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Camille MOUCHART 2024 CHAPITRE 4 : BACILLES GRAM - ; NON FERMANTANTS ; LE GENRE PSEUDOMONAS 1. ESPÈCES ET PATHOLOGIES Le Pseudomonas aeruginosa ou bacille pyocyanique est une bactéries de milieu aqueux...

Camille MOUCHART 2024 CHAPITRE 4 : BACILLES GRAM - ; NON FERMANTANTS ; LE GENRE PSEUDOMONAS 1. ESPÈCES ET PATHOLOGIES Le Pseudomonas aeruginosa ou bacille pyocyanique est une bactéries de milieu aqueux. Elle produit un pigment qui s’appelle pyocyanine. Elle est opportuniste. Elle peuvent devenir résistante au antibiotique donc il faut faire attention. Elle résiste au sel biliaire mais n’est pas intestinale. Elle ne fait pas partie de la flore intestinale et n’est donc pas pathologique par ingestion. Pathologie : Infection peau : les grand bruler sont rincer régulièrement donc avec de l’eau stériliser pour éviter les infection de Pseudomonas aeruginosa. Surinfection de plaies (brûlures) → pus verdâtre Otites externes : les grand nageures car sont souvent dans les piscine ou il y en a. Infections nosocomiales (VRB, septicémie) 2. RÉSERVOIRS Le Pseudomonas aeruginosa vie dans un environnements aqueux (eau, sol, végétaux). Elle est saprophyte ! Eviers, robinets, respirateurs,... Solutions antiseptiques,... Biofilms Pas intestinale 1 Camille MOUCHART 2024 3. DÉFINITION-CLASSIFICATION Famille : Pseudomonadaceae Genre : Pseudomonas Espèces : Pseudomonas aeruginosa Caractères morphologiques et biochimiques : BG –, isolés Glucose - Non entérobactérie / non fermentant Aérobie stricte Oxydase + Production de pyocyanine (cf. milieu Ps. Agar) Pathologie : colibacilloses pré- et post-sevrage, entérites, septicémie Réservoir (et pathologie) : Ils ne font pas partie de la flore normale intestinale → pathogène/porteurs sains ! CYTOCHROME OXYDASE Le cytochrome oxydase est une enzyme respiratoire. C’est le dernier accepteur d’électrons de la chaîne respiratoire chez les aérobies strictes (O2). Il n’y a donc que les bactéries aérobie strictes qui ont la cytochrome C oxydase. Ses dernier sont alors des non fermentants (ex. Pseudomonas) et donc absente chez les entérobactéries (fermentants). C’est pas la même enzyme qui permet la respiration aérobie chez l’entérobactéries. Ils en ont une autres pour ça mais pas la Cytochrome C oxydase. MODE OPÉRATOIR Sur colonie isolée de BG-, résistante aux sels biliaires et sucre - (lactose p.ex.) 1. Sur un papier filtre, déposer un disque de substrat (DMPD = Diméthyl-paraphénylène Diamine), avec une pince en plastique. 2. Déposer 2 à 3 gouttes d’eau de ville sur le disque → diffusion du réactif. 3. Avec une öse en plastique, prélever une colonie isolée de BG-/L-. 4. Faire une strie perpendiculaire au disque 5. Si apparition d’une trace bleue/violette → oxydase + → Pseudomonas 2 Camille MOUCHART 2024 PRODUCTION DE PYOCYANINE La pyocyanine est un pigment bleuté. MODE OPÉRATOIR 1. Ensemencer la pente d’un milieu Pseudomonas agar 2. Visser le bouchon partiellement 3. Incuber 24h/37°C/aérobiose Si pigment bleu vert → Pseudomonas aeruginosa 4. IDENTIFICATION 1. Isolement du prélèvement mono-/polymicrobien sur gélose Mac Conkey 2. Incubation → colonies incolores 3. Recherche de l’oxydase → + 4. Galerie Api 20NE ou MALDI TOF et non galerie Api 20E car Ox + Gram - et résistante au sel biliaire et ne fermente pas le lactose GALERIE API 20NE Série de substrats et indicateur : 1. Suspension/sérum phy → 8 premiers tubes 2. Transfert de 200μL dans AUX Medium  12 derniers tubes + cupules 3. Ajout éventuel de paraffine (tests ‘soulignés’) 4. Incubation 29°C/24/aérobiose 5. Ajout éventuel de réactifs 6. Lecture = tests + ou - 7. Détermination du code → identité de la souche 3 Camille MOUCHART 2024 MALDI-TOF = MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION IONIZATION - TIME OF FLIGHT MALDI-TOF est une technique rapide d’identification et ce fait à partir d’une colonie isolée et fraîche. 1. Analyte (colonie) associé à une matrice protectrice 2. Dépôt sur plaque appropriée 3. Ionisation des protéines bactériennes par rayon laser → émissions d'ions +/- lourds 4. Ions accélérés dans un champ électrique -> migration Vitesse de migration fonction de m/z (m = masse ; z = charge) → Temps de vol propre à chacun 5. Détection du passage des ions en fin de parcours par un spectromètre de masse → mesure du temps de vol → spectre spécifique 4 Camille MOUCHART 2024 5. DANS LE DOMAINE AGRO -ALIMENTAIRE Interdite en eaux de source et minérales 0/250 ml Microfiltration : 1. Filtration sur membrane (porosité = 0,45μ) de 250ml 2. Dépôt sur milieu sélectif 3. Incubation 4. Lecture 5 Camille MOUCHART 2024 6