PCR Quantitativa e Variabilità nell'Infezione
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Questions and Answers

Qual è il tasso di falsi negativi della qRT-PCR?

  • 5,3%
  • 13,7%
  • 9,3% (correct)
  • 11,5%

Cosa indica una carica virale elevata in un soggetto in fase ascendente dell'infezione?

  • Il soggetto è in remissione
  • Il soggetto non presenta sintomi
  • Il soggetto è a rischio di infettività (correct)
  • La malattia è al termine

Qual è la differenza principale nella carica virale tra un soggetto in via di remissione e uno con sintomi?

  • Il secondo ha carica virale più bassa
  • Ignorare la carica virale è fondamentale
  • Entrambi hanno la stessa carica virale (correct)
  • Il primo ha carica virale più alta

Perché è importante analizzare anche l'RNA negativo oltre a quello positivo?

<p>Per evitare l'isolamento di soggetti in remissione (B)</p> Signup and view all the answers

Qual è uno svantaggio della sierologia nella diagnostica virale?

<p>Richiede tempo per la comparsa degli anticorpi (D)</p> Signup and view all the answers

Cosa accade se non si analizza l'RNA negativo in un soggetto positivo?

<p>Il soggetto potrebbe ricevere una quarantena eccessiva (D)</p> Signup and view all the answers

Quale affermazione sull'isolamento dei soggetti positivi è corretta?

<p>L'isolamento non è necessario per chi è in remissione (B)</p> Signup and view all the answers

Qual è la sensibilità della qRT-PCR?

<p>90,7% (D)</p> Signup and view all the answers

Perché è importante utilizzare primer diversi nella PCR per identificare il virus?

<p>Per ridurre il rischio di incorrere in mutazioni (B)</p> Signup and view all the answers

Qual è uno degli svantaggi di avere primer non standardizzati nei vari paesi?

<p>Rende impossibile confrontare i dati tra diversi paesi (D)</p> Signup and view all the answers

Quale delle seguenti opzioni è una strategia per ridurre la possibilità di risultati falsi negativi nella PCR?

<p>Usare regioni il più conservate possibile (A)</p> Signup and view all the answers

Qual è la caratteristica delle regioni UTR nella PCR per HCV?

<p>Presentano un basso tasso di mutazione (A)</p> Signup and view all the answers

Qual è la principale difficoltà nel confronto dei dati tra diversi paesi riguardo all'identificazione del virus?

<p>La mancanza di standardizzazione nei primer (A)</p> Signup and view all the answers

Perché è fondamentale identificare regioni specifiche e uniche per SARS-CoV2 durante la PCR?

<p>Per evitare amplificazioni errate (B)</p> Signup and view all the answers

Quale affermazione è vera riguardo all'efficienza della PCR in paesi diversi?

<p>Dipende dalla standardizzazione dei primer (B)</p> Signup and view all the answers

Qual è il significato della positività alla PCR riguardo alla presenza di un'infezione?

<p>Può indicare solo la presenza di materiale genetico. (A)</p> Signup and view all the answers

Cosa identifica la PCR quando si utilizza un primer progettato in modo errato?

<p>Virus simili e variabili (B)</p> Signup and view all the answers

Cosa indica la presenza di IgM in un paziente?

<p>L'infezione è in atto. (B)</p> Signup and view all the answers

Qual è la principale limitazione dell'uso degli anticorpi come metodo diagnostico?

<p>Non possono rilevare l'infezione in tempi precoci. (C)</p> Signup and view all the answers

Quale delle seguenti affermazioni è vera riguardo alla memoria immunitaria?

<p>Scompaiono dopo 1-2 anni dalla prima infezione. (A)</p> Signup and view all the answers

Cosa rende i Point of Care Test particolarmente utili?

<p>Forniscono risultati immediati. (B)</p> Signup and view all the answers

Qual è una caratteristica dei test colorimetrici nei Point of Care?

<p>Forniscono risultati attraverso reazioni visibili. (D)</p> Signup and view all the answers

Quale tra le seguenti è una caratteristica delle IgG?

<p>Indicano un'infezione pregressa. (B)</p> Signup and view all the answers

In che modo i livelli di anticorpi influenzano la diagnosi di una malattia?

<p>Sono influenzati dalla capacità di produzione dell'organismo. (A)</p> Signup and view all the answers

Perché è importante utilizzare lo stesso primer a livello globale?

<p>Per garantire la compatibilità dei dati. (C)</p> Signup and view all the answers

Cosa rappresenta una mutazione nel contesto della riproduzione virale?

<p>Un cambiamento che può rendere la rilevazione del virus meno efficace. (A)</p> Signup and view all the answers

Perché le mutazioni a ridosso del 3’ del primer sono considerate più impattanti?

<p>Perché influenzano la legatura della sonda al DNA. (C)</p> Signup and view all the answers

Qual è l'effetto dell'aumento della numerosità del campione nel rilevamento delle mutazioni virali?

<p>Aumenta la probabilità di rilevare errori causati da mutazioni. (D)</p> Signup and view all the answers

Cosa indica un titolo anticorpale di 1:16?

<p>Una diluizione maggiore rispetto a 1:4 (C)</p> Signup and view all the answers

Qual è il problema principale quando una sonda non si lega a causa di una mutazione nel virus?

<p>Non si verifica fluorescenza e il virus risulta non rilevato. (D)</p> Signup and view all the answers

Cosa ha stabilito il centro per il controllo e la prevenzione delle malattie degli Stati Uniti riguardo all'identificazione del SARS-CoV-2?

<p>Un protocollo unificato per tutti i paesi. (C)</p> Signup and view all the answers

Quale funzione rappresenta il soggetto sano nel grafico?

<p>Funzione verde (A)</p> Signup and view all the answers

Cosa avviene quando il siero migra alla seconda linea sulla striscia di carta assorbente?

<p>Gli anticorpi contro le IgG bloccano la migrazione (A)</p> Signup and view all the answers

Quale simbolo indica che la sonda ha staccato il suo fluorocromo durante il processo di rilevazione?

<p>La presenza di fluorescenza. (B)</p> Signup and view all the answers

Cosa indica la presenza simultanea di IgM e IgG nel terzo soggetto?

<p>Malattia in risoluzione (C)</p> Signup and view all the answers

Qual è una similitudine tra l'osservazione delle mutazioni virali e gli effetti collaterali dei farmaci?

<p>Entrambi richiedono campioni grandi per essere evidenti. (A)</p> Signup and view all the answers

Quale affermazione sui kit di test per anticorpi è corretta?

<p>Consistono in una striscia di carta con antigeni marcati (B)</p> Signup and view all the answers

Qual è una caratteristica chiave del test descritto?

<p>È rapido e facile da attuare (A)</p> Signup and view all the answers

Cosa rappresenta una striscia che si colora nella control lane?

<p>Il siero ha percorso tutta la striscia (B)</p> Signup and view all the answers

Qual è il significato del secondo soggetto che presenta solo IgM?

<p>Malattia in atto (A)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

qRT-PCR

Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, a test to measure the amount of viral RNA.

False Negative Rate

Percentage of patients with the disease who test negative.

Viral Load

The amount of virus in a sample.

Infectious Phase

Period of an infection where a person is most contagious.

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Remission Phase

Period when infection is declining and contagiousness is lessened.

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Primer

Short DNA sequence used to target specific DNA regions in PCR.

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POCT

Point of Care Test; a test performed near where patient is being treated.

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LAMP

Loop-mediated isothermal amplification; a rapid test using a colorimetric reaction.

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Antibody

Protein produced by the immune system to fight infection.

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IgM

First antibody to appear in an infection.

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IgG

Antibody that appears later and indicates past infection.

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Titer

A measure of the amount of antibodies in a sample.

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Sensitivity

Proportion of individuals with a condition correctly identified by the test.

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Specificity

Proportion of individuals without the condition obtaining a negative test.

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SARS-CoV2

Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2.

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RT-PCR

Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction.

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Mutation

Change in DNA sequence of a virus.

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Viral RNA

Genetic material of a virus.

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Clinical Isolation

Separating individuals to prevent spread of infection.

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Viral Load Monitoring

Tracking virus quantity.

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SARS-CoV

Another coronavirus causing severe respiratory conditions.

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MERS-CoV

Another coronavirus causing respiratory disease.

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CDC

Centers for Disease Control and Prevention (US health organization).

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Study Notes

PCR Quantitativa e Variabilità nell'Infezione

  • I test qRT-PCR sono potenti ma possono dare informazioni fuorvianti se non interpretate correttamente.
  • Il tasso di falsi negativi per qRT-PCR era del 9,3%, mentre la sensibilità era del 90,7%.
  • La carica virale misurata con PCR quantitativa può essere la stessa in un soggetto che inizia a presentare sintomi e in uno che si sta riprendendo.
  • È importante considerare la fase dell'infezione per interpretare correttamente i risultati della qRT-PCR.
  • Un soggetto in fase di picco di infettività avrà una carica virale alta e dovrebbe essere isolato, mentre un soggetto in fase di remissione avrà una carica virale più bassa e potrebbe non essere più contagioso.
  • La presenza di RNA negativo può essere utilizzata per determinare se la carica virale è in fase ascendente o discendente.

Variabilità Tecnica nei Test PCR

  • I diversi paesi utilizzavano primer diversi per la PCR, portando a differenze di efficienza, specificità e sensibilità nei test.
  • La difficoltà nel confrontare i dati raccolti in diversi paesi con primer diversi è legata all'influenza della regione del genoma amplifcata sull'efficienza della PCR e alle mutazioni del virus.
  • La similarità tra SARS-CoV2, SARS-CoV e MERS-CoV complica l'analisi, necessitando di primer specifici per SARS-CoV2.
  • Per ridurre al minimo la variabilità tecnica è necessario:
    • Utilizzare regioni più conservate possibili del genoma virale.
    • Utilizzare più di una copia di primer per amplificare diverse regioni.
    • Standardizzare il primer utilizzato a livello mondiale.
  • Le mutazioni del virus possono influenzare i risultati della PCR, in particolare se si verificano nelle regioni del primer e della sonda.
  • Le mutazioni a ridosso del 3' del primer sono considerate più impattanti rispetto a quelle vicino al 5'.
  • Il CDC (Centers for Disease Control and Prevention) ha stabilito un protocollo RT-PCR per l'identificazione specifica di SARS-CoV2 per standardizzare i test.

Point of Care Test (POCT)

  • I POCT sono test eseguiti presso il punto di cura o assistenza del paziente, offrendo risultati rapidi.
  • I POCT richiedono test sensibili, specifici, poco costosi e rapidi.
  • Alcuni POCT si basano su PCR semplificate che utilizzano reazioni colorimetriche.
  • Un esempio di test colorimetrico è la tecnologia LAMP (Loop-mediated isothermal amplification).

Identificazione degli Anticorpi

  • Gli anticorpi non sono utili per la diagnosi precoce dell'infezione da SARS-CoV2 perché compaiono dopo un certo periodo di tempo dall'esposizione al virus.
  • Le IgM sono le prime immunoglobuline a comparire e hanno una bassa specificità.
  • Le IgG aumentano successivamente e indicano un'infezione pregressa.
  • I livelli di anticorpi non sempre correlano con la gravità della malattia.
  • La risposta umorale al SARS-CoV2 è di breve durata e le cellule B di memoria possono scomparire rapidamente.
  • La quantità di anticorpi viene espressa come titolo anticorpale.
  • Esistono dei kit rapidi per la ricerca di anticorpi che possono essere utilizzati nei POCT.
  • Questi kit si basano su una striscia di carta assorbente su cui viene depositata una goccia di siero del soggetto.
  • La presenza di anticorpi specifici contro la proteina S del virus viene rivelata attraverso una reazione colorimetrica.
  • I test rapidi per la ricerca di anticorpi non sono quantitativi e non permettono di determinare la quantità di immunoglobuline presenti.

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Description

Questo quiz esplora l'interpretazione dei risultati dei test qRT-PCR e la loro efficacia nella valutazione dell'infezione. Si discute la variabilità tecnica e l'importanza della fase dell'infezione per comprendere correttamente i dati ottenuti. Comprendere queste informazioni è cruciale per prendere decisioni informate sulla gestione dell'infezione.

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