41 Questions
Con independencia del tipo de muestra utilizada para la extracción, es una técnica minuciosa, que involucra lisis de la célula ...:
Separación, purificación, precipitación, lavado y disolución
En la extracción del ARN debe considerarse:
Todas ellas
Durante la lisis celular se procede a la destrucción de las estructuras formadas por lípidos y proteínas permitiendo la liberación de los ácidos nucleicos del núcleo celular. La disgregación del tejido y su homogeneización se llevan a cabo en un buffer de lisis ...:
Que contiene sales, un detergente y proteinasa K, que libera el ADN de las histonas con las que se encuentra empaquetado y proteoliza proteínas celulares
Tras la lisis celular y la eliminación de las proteínas de la muestra, se precipitan los ácidos nucleicos añadiendo................................. . Este método permite la obtención de ADN de gran pureza y presenta la ventaja de que las soluciones utilizadas son muy seguras para la salud del personal técnico que realiza la extracción:
Isopropanol o etanol
En la extracción de ácidos nucleicos que involucra solventes orgánicos, una vez que estos últimos son añadidos se forman dos fases según el dibujo de arriba ... :
La fase fenólica, ubicada en la parte inferior de tubo, la cual contiene proteínas y lípidos. A su vez, la fase superior es la acuosa, donde se ubica el ADN o ARN, según sea el caso
Para facilitar la precipitación también suelen añadirse cationes monovalentes... :
a la solución de ácidos nucleicos cargados negativamente, con el fin de generar sales insolubles en alcohol de fácil precipitación
Señale la incorrecta:
Se prefiere disolver el ARN en aguadietil pirocarbonato (DEPC) al 1%, lo que evita cualquier interferencia de las sales de las soluciones amortiguadoras y lo preserva de las ADNsas
La relación de las absorbancias .............................................. permite conocer si el ADN obtenido está contaminado por la presencia de compuestos aromáticos:
A260/A280
Esta relación anterior es muy estable y en general se considera que el ADN es de calidad óptima cuando la relación anterior es mayor de:
1,8
Cuándo se considera que la muestra está contaminada por proteínas o fenoles:
Si la anterior relación es < 1,6
Señale la falsa respecto a la integridad del ADN. :
Si una muestra es íntegra presentará una banda de ADN única perfectamente definida en la parte inferior del gel de agarosa
Extracción de ADN genómico mediante precipitación por sales, un reactivo indicado no es necesario:
Buffer fosfato a pH 2
Extracción de ADN genómico mediante método de extracción de ADN con solventes orgánicos, se emplean habitualmente:
Fenol y cloroformo
El principio de extracción en columna de sílice se basa en la capacidad de adsorción de los ácidos nucleicos en una columna de sílice ante la presencia de altas concentraciones de sales caotrópicas, entre ellas se encuentran:
Todas correctas
Los contaminantes de la muestra, en la extracción en columna de sílice, son eliminados con posteriores lavados de la columna y finalmente el ADN es eluído con H20 o un tampón de resuspensión ...:
De baja fuerza iónica a pH neutro o ligeramente alcalino
Método de purificación por unión a microesferas magnéticas, señale la correcta:
Este método utiliza esferas magnéticas cuya superficie está recubierta con polímeros naturales o sintéticos que presentan una alta afinidad por los ácidos nucleicos
En la metodología anterior, el rendimiento obtenido para muestras de sangre total se sitúa en un rango de entre ................................... ADN/ ml de sangre:
25 y 33 µg
En la extracción de ARN, la resina consiste en cuentas de sílica con superficie hidrofílica con tamaño de partícula reducido, hechas con cantidades elevadas de grupos dietilaminoetil (DEAE). La purificación se basa en la interacción de estos grupos DEAE cargados ...:
positivamente con los grupos fosfatos (cargados negativamente) del ARN
Es muy importante tomar precauciones para evitar la contaminación con ARNsas exógenas, por ejemplo, tratar el agua y soluciones salinas con inhibidores de ARNsas, como el DEPC al ....:
0,1 %
posteriormente el ARN ea purificado a partir de la fase acuosa mediante precipitación a baja temperatura con isopropanol- centrifugación....simililar como se hace con ADN
Posteriormente, el ARN es purificado a partir de la fase orgánica mediante precipitación a alta temperatura con isopropanol y con ayuda de una centrifugación de manera similar a como se hace con ADN.
La Cromatografía por exclusión de tamaño se fundamenta en la separación de ácidos nucleicos de acuerdo con su peso molecular, empleando una columna empaquetada con una matriz de gel conformada por partículas poliméricas orgánicas o de sílice; ambos materiales, mecánica y químicamente estables y con un contenido bajo en grupos iónicos, originan una red de poros hidrofílicos uniformes. Indique la falsa:
Las moléculas de menor tamaño penetrarán en los poros del polímero, por lo que migran más rápidamente que las de gran tamaño
Una técnica muy empleada en la purificación de AANN es la extracción por gradientes de densidad de:
CsCl
Teniendo en cuenta que cada molécula absorbe la luz a una longitud de onda específica (los ácidos nucleicos a ........................... nm), es posible calcular su concentración en una muestra:
260 nm
Con arreglo a la ley de Lambert-Beer, existe una relación lineal entre la absorbancia A y la concentración de la molécula de AANN, conforme a la siguiente ecuación:
A = ε x l x c
Se mide la absorbancia de la muestra con un aparato llamado espectrofotómetro. El aparato funciona conforme a un principio sencillo: se irradia una muestra con una radiación luminosa de longitud de onda conocida y se mide la energía luminosa . .................................. con una célula fotoeléctrica situada detrás de la muestra:
Transmitida
Indique la falsa:
La luz será absorbida de manera inversamente proporcional de acuerdo a la concentración de la muestra
Se dispone de un stock de ADN, y usted lo diluye serialmente en una solución buffer de fosfato de sodio dibásico a pH 5,2. El stock original es de 300 uM de ADN, y se diluye primeramente 1:20, y posteriormente de la solución así obtenida, se toman 10 uL y se mezclan con 90 uL frescos del buffer indicado, qué concentración final de ADN tenemos? b (300/20 = 15 uM. Después se toman de la solución de 15 uM 10 uL en 100 uL totales (10+90), es decir se diluye 1/10, así que finalmente tenemos 15/10 = 1,5 uM ADN)
1,5 uM
El índice que indica contaminación por fenol es:
260/270
Señale la incorrecta acerca de la fluorimetría:
Esta metodología se basa en la unión específica de colorantes fluorescentes al ácido nucleico, que absorbe luz de una determinada longitud de onda y emite luz de una longitud de onda superior (de menor energía). La relación entre la concentración del ácido nucleico y la intensidad de emisión fluorescente es inversamente proporcional
Para la cuantificación de ARN, se realiza un pretratamiento con ADNsas, y suele emplearse RiboGreen, un colorante que absorbe a ...:
~500 nm y emitir a ~525 nm
En la figura anterior se considera que la muestra de ADN íntegra es:
1
En la figura anterior, se considera que la muestra de ARN íntegra es:
4
En este caso en lugar de ser un material poroso lo que dificulta la movilidad de los ácidos nucleicos es una corriente de cargas que arrastra la muestra o fuerza electroendosmótica, hablamos de la técnica ....:
Electroforesis capilar
Los plásmidos son moléculas de....:
Todas ellas
Un tamaño clásico y aproximado, como ejemplo, en un plásmido es:
5800 pb
Existen muchos plásmidos disponibles para usar con este fin y la mayoría contienen al menos los siguientes elementos:
Un origen de replicación autónomo para E. coli
En la purificación de ADN plasmídico, qué solución se emplea:
Todas las anteriores
Para el estudio del plásmido purificado, se emplea electroforesis en gel de agarosa al.....:
1 %
Las células se someten a un tratamiento para ser transformadas por AFN presente en el medio externo, las células así tratadas reciben el nombre de:
Competentes
¿Qué son las endonucleasas de restricción?
Enzimas que reconocen secuencias específicas de ADN de doble cadena y cortan ambas hebras de la molécula originando fragmentos con extremos romos o cohesivos
En el procedimiento de digestión con endonucleasas de restricción, se añade la mezcla enzimática ....:
Agua, buffer y enzimas en proporción 7:2:1, respectivamente
Este cuestionario pone a prueba tu conocimiento sobre la técnica de extracción de muestras, que implica procesos como purificación, precipitación, lavado y disolución. Debes seleccionar la secuencia correcta de pasos involucrados en esta técnica.
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