Biologia: Le cellule in laboratorio

Caratteristiche delle cellule in laboratorio

• Le cellule in laboratorio non interagiscono con altre cellule, a differenza di quanto accade in natura.
• In laboratorio le cellule sono esposte a un eccesso di nutrienti, cosa che sembra correlata con una diminuzione dell'aspettativa di vita.
• In laboratorio si favorisce lo sviluppo della forma planctonica, con cellule libere e densità cellulari superiori a quelle trovate in natura.

Cultura e colonia

• La coltura mista è un insieme di cellule in cui ci sia più di un tipo cellulare, dovuto a inquinamento o ricombinazione.
• La colonia è un gruppo di cellule discrete e distinte dallo spazio, derivate da un'unica cellula madre per riproduzione vegetativa o asessuale.
• Le colonie possono essere distinte per colore, tessitura, forma, spessore e margine.
• La coltura pura nasce da una colonia.

Tecniche di base

• Le tecniche di base consistono in vari passaggi per arrivare alla coltura pura.
• Perché possiamo controllare meglio gli organismi e abbiamo bisogno che siano tutti uguali.
• La tecnica di base consiste in:
  • Prelevamento di microrganismi con pipetta o pompa a vuoto a seconda della quantità.
  • Utilizzo dell'imbuto di Buchner per la separazione di solido e liquido.
  • Prelevamento con spatole o cucchiai per substrati frazionabili solidi.
  • Utilizzo della tecnica del tampone cotton fioc per substrati non frazionabili solidi.

Isolamento e conservazione

• L'isolamento consiste nel prelevare microrganismi e separarli dagli altri.
• La conservazione è il passaggio successivo all'isolamento e richiede che il campione sia sterile e che venga isolato il prima possibile.
• Il problema di questa tecnica è che più è forte la diluizione, più è forte l'errore.

Filtrazione e conteggio

• La filtrazione è una tecnica per isolare i microrganismi tramite l'utilizzo di un filtro Buchner.
• La quantità di liquido da filtrare deve essere nota e la tecnica è adatta per densità cellulari basse.
• La differenza tra conteggio e isolamento su filtro è che il conteggio è per concentrazione, mentre l'isolamento è per diluizione.

Diluizione e fattore di diluizione

• La diluizione è una tecnica per ridurre la concentrazione di microrganismi in un campione.
• Il fattore di diluizione è la misura della quantità di diluizione.
• La differenza tra soluzione e sospensione è che la soluzione è il scioglimento di una sostanza in un mezzo liquido, mentre la sospensione è un miscuglio di liquido e solido.
• La diluizione può essere espressa in base 10 o in base 2, e le basi diverse possono essere gestite mediante la funzione prodotto.

Torbidità e densità ottica

• La torbidità è una misura della quantità di microrganismi in un campione.
• La densità ottica è una misura della quantità di microrganismi in un campione, ottenuta mediante spettrofotometro.
• La torbidità e la densità ottica sono correlate, ma la densità ottica è più precisa.
• La soglia di lettura dello spettrofotometro va da 0,3 a 0,5.

Biosaggio

• Il biosaggio è una tecnica per stimolare o inibire la crescita di microrganismi.
• Il biosaggio di crescita consiste in tre passaggi:
  • Allestire diverse colture con concentrazioni crescenti di fattore limitante.
  • Misurare la velocità di crescita di ogni coltura.
  • Associare ogni velocità di crescita con la concentrazione di fattore limitante che l'ha prodotta.
• La curva ottenuta è una curva di taratura, che mostra la relazione tra la velocità di crescita e la concentrazione di fattore limitante.