M03_B1 LAB 3/4 Część Praktyczna 2024 PDF

M03_B1 LAB 3 / LAB 4. WPŁYW CZYNNIKÓW FIZYKOCHEMICZNYCH NA DROBNOUSTROJE CZĘŚĆ PRAKTYCZNA PRACA W PODGRUPACH (2-, 3-OSOBOWE MAŁE ZESPOŁY). LAB 3: Do wykonania ćwiczenia 1–7. W ćwiczeniach 2–7 każda podgrupa wykonuje WSZYSTKIE DOŚWIADCZENIA DLA JEDNEGO Z GATUNKÓW! LAB 4: Odczytanie wyników z...

M03_B1 LAB 3 / LAB 4. WPŁYW CZYNNIKÓW FIZYKOCHEMICZNYCH NA DROBNOUSTROJE CZĘŚĆ PRAKTYCZNA PRACA W PODGRUPACH (2-, 3-OSOBOWE MAŁE ZESPOŁY). LAB 3: Do wykonania ćwiczenia 1–7. W ćwiczeniach 2–7 każda podgrupa wykonuje WSZYSTKIE DOŚWIADCZENIA DLA JEDNEGO Z GATUNKÓW! LAB 4: Odczytanie wyników z LAB 3. Do wykonania ćwiczenie 8. Ćwiczenie 1. Badanie wpływu temperatury na wzrost drobnoustrojów oraz na wytwarzanie barwników bakteryjnych Materiały: szczepy bakterii na stałym podłożu agarowym: Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Staphylococcus aureus, Geobacillus stearothermophilus; płytka Petriego z podłożem agarowym LA. Wykonanie: Każdej podgrupie studentów zostaje przydzielona jedna temperatura do zbadania: 6ºC (lodówka), 22ºC (temperatura pokojowa), 37ºC (cieplarka), 55ºC (cieplarka). LAB 3: Płytkę z podłożem LA podzielić na 4 sektory. Na każdy sektor posiać bakterie rysą wężykowatą (w formie zygzaku): Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Staphylococcus aureus, Geobacillus stearothermophilus. Posiane płytki inkubować przez 24–48 godzin w odpowiedniej temperaturze. LAB 4: Odczytać wyniki posiewów po inkubacji. Porównać różnice w intensywności wzrostu badanych szczepów, w wyglądzie kolonii bakteryjnych (kolorze/pigmentacji) w zależności od temperatury inkubacji. Wynik badania: Wyniki zestawić w tabeli według schematu poniżej. Określić, czy kultury bakterii produkują pigment. Podać optymalną temperaturę dla każdego badanego gatunku bakterii. Temperatura (ºC) Pseudomonas Serratia Staphylococcus Geobacillus aeruginosa marcescens aureus stearothermophilus 6 22 37 55 Produkcja pigmentu ”+++” wzrost dobry, ”++” wzrost umiarkowany, ”+” wzrost słaby, ”-” brak wzrostu Hodowle bakteryjne w pożywce płynnej LB oraz na stałym podłożu agarowym LA do zadań 2–7: Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Staphylococcus aureus, Geobacillus stearothermophilus. Uwaga: Każda podgrupa wykonuje WSZYSTKIE DOŚWIADCZENIA DLA JEDNEGO Z GATUNKÓW! 1  Ćwiczenie 2. Badanie wpływu temperatury na przeżywalność drobnoustrojów Wyznaczanie czasu śmierci cieplej w temperaturze 60ºC i 100C dla badanych gatunków bakterii. Materiały: hodowla bakteryjna w pożywce płynnej LB; 2 płytki Petriego z podłożem agarowym LA; 2 probówki z pożywką płynną LB (2 ml LB); łaźnia wodna o temperaturze 60C; łaźnia wodna / termoblok o temperaturze 100C. Wykonanie: LAB 3: 1. Do 2 probówek zawierających 2 ml pożywki płynnej LB dodać 0,5 ml hodowli nocnej bakterii. 2. Dwie płytki z podłożem agarowym LA podzielić na 6 sektorów (odpowiadających każdemu punktowi czasowemu: 0 (kontrola), 5, 10, 20, 30, 40 min). 3. Na płytkę w sektorze 0 (kontrola) posiać bakterie rysą wężykowatą (w formie zygzaku). 4. Probówki umieścić w łaźni wodnej / termobloku o temperaturze odpowiednio 60C oraz 100C. 5. Po czasie 5, 10, 20, 30 i 40 minut od momentu rozpoczęcia inkubacji, hodowle wysiewać za pomocą jałowej ezy w odpowiednim sektorze płytki z podłożem agarowym LA. 6. Posiane płytki inkubować przez 24 godziny w odpowiedniej dla danego gatunku temperaturze. LAB 4: Odczytać wyniki posiewów po inkubacji. Wynik badania: Wyniki zestawić w tabeli według schematu poniżej. Określić czas śmierci cieplnej w temperaturze 60C oraz 100C dla badanych szczepów. 60C 100C Gatunek Czas ekspozycji (min) Czas ekspozycji (min) bakterii K (0) 5 10 20 30 40 K (0) 5 10 20 30 40 ”+++” wzrost dobry, ”++” wzrost umiarkowany, ”+” wzrost słaby, ”-” brak wzrostu Ćwiczenie 3. Badanie wrażliwości szczepów drobnoustrojów na działanie wybranych środków do dezynfekcji Materiały: hodowla bakteryjna w pożywce płynnej LB; 8 jałowych próbówek szklanych; 8 płytek Petriego z podłożem agarowym LA; środki do dezynfekcji: 70% etanol, 3% H2O2, Mikrozid AF Liquid, 2% roztwór płynu do mycia naczyń, 5% ACE, 0,25% Surfanios, Listerine, 5% (lub 10%) Betadine. 2 Wykonanie: LAB 3: 1. 8 płytek z podłożem agarowym LA podzielić na 6 sektorów, odpowiadających każdemu punktowi czasowemu: 0 (kontrola), 1, 5, 10, 20, 60 min. 2. Na płytki w sektorze 0 posiać bakterie z hodowli nocnej rysą wężykowatą (w formie zygzaku) (kontrola). 3. Do jałowych probówek wprowadzić po 1 ml każdego ze środków dezynfekcyjnych (Betadine – 0,5 ml), po czym dodać 0,1 ml hodowli nocnej badanych bakterii (do Betadine – 50 µl). 4. Po czasie 1, 5, 10, 20 i 60 minut od momentu rozpoczęcia inkubacji zawiesiny bakterii wysiewać za pomocą jałowej ezy w odpowiednim sektorze płytki z podłożem agarowym. 5. Posiane płytki inkubować przez 24 godziny w odpowiedniej dla danego gatunku temperaturze. LAB 4: Odczytać wyniki posiewów po inkubacji. Wynik badania: Wyniki zestawić w tabeli według schematu poniżej. Ocenić skuteczność działania badanych środków do dezynfekcji. Lp. Gatunek Nazwa środka Czas ekspozycji na działanie środka do dezynfekcji (min) bakterii do dezynfekcji 0 1 5 10 20 60 1 2 3 4 5 6 7 8 ”+++” wzrost dobry, ”++” wzrost umiarkowany, ”+” wzrost słaby, ”-” brak wzrostu Ćwiczenie 4. Badanie wpływu promieniowania UV na wzrost drobnoustrojów UWAGA: promieniowanie UV jest szkodliwe dla oczu i skóry! Zakładamy okulary oraz rękawiczki. Materiały: hodowla bakteryjna w pożywce płynnej LB; 6 płytek Petriego z podłożem agarowym LA; lampa UV. 3 Wykonanie: LAB 3: 1. Na 6 płytek z podłożem agarowym LA wysiać po 0,1 ml hodowli nocnej badanej bakterii (posiew „na murawę”). 2. Płytki z wysianymi bakteriami eksponować na promieniowanie UV przez 0.5, 1, 5, 10, 20, 30 minut. W trakcie naświetlania płytki przykrywać wieczkiem do połowy (ponieważ promieniowanie UV nie przenika przez plastik, przykryta część płytki posłuży jako kontrola). 3. Płytki po naświetlaniu inkubować przez 24 godziny w odpowiedniej dla danego gatunku temperaturze. LAB 4: Odczytać wyniki posiewów po inkubacji. Wynik badania: Wyniki zestawić w tabeli według schematu poniżej. Ocenić wrażliwość badanych szczepów na promieniowanie UV po ekspozycji w różnych przedziałach czasowych. Czas ekspozycji (min) Gatunek bakterii kontrola 0,5 1 5 10 20 30 ”+++” wzrost dobry, ”++” wzrost umiarkowany, ”+” wzrost słaby (kilka kolonii), ”-” brak wzrostu Ćwiczenie 5. Badanie wpływu pH środowiska na wzrost drobnoustrojów Materiały: hodowla bakteryjna na stałym podłożu agarowym; płytki Petriego z agarem odżywczym o pH 5, 6, 7, 8, 9 i 10. Wykonanie: LAB 3: 1. Wykonać posiewy badanych gatunków drobnoustrojów na płytki z agarem odżywczym o pH 5, 6, 7, 8, 9 i 10 wykonując posiew redukcyjny. 2. Posiane płytki inkubować przez 24-48 godzin w odpowiedniej temperaturze. LAB 4: Odczytać wyniki posiewów po inkubacji. Wynik badania: Wyniki zestawić w tabeli według schematu poniżej. Ocenić wrażliwość badanych szczepów na kwaśne i zasadowe środowisko. Określić optymalne pH badanego drobnoustroju. pH Gatunek bakterii 5 6 7 8 9 10 ”+++” wzrost dobry, ”++” wzrost umiarkowany, ”+” wzrost słaby, ”-” brak wzrostu 4 Ćwiczenie 6. Badanie wpływu stężenia NaCl na wzrost drobnoustrojów Materiały: hodowla bakteryjna na stałym podłożu agarowym; płytki Petriego z agarem odżywczym o stężeniu NaCl 1%, 3%, 5%, 10%. Wykonanie: LAB 3: 1. Wykonać posiewy badanych gatunków drobnoustrojów na płytki z agarem odżywczym o różnym stężeniu NaCl (1%, 3%, 5%, 10%) wykonując posiew redukcyjny. 2. Posiane płytki inkubować przez 24-48 godzin w odpowiedniej temperaturze. LAB 4: Odczytać wyniki posiewów po inkubacji. Wynik badania: Wyniki zestawić w tabeli według schematu poniżej. Ocenić wrażliwość badanych szczepów na stężenia soli. NaCl (%) Gatunek bakterii 1 3 5 10 ”+++” wzrost dobry, ”++” wzrost umiarkowany, ”+” wzrost słaby, ”-” brak wzrostu Ćwiczenie 7. Badanie wpływu fioletu krystalicznego na wzrost drobnoustrojów Materiały: hodowla bakteryjna na stałym podłożu agarowym; płytki Petriego z agarem odżywczym zawierającym 0,5 mg/L i 3 mg/L fioletu krystalicznego. Wykonanie: LAB 3: 1. Wykonać posiewy badanych gatunków drobnoustrojów na płytki z agarem odżywczym zawierającym 0,5 mg/L i 3 mg/L fioletu krystalicznego wykonując posiew redukcyjny. 2. Posiane płytki inkubować przez 24-48 godzin w odpowiedniej temperaturze. LAB 4: Odczytać wyniki posiewów po inkubacji. Wynik badania: Wyniki zestawić w tabeli według schematu poniżej. Ocenić wrażliwość badanych szczepów na stężenia fioletu krystalicznego. Fiolet krystaliczny (mg/L) Gatunek bakterii 0,5 3 ”+++” wzrost dobry, ”++” wzrost umiarkowany, ”+” wzrost słaby, ”-” brak wzrostu 5 Ćwiczenie 8. Obserwacja halobakterii. Barwienie komórek halobakterii z rodzaju Halobacterium spp. LAB 4 Materiały: hodowle halobakterii na stałym podłożu agarowym Eimhjellena; zestaw do barwienia halobakterii. Skład podłoża Eimhjellena (Eimhjellen, 1965): ekstrakt drożdżowy – 5,0 g MgSO4  7H2O – 2,0 g CaCl2  2H2O – 0,5 g NaCl – 25 g woda demineralizowana – do 100 ml. Wykonanie: 1. Wykonać obserwację morfologii kolonii halobakterii, wzrastających na stałym podłożu agarowym Eimhjellena. 2. Wykonać barwienie komórek halobakterii z rodzaju Halobacterium spp.: Na odtłuszczone szkiełko podstawowe nanieść kroplę 20% roztworu NaCl i zawiesić w niej bakterie. Po wysuszeniu preparat utrwalić 2% kwasem octowym przez 5 min. Na utrwalony preparat nanieść 0,25% roztwór wodny fioletu krystalicznego, tak aby całkowicie zakrył powierzchnie rozmazu. Barwnik pozostawić przez 3 min. Preparat spłukać wodą i pozostawić do wyschnięcia. Wykonać obserwacje mikroskopowe za pomocą mikroskopu świetlnego (obiektyw immersyjny 100x). Wynik badania: Określić formę morfologiczną komórek halobakterii (pałeczka czy ziarniak). Zrobić zdjęcie spod mikroskopu. OPRACOWANIE WYNIKÓW Z LAB 3 I LAB 4 Wspólnie cała grupa odczytuje wyniki posiewów, zestawia je w tabeli i interpretuje. Należy opisać wyniki uzyskane w podgrupie i porównać je z wynikami dla wszystkich gatunków drobnoustrojów badanych w danej grupie. Wyniki przedstawić w postaci tabeli/tabel. Wyciągnąć wnioski z przedstawionych wyników, np. który z badanych gatunków drobnoustrojów był najbardziej odporny na badane czynniki fizyczne i chemiczne. 6