la fase estacionaria de la curva de crecimiento?
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Cuál es una de las aplicaciones de los cultivos celulares?
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Qué tipo de células se obtienen típicamente en un cultivo celular primario?
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Qué fase se caracteriza por el crecimiento exponencial del número de células?
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¿Qué es la senescencia en las células?
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¿Cuál es el efecto del acortamiento de los telómeros en las células?
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¿Cuáles son las características de las líneas celulares continuas?
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¿Qué aspecto es esencial controlar para el cultivo celular adecuado?
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¿Qué procedimiento NO forma parte de la cronología en el cultivo celular?
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¿Cuál de los siguientes es un ejemplo de línea celular continua?
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¿Qué se busca en el procedimiento de recuento y viabilidad celular?
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¿Qué se entiende por disgregación celular?
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¿Cuál es uno de los métodos mecánicos utilizados para la disgregación celular?
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¿Qué se obtiene tras realizar la disgregación de tejido?
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¿Cuál es un método inmunológico para la selección de células?
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¿Qué se requiere para realizar un recuento y determinar la viabilidad celular?
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¿Qué función tienen las enzimas proteolíticas en la disgregación celular?
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¿Cuál es la finalidad de conocer la densidad celular tras la disgregación?
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¿Qué caracteriza a los métodos mecánicos frente a los enzimáticos?
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¿Qué tipo de métodos se utilizan para separar distintos tipos celulares por su adhesión?
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¿Cuál es el color del Tripan azul cuando se utiliza en la identificación de células muertas?
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¿Qué herramienta se utiliza para el recuento de células viables y no viables?
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¿Cuál de las siguientes es una consideración importante antes de sembrar células en un cultivo?
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Cuando se habla de 'cambio de medio' en el mantenimiento de cultivos, ¿qué se busca lograr?
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¿A qué temperatura óptima deben incubarse los cultivos celulares?
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¿Cuál es la frecuencia recomendada para observar los cultivos celulares bajo el microscopio en el control periódico?
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¿Qué aspecto se observa al contar las células muertas con Tripan azul?
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En el cultivo celular, el término 'monocapa' se refiere a:
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¿Cuál es el porcentaje de FBS que se debe añadir al medio de cultivo?
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¿Qué pasos debe seguir un investigador para realizar el subcultivo de células?
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¿Cuál es el criterio para realizar el subcultivo de las células?
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¿Qué temperatura y concentración de CO2 se requiere para incubar las células?
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¿Qué procedimiento se utiliza para despegar las células adheridas al medio?
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¿Cuál de las siguientes opciones describe incorrectamente el uso de la tripsina?
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¿Qué se debe hacer inmediatamente después de centrifugar las células en un falcon?
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¿Cuál es el objetivo del recuento celular con la cámara de Neubauer?
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Study Notes
Tema 3: Cultivos Celulares
- Los cultivos celulares son un conjunto de procedimientos que permiten el mantenimiento de células vivas in vitro.
- Para realizar cultivos celulares, se necesita un laboratorio especializado con equipos específicos.
- Estos equipos incluyen: campanas de flujo laminar, incubadores de CO2, microscopios invertidos, depósitos de nitrógeno líquido, neveras y congeladores a diferentes temperaturas (-200°C, 4°C, -20°C, -80°C), equipos de esterilización (autoclave, sistemas de filtración, luz UV), contadores, pHmetros, placas calefactoras y pipetas automáticas.
Contenidos
- Introducción a los cultivos celulares.
- Biología de las células en cultivo (incluyendo curvas de crecimiento).
- Factores que influyen en el desarrollo de los cultivos celulares (soporte físico, medio de cultivo y atmósfera gaseosa).
- Procedimientos de cultivo celular (disgregación, recuento, siembra, mantenimiento, conservación y descongelación de cultivos).
- Contaminaciones en cultivos celulares (bacterias, levaduras, hongos, micoplasmas y virus).
1. Introducción
- Definición: cultivo celular como procedimientos para mantener células vivas in vitro.
- Necesidad de un laboratorio especializado con equipos específicos.
1.1 Tipos de cultivo celular
- Tres tipos principales: cultivos de órganos, de tejidos y de células.
1.1.1 Cultivo de órganos (o fragmentos de órganos)
- Se originan a partir de un fragmento de órgano, preservando parte de las características histológicas del tejido in vivo.
- Aplicaciones: estudio de interacciones intercelulares, respuestas a estímulos, estudios regenerativos, etc.
- Se mantiene en la interfase entre el medio de cultivo y una atmósfera controlada.
1.1.2 Cultivo de explantes (fragmentos de tejido)
- Los fragmentos de tejido se adhieren a una superficie y se les añade el medio de cultivo apropiado.
1.1.3 Cultivo de células
- Se introduce una suspensión de células en un recipiente con medio de cultivo y se incuban en condiciones óptimas para su proliferación y multiplicación.
- Diversas aplicaciones: investigación básica (metabolismo celular, interacciones celulares), investigación aplicada (producción de anticuerpos, vacunas, fármacos, estudios de toxicidad, uso de células madre para terapia celular, ingeniería e investigación de tejidos y órganos in vitro).
1.2 Cultivo celular primario y secundario
- Cultivo celular primario: Se obtiene directamente a partir de un tejido, disgregando sus células. Generalmente, hay varios tipos de células. Ejemplo: Vellosidades coriónicas
- Cultivo celular secundario: se obtiene a partir de un cultivo primario o de otro secundario mediante un subcultivo o "pase", normalmente con un único tipo de células.
2. Biología de las células en cultivo
2.1 La curva de crecimiento
- Una vez añadidas las células al medio de cultivo adecuado en un frasco y con condiciones óptimas, el crecimiento de las células presenta una dinámica particular.
- Fases de la curva sigmoide: latencia, exponencial y estacionaria.
2.1.1 Fase de latencia (primeras 24 horas)
- Las células se adaptan al medio. No hay crecimiento, el número de células se mantiene constante o incluso disminuye.
2.1.2 Fase exponencial (6-7 días)
- Las células crecen y se dividen rápidamente, el número de células aumenta exponencialmente hasta alcanzar un máximo.
2.1.3 Fase estacionaria
- El medio no admite más células, el crecimiento se detiene, y el número de células se mantiene constante.
2.2 Formas de crecimiento
- Crecimiento en monocapa: las células necesitan adherirse a una superficie sólida para proliferar y forman colonias. La proliferación puede detenerse por contacto entre las células.
- Crecimiento en suspensión: las células no requieren adherirse para crecer, como las células sanguíneas o células madre, y pueden crecer en suspensión, pero la proliferación puede detenerse por la densidad del cultivo.
2.3 Comportamiento tras varios pases
- Tras múltiples subcultivos (o "pases"), el cultivo primario da origen a una línea celular.
- Línea celular es una colonia de células obtenidas de un cultivo primario tras varios subcultivos.
- Tipos de líneas celulares:
- Primarias: se originan de un cultivo primario y su mantenimiento dura un tiempo limitado.
- Continuas: se originan de un cultivo primario y se mantienen sin límites temporales.
- Senescencia: tras cierto número de pases, las células pierden la capacidad de dividirse y mueren.
- Conservación de cultivos celulares primarios: se congelan para preservar la vida de las células y volver a usarlas después.
3. Factores que intervienen en el cultivo
- Soporte físico: tipo de recipiente, tratamiento de superficies.
- Composición y propiedades del medio de cultivo (composición, características fisicoquímicas).
- Atmósfera gaseosa.
- Condiciones de incubación (temperatura, humedad, etc.).
4. Procedimientos de Cultivo Celular
- Disgregación celular: procedimientos para obtener una suspensión celular que contiene los tipos de células deseados.
- Métodos mecánicos y enzimáticos para la disgregación.
- Selección de células.
- Recuento y viabilidad celular (densidad celular).
- Inicio del cultivo celular (siembra)
- Mantenimiento del cultivo (control periódico microscópico, cambio de medio y subcultivo o pase).
- Conservación de cultivos celulares mediante congelación.
- Descongelación de cultivos.
5. Contaminaciones
- Presencia de microorganismos en cultivos.
- Tres tipos: bacterias, levaduras/hongos y micoplasmas/virus, principalmente proveniente de los sueros animales.
- Medidas para prevenir contaminaciones.
6. Aplicaciones del cultivo celular
- Aplicaciones en investigación aplicada (virología, biotecnología, inmunología, farmacología, ingeniería de tejidos, toxicología)
- Aplicaciones en investigación básica (actividad intracelular, flujo intracelular de biomoléculas, genómica y proteómica, ecología celular, interacciones celulares.
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Description
Este cuestionario explora los fundamentos de los cultivos celulares, incluyendo su biología, equipos necesarios y factores que afectan su desarrollo. Se abordarán procedimientos esenciales como siembra, mantenimiento y conservación de cultivos celulares. Ideal para estudiantes de biología que deseen profundizar en el cultivo celular.