Indicadores Biológicos MGA 0501 PDF

MGA 0501. INDICADORES , BIOLOGICOS Un indicador biológico es una preparación caracterizada de un microorganismo específico resistente a un proceso de esterilización en particular. Los indicadores biológicos se r utilizan como auxiliares en la operación de la califica...

MGA 0501. INDICADORES , BIOLOGICOS Un indicador biológico es una preparación caracterizada de un microorganismo específico resistente a un proceso de esterilización en particular. Los indicadores biológicos se r utilizan como auxiliares en la operación de la calificación física de aparatos de esterilización, en el desarrollo y ) establecimiento de un proceso de esterilización validado para un producto, en la verificación periódica de esterilización validada para un producto, en la verificación periódica de esterilización de equipo, materiales y componentes de empaque que se empleen en procedimientos asépticos y en 1, programas de verificación periódica de ciclos de esterilización previamente establecidos y documentados. Los indicadores biológicos pueden presentarse principalmente > en dos formas en las cuales se utiliza un cultivo de un microorganismo de una especie conocida. En una de las presentaciones, las esporas se adicionan a un soporte (disco o d tira de papel filtro, vidrio o plástico) y se empaca tanto para mantener la integridad del soporte inoculado como para permitir que el agente esterilizante ejerza su efecto sobre el empaque individual. Otra presentación es cuando las esporas se agregan a unidades representativas del lote por esterilizar (producto sin inocular) o a unidades similares; el producto al inoculado no afecta negativamente las características de germinación de las esporas viables. Cuando el producto por esterilizar es un líquido, en el cual no es práctico adicionar el 1L indicador biológico a las unidades seleccionadas, las esporas ), viables pueden agregarse a un producto simulado cuya e resistencia al proceso de esterilización no difiere a la presentada por el producto por esterilizar. MGA N5N1 INDICADNRES RINI ÁRINNC Scanned with Scanned ACE Scanner with ACE. ¡canos '- Unidos Mexican de e los Estados 426 Farmacopea. importante, por tanto, que el indi o :ológico, se precisa Es "mp ; cador Diológi y izary su interdependencia entre el: número de espora S vi o Manteng a se ivame nte un indicador biológico. iliz e : producto por ester te características de - resistencia a través de sy n ables y las para utilizar efectiva PU 0 Cl ompleto del * a. E o a 10 " empaque) y tener una vigencia. Un indicador biológico preparado - do de tener un trials ,... arti de sus componentes tipos de mi croorganismos que de una cepa microbiana en particular y que se > Ttir de esporas. 0 S 4 nroducto : : Te , general del númer Y icrobiana presente en el produc edacto en una variedad de ciclos empleando el Mismo _. Utiliza, , a sd — Ti Ó. : - € de la1a esterilización. Na ! ión a evaluac " Cuando esterilización, ". puede, tener diferentes y Presentacio 1 nes: ode : constituyen : inmedisra antes canto Ja esterilización se realiza una o lendos que contenga un número relativamente grande de es: Una Clase € Ne. Jección del 11 o es i sible a la de Cc la cargaLo microbiana. La se. a, > N inóculo o acarreador, digamos 106 o 107, requiere Poras por MDE a < más extensa e H Ls requiere del conocimiento [ y tl grado de exposición a la esterilización, esto es, el que el. _—..... :. - > El NÚ biológico jológico wilización eres. especifico de esterilización esequ de ta le valores D aplicados se determinen por la cuantía E eo de near N - :earacterísticas € " - 5 resistenc ce utilizado bajo característic —. cción de esporas viables a través de 4 manera - que cuando es ut! Jesafio al proceso jede €esterilización redu Una cuenta rea| sun indicadores biológicos contienen solam , - Otros operación representa 1 < ierobi atural "opresente En ndica o esporas requerido para indicar que el Ente ciclo el número" q e validado ue excede al reto de la carga microbiana n£ a arodueto, C Las esporas seleccionadas : para ut! s— Y 1Zars aplicado. El resultado final necesario. sería la presencia S 'do v AE , rticular, : E icrobi En E arse on diferentes ausencia "EAde crecimiento microbiano cuando se cultiva la indicadores € < biológicos de un PI oceso "...... necesariamente son adecuadas.para »emp sosmr esterilización preparación del 4 indicador biológico. No se realiza una cu ta biológicos de esporas particularmente. Otros indicadores D de es u e en EN otros ¿e ico de definen condiciones del: mismo O indi :. ; Las características _ de un indicador + : Pdam cnte calibrados, , bajo puedenA tener cantidades. altas o. bajas para9. aplicaciones ye utilizando aparatos especiales y _ Es importante que especiales particulares para ; verificar periódicamente [a - * as. E ae A e indica biológico dado í esterilizado esterilización. por vapor _de instrumental quirúrgico todos los. laboratorios condiciones US sc[ase un características jos USUATIOS estrictamente indicador de en emergencias en el quirófano, cada forma de indicador 0 atos. Las c a r :. den: biológico : ha sido : validado eació para cada aplicación. tengan acceso a tales apar de uso de un indicador biológico... ,..-. ee. es e resistencia en comio [ss eeocionadas enla etiqueta, si se Cuando un indicador biológico es utilizado — fuera de las el: ID. ueden no ser idénticas a las condiciones recomendadas diferentes, el indicaciones de la etiqueta y des ea condiciones y aparatos de esterilización os "e ificación mínima de parámetros de ca susde validarse resistenci de uso, la e UU... usuario. averigua el efecto de tales variaciones y utiliza qu y ara " a NE apropiadamente el indicador biológico para el propósito si seríaÍ insu N. e, - por lo q olcion requerido como en la verificación periódica de ciclos de propósitos reales de uso para 'as co a esterilización o en la validación de un proceso de va a aplicar. a esterilización. esto es, certificar que la esterilización se llevó cabo y con una letalidad adecuada. No obstante en la mayoria INDICADORES BIOLÓGICOS EN TIRAS DE PAPEL de los casos, los ciclos de esterilización pueden E PARA ESTERILIZ ACIÓN POR CALOR SECO. m_ como guia lo us do MN epa aos Son preparaciones de esporas viables obtenidas a partir de un a las diferencias d ya Ne iones debidasdesctenlizaciónd Teen des nes S a necesarias cultivo. : derivado , de una cepa específica : de Bacillus subtili” ! : mencionadas y en las condiciones de esterilización de.. subespecieo niger (ATCC 9372), impregnadas en una tira de fabricante y del usuario. Mantener los aparatos y condiciones , L ! | de calidad adecuada en mE. papel de calidad satisfactoria, (un papel de call de esterilización con especificaciones constantes de un ciclo de. filtración media, puro MU. E. puede ser un papel filtro de velocidad de filtrac esterilización a otro para un uso válido del indicador biológico. ! Ra E imiento sin do de oscurecimiento Enl Mo , y derivado del algodón; cualquier grado n los procesos de esterilización por vapor a ciertas d. interfi suu so) empacadas , , esmenuzamiento no Inte. 1er S decuado permeable al aire temperaturas, se emplean comúnmente esporas de cepas ,. N u apropiadas de Bacillus stearothermophilus (ATCC 7953), indi vidualmente e un ecpreE 5 Es 1 j sterilización por debido a la resistencia que presentan a esta forma de caliente, caracterizado en su resistencia € “e ac alificar > o Neta esterilización. En los procesos de esterilización por calor seco calor seco y son empleados en Proba - E sterilización validar y verificar periódicamente los ciclos de €: u óxido de etileno, se emplean comúnmente esporas de una subespecie de Bacillus subtilis (ATCC 9372). Las esporas de por calor seco. cepas de Bacillus pumilus (ATCC 27142), han sido utilizadas como indicadores biológicos para a veri veri ió 16di : i ad. j uerte dissi ficación procesos de :esterilización por > radiaciones periódica de Tabla 0501.1. Tiempos de sobrevivencia y y esporas: ionizantes. : iones específicas de esp La preparación de la s. correspondiente a concentracio 1 a suspensión concentrada de esporas de los Tiempo ee roced ganismos seleccionados, requiere del desarrollo de Tiempo de uerte procedimientos apropiados que incluyan cultivos masivos, Eme sobrevivencia Le n) cosechas y mantenimiento de la suspensión de esporas La Be (min) a or de suspensión concentrada contiene predominanteme: f (contenido/tiras) no menor de no ma Inactivas (no germinativas) que se han m mas 7 * 80 10“ a menos de 5 x 10* D 9D precauci en medios necesarí tomar antenido líquidos no nutritivos,$. Es15 necesario 4 5 D asegurar que la preparación del indicador biolóoi *necipaTa 5 10/a menos de 5 x 10 10D sustancialmente la resistencia al proceso d lológico no altera 5 x 105 a menos de 5 x 105 3D 11D. y 280 de esterilizaci 6 los microorganismos indicadores, El funci lama 5» 10%a PU A : 10nami o 7 menos de 5 x 10, D Le indicador biológico depende tanto de lac e 5 x 107 a menos de 5 x 10" 5D 13D esporas viables, como de su resistencia al uenta inicial de 5x10% ato” 6D proceso de esterilización, Dr - 5 valor D mencionado en la etiqueta. Scanned with Scanned with ACE ACE Scanner  MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS 427 Si el indicador biológico empleado para esterilización por conocidas, que han sido validadas de acuerdo con los calor seco tiene una coentranión de esporas declarada de requisitos de seguridad y operación como son: prevención de 5 x 107 a menos de 5 x 10" esporas por tira, y se sujeta a choques eléctricos, explosiones de gas y quemaduras. Evaluar condiciones de esterilización por calor seco a 160 + 5 “C tiene al indicador biológico en una cámara de esterilización un valor D entre 1.3 min y 1.9 min, un tiempo de equipada con un dispositivo que caliente el aire contenido en sobrevivencia no menor de 3.9 min y un tiempo de muerte no ella, preferentemente por medios eléctricos y que disponga de mayor a 19 min. Si se tiene otra concentración de esporas un equipo mecánico de ventilación para que la temperatura sea declarada y se sujeta a condiciones de esterilización por calor la misma en toda la cámara, la cual tiene sensores de seco a 160 + 5 “C tiene un valor D entre 1.3 y 1.9 min y temperatura y de tiempo. El diseño de la fuente de calor es de tiempos de muerte y de sobrevivencia que correspondan a los tal manera que permita que el indicador biológico se caliente especificados en la abla 0501.1 para varias concentraciones bajo las condiciones específicas. El perfil de temperatura es de esporas. Si los indicadores son recomendados para conocido e identificar las zonas en las cuales la temperatura no temperaturas de esterilización diferentes a 160 + 5 *C sea la especificada. El intervalo de temperatura en la cámara cumplen con las especificaciones anteriores cuando se sujetan de esterilización es de 40 a 300 *C con variaciones no mayores a condiciones de esterilización de 160 + 5 “C. Si el indicador a 2 “C. El equipo tiene una puerta de acceso adicional para biológico es usado bajo otras condiciones de temperatura el permitir la entrada o salida de muestras en 6 s, de tal manera valor D puede estar fuera del intervalo especificado en la tabla que cuando la temperatura sea de 120 a 190 *C y se abra el 0501.1. pero los tiempos de sobrevivencia y muerte acceso, ésta regresa a la original dentro de 30 s y si la relacionados con cada valor D corresponden a los tiempos temperatura especificada es de 220 *C o mayor, se recupera en dados en la tabla 0501.1. El indicador biológico no contiene un minuto. un número menor de esporas viables que lo indicado en la etiqueta, ni más del 300 % de dicho valor. La población total 1. Determinación de tiempo de sobrevivencia y tiempo de viable de la tira contiene por lo menos 90 % de esporas. muerte. Tomar 200 muestras del indicador biológico en su empaque individual y repartirlos en números iguales en dos o EMPAQUE Y CONSERVACIÓN. Conservar en el empaque cuatro recipientes adecuados, distribuirlos en la cámara de original bajo las condiciones recomendadas en la etiqueta; esterilización en una posición específica para que estén proteger de la luz, sustancias tóxicas, humedad y calor expuestos a las condiciones de esterilización establecidas. excesivo. Calibrar la cámara de esterilización previamente a su uso, con los recipientes pero sin muestras, precalentándola y operando FECHA DE CADUCIDAD. Se determina en base a los la unidad durante por lo menos 60 min. Para realizar la prueba, estudios de estabilidad y no es menor de 24 meses a partir de precalentar la cámara a la temperatura especificada y mantener la fecha de fabricación la cual se inicia cuando fue realizada la ésta durante 30 min. Colocar uno dos de los recipientes con primera cuenta viable total. 100 muestras en total del indicador biológico y continuar la operación del aparato. Comenzar a tomar el tiempo de ETIQUETADO. En la etiqueta establece que es un indicador exposición en el momento en que la temperatura sea 0.5 *C por biológico en tiras de papel para esterilización por calor seco, debajo de la temperatura especificada. Por ejemplo: para indicar su valor D, tiempos de sobrevivencia y de muerte 106 esporas por tira con una temperatura de esterilización realizados bajo las condiciones de esterilización indicadas de 160 + 5 “C y un valor D de 1.6 min, el tiempo de exposición en la etiqueta, su cuenta viable de esporas, el origen y la cepa es de 5 min. Extraer el o los recipientes con las muestras. Para de la cual las esporas utilizadas fueron obtenidas y sus determinar el tiempo de muerte, repetir el procedimiento condiciones recomendadas de conservación. La etiqueta indica inmediatamente o con un precalentamiento semejante al además, las dimensiones de las tiras de papel e incluir mencionado anteriormente si ha transcurrido un periodo instrucciones para la recuperación de las esporas y su considerable con las otras 100 muestras no expuestas, pero destrucción segura. También se indica que el valor D para el ejemplo dado por un periodo de 16 min, en vez de los establecido es reproducible solamente bajo las condiciones 5 min, anteriormente empleados terminado el ciclo de prueba exactas de su determinación, que el usuario no necesariamente antes de transcurrir 4 h, sembrar individualmente las muestras obtendrá los mismos resultados y puede determinarlo para su en tubos que contengan 10 mL de caldo de soya tripticaseína uso particular adecuado. (MGA 0381). Incubar los tubos entre 30 y 35 *C, observarlos diariamente hasta completar siete días de incubación. La IDENTIFICACIÓN. El microorganismo empleado como prueba es satisfactoria si todos los tubos sembrados con indicador biológico, cumple con las características las muestras expuestas para determinar el tiempo de morfológicas, de cultivo y bioquímicas, de la cepa de Bacillus sobrevivencia muestran crecimiento específico de Bacillus subtilis variedad niger equivalente al ATCC 9372, detalladas subtilis subespecie niger y si ninguno de los tubos inoculados en indicadores biológicos en tiras de papel para esterilización con las tiras empleadas para determinar el tiempo de muerte, por óxido de etileno. presentan crecimiento. PRUEBAS DE RESISTENCIA. En todas las pruebas 2. Determinación del valor D. Dividir 100 muestras del descritas en esta sección y en la sección de pureza trabajar en indicador biológico en 10 grupos iguales. Colocar cada grupo condiciones asépticas, usando cuando sea necesario material en recipientes adecuados de tal manera que las muestras estén estéril. Emplear aparatos de características termodinámicas expuestas a las condiciones de esterilización establecidas, Scanned with Scanned Scanner ACE Scanner with ACE  xic, anos 13.0 428 Farmacopea de os Estados Unidos Me medio de cuen , El nú, mero r del 90 % ta viable e po reió S nón Sal cz ent ada del mi Amara de or mí nimo obtenido en lac en una localización - especí ífica dentro de una c bas de no es menor sin calentar. venta viable [ocalibrada mid ara la porción e ste sisril teniza ciació ) n conJrec AipiM os tiempos de ente vacíos. Se nta: la concleencctrioacnaiór de esporas, P re. n estos el exposición tomando uenta. ESTABILIDAD DESTRUCCIÓN r en con dicados en la eti: a, Esto: Y e realice una cu valor D y la ej quet como: 0.5; 1;. ” enta de esporas e tiempos se mm nentan ; for mar una serie ta > estima Estabilidad. Cu. ando S en las ¡éndosepar más do durante su peri. odo 5 - 6 min, extendién 21 tie allá del into mpo de loses muestras de retenc de vigencia,E ti, empos ión ind A. 2] incremento roceediendo o osel ica en "determinación de cuenta xtii ncisión de vialidad. El 1 la limita € lane 10 p rome. dio por muestra me “se con la ción de que 1 a osipoció de exp. n p uede mod ifi. viable total”1",, el nú mero btenido pen relacioón NO ES Menor aj es puntos car conseerecon cimie| nto,Joscuabrpar ietir con cualgIquier haya menos de U ndo un o del punto 50 M intervalo no me N tres valores D dete% rmmá insació altno i no r apl ivencia cor4 respon jente a un logan ica de mo abajo del rea lizada deconsc aran te ri tar los oridad. di Destrucción. An indicadores bio: de. de sobrevivencia cc , exponer), te ilizarlos por s de ant lógicos,. cero (cuenta de esporaras en las tiras sin terilizarlos p va po e un ti em po de al menos 30 s r dur j ica. Precalentar ! Es , min grau ficados-. el nun curva de muerte la tenga una letalilidad ma N in, N introducir el. Mer recipiente con 10 a 121 Copo r un méilitodo que zac dad m yor o cámara 30 min, int pri igual que la de est ión por vapor. Este ; inuar la roperació. n durante erilizaci 5 tras utilizad méto del apar: ato. la Tocámamar "el 2. as en losdo de p : o e ra sea ril izació 1Ó n e imientoss usa para exposición cu ando la temperatura de a. : la a de expr osde la tempera tura especi ificada, despla ués58 de que tiempo anteriores. procedim ficada, elo mer grupo de indicadores ha sido expu esto, extraerer e el prie 1 ipiente con las muestr etir el proces to, edimientoto con los 5 A as y rep tantes exponiendo igual temperatura INDICADO RES BIOLÓGICOS EN TIRA S DE PAPEL " o adife cada grupo a 18 de ESTERILIZACI ÍN POR ÓXIDO DE ETIL aaa m— tiempos. Para co cer PARA ÓN ENO id microorganismos N vivientes, no realizarel a A expuesta iones de es artir de un poras viables, obte nidas una "determinación a viable total"cada , tomando en So culntivo dey una cepa especí a p, — de poblac de exposición o deriva do subespecienice fi ca un de Ba cill us UA1 N r E a tir a U. os de e tiempo de pa pe l de calida d longados, se supone e se enctiempontrará un nú isfactori a ad ecuada puede ser satisfacto a (un papel de calida un panel Ar qu izar mero red uci do fil1 tro de velocidad de ivado puro y epdeierintvado del os dilMauci s.. po ro quese e ones , filtración medidiaa,, O se extraen- las esp pm. (menos de APT e oras En menor , cantidad de algodón), arca vi dualmente en un TE 10 mL) para que se btenga un numero e: stadísticamente , o adecuado fáci da vid por la mezcla de gas a no lmente p para Tepresentarro de UFC (unida doras de colonias) A óxido de 30 y 300 por caja. Cal des fo1 rmpro etileno. Estos indicadore est eriliz a , > ses ación por ox! indica s entre 30 t cular el p med io de biológ icos son emplea lea d s para ca lif. icar, > vali: dar verificar microorganismos sob ivientes par a cada tiempo de eriódi. camente los icl do y, NE revi cicloos de esí terioliizaeción por óxóxido de Exposición. Construir- áfica logari, tmo bas pe e 10 de 1 los ¡el ind microorganismos sobrevla sá etileno. Si el indicaicador biológico empleado para la ivientes en e je de las ordenadas jode MU esterilización por óxido de etileno tie. ne una co centra L desen eninar TIO de ex ¡ esporas declaradas óxido n ción de la po óntien Comino relación masitecimá el nteje 4ajuse came de 5 x 105 esporas a os de 5 x106 r tand os a una lín Í ea óxido de lin i Espo recta y calculando la p ras por tira, y ealidad. El valor D rep resenta e 1 ti son sujetas a a es 1eem mppo eti óxidoleno de de un queteco rili ntza enci gaón 60por0 +Óx30 mg me ; di o de exp etialenomezcon lafira gasax eosin a s q te de microorganis: osi ció mos en n D O e par a reducir el sem mperatura de 54 + 2 C con valor D no Es mayor un 90 % (un log de + 20 % del valari itmo). tmo La variación d ) de una una humne efiquta or estableciydo en la de 600 +10 % (en lo subsecuente llamadas las “condiHa. lor D ci on Ífi cas — 2.6 y 5.8 min, un es Específica ") ) tie tiempo de sobrev va orde entre Meneno uninen 3. Determinación 7.8 min y un tiem ivenci pu de la Pobl ación viable total. po de muerte no muestras del indicador Tomar tres. ma yo r de Jaradas y se sujeta biológico y proceder Si se tiene otra co. “determinación de po Como se indica en ncentració.zn de es poras e, ar: blación viable total" el indicador a este no bajo las biológicos en tiras para indicadores rilización por óxid de papel para vapor, "condiciones Espe o de etile 2.6 y 58 min que la temperatur con la diferencia cíficas”, tiene un a de incubación es de 30a35 €. de Y tiempos de Sobr valor D entre ad número promedio Calcular el evivencia y muer an alos de “Sporas por mue especificados en te que pi menor al indicado stra, este Valor no la tabla 0501. 1. se en Ja Etique es ta ni mayor al 300 Tecomiendan par Si los indicadore %. a ser usados con taciones e - de gas, temperatur diferentes re PRUEBAS DE PURE a y humedad de las " Piar ZA "condici ones Espe relativa, distintas uniones es la zabla 0507] cucíanficas", cumplen con las espec! óxi de : H iómos por ae p p brian la Ausenc le etileno bajo “condi do se sujetan a esterilización q Sos do de 1 ia. Mieroor E. microscópica L por sGrn e: de frotis teñidos A OS erva ci. ciones Específica ón s". Si el supe._—. por am (MGA 092 2. Límite de form biológico se Somete , d -- 1 as Veretativas, Tomar 3 muestr 7) u o 1 i a esterilización por i r indicador bio lógico y proceder > s d |. óxido de et “determinación de como se indica en"stras de og ¿uiciones, del interva lo cuenta viable tota|" especi _ ficae. per el valor D puede estar fuera biológicos en tiras o los tii empos de breviv de Papel para Esteri para indicadores indicador muerte de 0SsobOLre1. Elencia la excepción de cal lización por vapor N o. “empos o entar la par 0 ía ados en a Un baño de agua a te alícuota or "lógico No 65 *C durante 20 mi de la Suspensión en contiene un núme ua enor de esporas n Viables que lo Indi ro u del 300 % de cado en la etiq ueta, y no más dicho valor, La po de tiene por 10 Menos 90 blación total viab 9, de esporas, le de la tira con MGA 0501, IN DICADORES BIOLÓGICOS Scanned with Scanned h with A CE Scanner ACE Scanner  EEE TE EMPAQUE Y CONSERVACIÓN. Cumple con lo I. Determinación de tiempos de sobrevivencia y de muerte. establecido En Indicadores biológicos en tiras de papel para Tomar 200 muestras del indicador biológico en su empaque esterilización por calor seco". individual, repartirlas en números iguales en dos o cuatro recipientes adecuados, distribuirlas en una posición específica o iO lo Establecido en para que estén expuestos a las condiciones de esterilización — e ' papel para esterilización establecidas. Purgar la cámara cinco veces, evacuando cada por calor seco". vez, hasta una presión no mayor de 100 + 3 mm de mercurio con los recipientes en su lugar pero sin muestras. Proceder ETIQUETADO. Cumple con lo establecido en "Indicadores como sc ha indicado para la combinación de concentración de biológicos en tiras de papel para esterilización por calor gas, temperatura y humedad relativa; por ejemplo para las seco" con la diferencia de que la etiqueta indica que son "condiciones específicas", precalentar y regular la temperatura indicadores biológicos para ser utilizados en esterilización por a 54 +2 “C iniciar la operación y la verificación de los pasos óxido de etileno. las, que se detallan posteriormente. En el paso 4 inyectar gas el tiempo suficiente, para el ejemplo dado no menos de IDENTIFICACIÓN. El microorganismo empleado como 7.8 min. Colocar inmediatamente él o los recipientes con los indicador biológico cumple con las características indicadores biológicos en la cámara de prueba y continuar morfológicas, de cultivo y bioquímicas de la cepa de Bacillus como sigue: subtilis subespecie niger correspondiente a la cepa ATCC 9372: al microscopio, es un bacilo Gram positivo de 0.7 a |. Mantener las muestras a 54 + 2 *C durante 5 min. 0.8 um de anchura por 2 a 3 um de longitud, con endosporas 2. Evacuar la cámara de esterilización hasta tener una ovales y centrales que no deforman a la célula. Cuando se presión de no más de 100 + 3 mm de mercurio. cultiva entre 30 y 35 *C en aerobiosis en un medio adecuado, 3. Inyectar suficiente vapor de agua a la cámara (por el crecimiento se presenta en 24 h y un medio similar ejemplo vapor saturado), hasta alcanzar una humedad inoculado al mismo tiempo pero incubado entre 55 y relativa de 60 + 10 %. 60 *C no muestra evidencia de crecimiento en el mismo 4. Inyectar suficiente óxido de etileno calentado a una periodo, en agar las colonias tienen apariencia opaca y pueden temperatura regulada para obtener una concentración ser de color crema o ligeramente café, cuando se incuba en dentro de la cámara de 600 + 30 mg de óxido de etileno/L caldo nutritivo se forma una película en la superficie y puede concentración de gas apropiada para el ejemplo dado, presentar turbidez ligera o no presentarla. Algunas de sus mantener la temperatura y humedad durante 7.8 min. reacciones bioquímicas son: forma un pigmento negro a partir 5. Evacuar la cámara de esterilización a una presión de de la tirosina, licua la gelatina, utiliza citrato pero no 250 mg +3 mm de mercurio, romper el vacío con aire propionato ni hipurato, reduce el nitrato e hidroliza tanto el esterilizado por filtración. Repetir esta operación tres almidón como a la glucosa sin producción de gas, muestra una veces y retirar el o los recipientes con las muestras reacción positiva a la catalasa y a la prueba de Vogues-Proskauer. expuestas. 6. Repetir los pasos de 1 al 5 con el o los recipientes no PRUEBAS DE RESISTENCIA. En todas las pruebas expuestos, pero manteniendo las condiciones descritas en esta sección y en la sección de Pureza trabajar en mencionadas en el punto 4 por un tiempo apropiado. condiciones asépticas, usando cuando sea necesario material Para el ejemplo dado son 58 min. estéril. Evaluar al indicador biológico en una cámara que cuente con medios para asegurar una mezcla adecuada del gas Terminado el ciclo de prueba y antes de transcurrir 4 h, esterilizante y un calentamiento del mismo a una temperatura sembrar individualmente las muestras, en tubos que contengan no mayor a la previamente seleccionada, de manera que no 10 mL de caldo de soya tripticaseína (MGA 0381). Incubar los entre líquido a la cámara de prueba. En consecuencia, la tubos entre 30 y 35 *C y observarlos diariamente hasta cámara se halla equipada con un dispositivo para calentarla y completar siete días. La prueba es satisfactoria si todos los para verificar y controlar la temperatura, la presión, la tubos sembrados con las muestras expuestas para determinar el humidificación y la concentración de gas, con la finalidad que tiempo de sobrevivencia muestran crecimiento específico de bajo las condiciones especificadas de temperatura, presión y Bacillus subtilis subespecie niger, y si ninguno de los tubos humedad, el tiempo para alcanzar la concentración de gas inoculados con las tiras empleadas para determinar el tiempo seleccionada no sea mayor de | min, el tiempo para evacuar la de muerte presentan crecimiento. cámara de prueba no es mayor de 1 min, y la cantidad de gas administrada en la cámara de prueba sea tal que la mezcla 2. Determinación del valor D. Proceder como se indica en gaseosa alcance una concentración de 600 mg/L, con una Determinación de valor D para indicadores biológicos en tiras variación no mayor a + 5 %. El dispositivo para verificar la de papel para esterilización por calor seco, hasta “previamente temperatura tiene la capacidad de determinar una temperatura calibrada con recipientes vacios”. Repetir los pasos del 1 al con variación de + 0.5 “C. El aparato está provisto de un 5 de determinación de tiempos de sobrevivencia y muerte, con dispositivo o dispositivos apropiados para verificar la presión, diferentes grupos de muestras, pero exponiendo cada grupo a que indiquen la presión del recipiente con una precisión una serie de tiempos de exposición como 3, 5, 7, 10, 15, de + 0.84 kPa (+ 6.35 mm de mercurio). Los tiempos 20 min, etc. Para establecer la cuenta de esporas en el tiempo especificados se aplican y observan usando dispositivos de cero, exponer otro grupo de muestras a las mismas condiciones operación apropiados, graduados en décimas de segundo. de esterilización, pero excluyendo el paso 4 (sin la inyección RAFA AENA MIPRIFNA NAFTA MIA Aiaa Scanned with Scanned with ACE ACE Scanner  blecido en EMPAQUE Y CONS ERVACIO E. " Esta ¡ción puede biol ógic os en ti papel para esterilizació, Indicado res pos de exposte' a tres de gas). El incremento de los tiemque por calor. limitación de no haya Me salar s c "e modificarse con la e tres v umple lo establecido E iendo un intervalo FECHA DE CADUCIDAD. puntos con crecimiento, cubr o o de sobrevivencia D aplicados a partir del punt biológicos en tiras de pape l para esterilización o abajo del ao le por calorresseco. Indicado curva € ner). graficado en una logaritm correspondiente 4 sin1 expo (cuentas de tiras _ eder como se indica en establecido en /ndicadores tiempo-sobrevivencia. Proc os ETIQUETA po. Cumple lo para indi cado res hiol ógic zación por calor seco Determinación de valor D hiológicos en tiras de papel para esterili en tiras de papel para calor seco. el marb trataón de so ete establece que se zaci , con la diferenc ia de que para ser utilizados en esterili eder como se indieadores biológicos cuenta viable total. Proc por 3. Determinación de Ja e total para vanor indica en Determinación de cuenta viabl Bacillus l para esterilización microscopio, la cepa de indicadores biológicos en tiras de pape , e IDENTIFICACIÓN: Al "disgregarlos en un equipo por vapor empezando en sfearothermophilus son bacilos Gram positivos con ulados se ineuban