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PCR y Electroforesis Lorem ipsum dolor sit amet, adipiscing elit Facilitadora: Aidamalia VARGAS L PhD. La PCR es una técnica esencial en la Quiénes somos biología molecular que permite la amplificación rápida y precisa de Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Etiam aliquet eu mi quis fragmentos específicos de ADN lacinia. Ut fermentum a magna ut. TREY research 2 Componentes PCR ADN diana Mezcla de dNTP´s Oligonucleotidos (primers) Taq polimerasa Amortiguador o buffer TREY research 3 Pasos de la PCR ¿Qué ocurre en el termociclador? a) Desnaturalización (96°C) b) Apareamiento (Annealing) (55 - 65°C°) c) Extensión (Elongación) (72°C) Agregue un pie de página TREY research 4 PCR de transcripción inversa Se requiere el ADNc (ADN complementario) a partir de ARN ARNm  ADNc Pasos de la RT-PCR Expresión génica puede medirse utilizando una Conversión del ARN en ADNc usando reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa transcriptasa inversa inversa (RT-PCR) Amplificación del ADNc usando PCR convencional TREY research 5 RT PCR Análisis de la Expresión Génica ARNm a ADNc Pasos Se utiliza un fragmento de oligo (T) como cebador para unirlo a la cola de poli(A) del extremo 3' de cada ARNm. La transcriptasa inversa utiliza el ARNm como plantilla para sintetizar las hebras de ADNc. El híbrido resultante ARN-ADNc se separa al aumentar la temperatura. Un cebador específico se hibrida con su secuencia complementaria. La ADN polimerasa produce la hebra de ADN complementaria, comenzando por el primer sitio de unión. Las hebras se separan aumentando la temperatura y el ciclo PCR se repite. TREY research 6 Aplicaciones de la PCR Diagnóstico Médico: La PCR es utilizada para detectar patógenos, mutaciones y enfermedades genéticas. Identificación Genética: Se emplea en análisis de huellas genéticas, estudios de parentesco y forenses. Biología Evolutiva: La PCR ayuda a estudiar relaciones filogenéticas y evolutivas entre especies. Biotecnología: Es esencial en la clonación y manipulación de genes. TREY research 7 Variaciones de la PCR PCR en Tiempo Real (qPCR) La qPCR permite la detección y cuantificación de la amplificación de ADN en tiempo real Agregue un pie de página TREY research 8  RealTime PCR La principal diferencia radica en la detección y cuantificación en tiempo real del producto amplificado. Se utilizan sondas marcadas con fluoróforos La sonda se une al fragmento de ADN en amplificación, el fluoróforo se separa, liberando una señal fluorescente que se puede medir en tiempo real TREY research 9 Variaciones de la PCR PCR multiplex y PCR anidada TREY research 10 Electroforesis Transiluminador TREY research 11 Gracias TREY research 12  Taller 2 PCR y Electroforesis en gel de Agarosa Entrar a la siguiente dirección: https://www.labxchange.org/ Inscribirse como usuario Agregue un pie de página TREY research 13  Taller 2 PCR y Electroforesis en gel de Agarosa Entrar a la siguiente dirección: http://virtual-pcr.ico2s.org/ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC67677 70/ Agregue un pie de página TREY research 14 Taller 2 PCR y electroforesis en Gel de Agarosa Electroforesis: Simulación https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:5d12867d:lx_simulatio n:1 Agregue un pie de página TREY research 15 Taller 2 PCR y electroforesis en Gel de Agarosa Electroforesis: Interactivo https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:c8f7c17a:lx_simulation:1 Conteste en su informe las siguientes preguntas: 1. Cuál es la función de la electroforesis en Biología Molecular? 2. Por qué los ácidos nucleicos están cargados negativamente? 3. Cómo explica Ud. que el ADN puede caer en los pocillos sin disolverse en el buffer (solución amortiguadora)? 4. A qué nos referimos con el término “pares de bases”? 5. Cuál es la función de la escalera de ADN? 6. Cuál es el tamaño de los fragmentos de ADN separados en este interactivo? 7. Cuáles son las conformaciones que pueden adoptar los plásmidos? Y ¿cómo afecta su migración en el gel de agarosa? 8. Cómo es posible visualizar las bandas de ADN en el gel de agarosa? Agregue un pie de página TREY research 16 Taller 2 PCR y electroforesis en Gel de Agarosa PCR Interactivo https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:8a3f7c27:lx_simulation:1 Conteste: 1) Qué es la PCR? 2) ¿Cuál es el objetivo de utilizar esta técnica? Presente un resumen de todos los casos mostrados en el interactivo. 3) Cómo se puede observar el resultado final de una PCR convencional? Agregue un pie de página TREY research 17 Agregue un pie de página TREY research 18 Agregue un pie de página TREY research 19