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Questions and Answers
Qual è il tasso di falsi negativi della qRT-PCR?
Cosa indica una carica virale elevata in un soggetto in fase ascendente dell'infezione?
Qual è la differenza principale nella carica virale tra un soggetto in via di remissione e uno con sintomi?
Perché è importante analizzare anche l'RNA negativo oltre a quello positivo?
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Qual è uno svantaggio della sierologia nella diagnostica virale?
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Cosa accade se non si analizza l'RNA negativo in un soggetto positivo?
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Quale affermazione sull'isolamento dei soggetti positivi è corretta?
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Qual è la sensibilità della qRT-PCR?
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Perché è importante utilizzare primer diversi nella PCR per identificare il virus?
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Qual è uno degli svantaggi di avere primer non standardizzati nei vari paesi?
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Quale delle seguenti opzioni è una strategia per ridurre la possibilità di risultati falsi negativi nella PCR?
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Qual è la caratteristica delle regioni UTR nella PCR per HCV?
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Qual è la principale difficoltà nel confronto dei dati tra diversi paesi riguardo all'identificazione del virus?
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Perché è fondamentale identificare regioni specifiche e uniche per SARS-CoV2 durante la PCR?
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Quale affermazione è vera riguardo all'efficienza della PCR in paesi diversi?
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Qual è il significato della positività alla PCR riguardo alla presenza di un'infezione?
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Cosa identifica la PCR quando si utilizza un primer progettato in modo errato?
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Cosa indica la presenza di IgM in un paziente?
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Qual è la principale limitazione dell'uso degli anticorpi come metodo diagnostico?
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Quale delle seguenti affermazioni è vera riguardo alla memoria immunitaria?
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Cosa rende i Point of Care Test particolarmente utili?
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Qual è una caratteristica dei test colorimetrici nei Point of Care?
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Quale tra le seguenti è una caratteristica delle IgG?
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In che modo i livelli di anticorpi influenzano la diagnosi di una malattia?
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Perché è importante utilizzare lo stesso primer a livello globale?
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Cosa rappresenta una mutazione nel contesto della riproduzione virale?
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Perché le mutazioni a ridosso del 3’ del primer sono considerate più impattanti?
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Qual è l'effetto dell'aumento della numerosità del campione nel rilevamento delle mutazioni virali?
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Cosa indica un titolo anticorpale di 1:16?
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Qual è il problema principale quando una sonda non si lega a causa di una mutazione nel virus?
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Cosa ha stabilito il centro per il controllo e la prevenzione delle malattie degli Stati Uniti riguardo all'identificazione del SARS-CoV-2?
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Quale funzione rappresenta il soggetto sano nel grafico?
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Cosa avviene quando il siero migra alla seconda linea sulla striscia di carta assorbente?
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Quale simbolo indica che la sonda ha staccato il suo fluorocromo durante il processo di rilevazione?
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Cosa indica la presenza simultanea di IgM e IgG nel terzo soggetto?
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Qual è una similitudine tra l'osservazione delle mutazioni virali e gli effetti collaterali dei farmaci?
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Quale affermazione sui kit di test per anticorpi è corretta?
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Qual è una caratteristica chiave del test descritto?
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Cosa rappresenta una striscia che si colora nella control lane?
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Qual è il significato del secondo soggetto che presenta solo IgM?
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Study Notes
PCR Quantitativa e Variabilità nell'Infezione
- I test qRT-PCR sono potenti ma possono dare informazioni fuorvianti se non interpretate correttamente.
- Il tasso di falsi negativi per qRT-PCR era del 9,3%, mentre la sensibilità era del 90,7%.
- La carica virale misurata con PCR quantitativa può essere la stessa in un soggetto che inizia a presentare sintomi e in uno che si sta riprendendo.
- È importante considerare la fase dell'infezione per interpretare correttamente i risultati della qRT-PCR.
- Un soggetto in fase di picco di infettività avrà una carica virale alta e dovrebbe essere isolato, mentre un soggetto in fase di remissione avrà una carica virale più bassa e potrebbe non essere più contagioso.
- La presenza di RNA negativo può essere utilizzata per determinare se la carica virale è in fase ascendente o discendente.
Variabilità Tecnica nei Test PCR
- I diversi paesi utilizzavano primer diversi per la PCR, portando a differenze di efficienza, specificità e sensibilità nei test.
- La difficoltà nel confrontare i dati raccolti in diversi paesi con primer diversi è legata all'influenza della regione del genoma amplifcata sull'efficienza della PCR e alle mutazioni del virus.
- La similarità tra SARS-CoV2, SARS-CoV e MERS-CoV complica l'analisi, necessitando di primer specifici per SARS-CoV2.
- Per ridurre al minimo la variabilità tecnica è necessario:
- Utilizzare regioni più conservate possibili del genoma virale.
- Utilizzare più di una copia di primer per amplificare diverse regioni.
- Standardizzare il primer utilizzato a livello mondiale.
- Le mutazioni del virus possono influenzare i risultati della PCR, in particolare se si verificano nelle regioni del primer e della sonda.
- Le mutazioni a ridosso del 3' del primer sono considerate più impattanti rispetto a quelle vicino al 5'.
- Il CDC (Centers for Disease Control and Prevention) ha stabilito un protocollo RT-PCR per l'identificazione specifica di SARS-CoV2 per standardizzare i test.
Point of Care Test (POCT)
- I POCT sono test eseguiti presso il punto di cura o assistenza del paziente, offrendo risultati rapidi.
- I POCT richiedono test sensibili, specifici, poco costosi e rapidi.
- Alcuni POCT si basano su PCR semplificate che utilizzano reazioni colorimetriche.
- Un esempio di test colorimetrico è la tecnologia LAMP (Loop-mediated isothermal amplification).
Identificazione degli Anticorpi
- Gli anticorpi non sono utili per la diagnosi precoce dell'infezione da SARS-CoV2 perché compaiono dopo un certo periodo di tempo dall'esposizione al virus.
- Le IgM sono le prime immunoglobuline a comparire e hanno una bassa specificità.
- Le IgG aumentano successivamente e indicano un'infezione pregressa.
- I livelli di anticorpi non sempre correlano con la gravità della malattia.
- La risposta umorale al SARS-CoV2 è di breve durata e le cellule B di memoria possono scomparire rapidamente.
- La quantità di anticorpi viene espressa come titolo anticorpale.
- Esistono dei kit rapidi per la ricerca di anticorpi che possono essere utilizzati nei POCT.
- Questi kit si basano su una striscia di carta assorbente su cui viene depositata una goccia di siero del soggetto.
- La presenza di anticorpi specifici contro la proteina S del virus viene rivelata attraverso una reazione colorimetrica.
- I test rapidi per la ricerca di anticorpi non sono quantitativi e non permettono di determinare la quantità di immunoglobuline presenti.
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Description
Questo quiz esplora l'interpretazione dei risultati dei test qRT-PCR e la loro efficacia nella valutazione dell'infezione. Si discute la variabilità tecnica e l'importanza della fase dell'infezione per comprendere correttamente i dati ottenuti. Comprendere queste informazioni è cruciale per prendere decisioni informate sulla gestione dell'infezione.