PCR Quantitativa e Variabilità nell'Infezione
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Questions and Answers

Qual è il tasso di falsi negativi della qRT-PCR?

  • 5,3%
  • 13,7%
  • 9,3% (correct)
  • 11,5%

    • Cosa indica una carica virale elevata in un soggetto in fase ascendente dell'infezione?

  • Il soggetto è in remissione
  • Il soggetto non presenta sintomi
  • Il soggetto è a rischio di infettività (correct)
  • La malattia è al termine

    • Qual è la differenza principale nella carica virale tra un soggetto in via di remissione e uno con sintomi?

  • Il secondo ha carica virale più bassa
  • Ignorare la carica virale è fondamentale
  • Entrambi hanno la stessa carica virale (correct)
  • Il primo ha carica virale più alta

    • Perché è importante analizzare anche l'RNA negativo oltre a quello positivo?

    <p>Per evitare l'isolamento di soggetti in remissione</p> Signup and view all the answers

    Qual è uno svantaggio della sierologia nella diagnostica virale?

    <p>Richiede tempo per la comparsa degli anticorpi</p> Signup and view all the answers

    Cosa accade se non si analizza l'RNA negativo in un soggetto positivo?

    <p>Il soggetto potrebbe ricevere una quarantena eccessiva</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione sull'isolamento dei soggetti positivi è corretta?

    <p>L'isolamento non è necessario per chi è in remissione</p> Signup and view all the answers

    Qual è la sensibilità della qRT-PCR?

    <p>90,7%</p> Signup and view all the answers

    Perché è importante utilizzare primer diversi nella PCR per identificare il virus?

    <p>Per ridurre il rischio di incorrere in mutazioni</p> Signup and view all the answers

    Qual è uno degli svantaggi di avere primer non standardizzati nei vari paesi?

    <p>Rende impossibile confrontare i dati tra diversi paesi</p> Signup and view all the answers

    Quale delle seguenti opzioni è una strategia per ridurre la possibilità di risultati falsi negativi nella PCR?

    <p>Usare regioni il più conservate possibile</p> Signup and view all the answers

    Qual è la caratteristica delle regioni UTR nella PCR per HCV?

    <p>Presentano un basso tasso di mutazione</p> Signup and view all the answers

    Qual è la principale difficoltà nel confronto dei dati tra diversi paesi riguardo all'identificazione del virus?

    <p>La mancanza di standardizzazione nei primer</p> Signup and view all the answers

    Perché è fondamentale identificare regioni specifiche e uniche per SARS-CoV2 durante la PCR?

    <p>Per evitare amplificazioni errate</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione è vera riguardo all'efficienza della PCR in paesi diversi?

    <p>Dipende dalla standardizzazione dei primer</p> Signup and view all the answers

    Qual è il significato della positività alla PCR riguardo alla presenza di un'infezione?

    <p>Può indicare solo la presenza di materiale genetico.</p> Signup and view all the answers

    Cosa identifica la PCR quando si utilizza un primer progettato in modo errato?

    <p>Virus simili e variabili</p> Signup and view all the answers

    Cosa indica la presenza di IgM in un paziente?

    <p>L'infezione è in atto.</p> Signup and view all the answers

    Qual è la principale limitazione dell'uso degli anticorpi come metodo diagnostico?

    <p>Non possono rilevare l'infezione in tempi precoci.</p> Signup and view all the answers

    Quale delle seguenti affermazioni è vera riguardo alla memoria immunitaria?

    <p>Scompaiono dopo 1-2 anni dalla prima infezione.</p> Signup and view all the answers

    Cosa rende i Point of Care Test particolarmente utili?

    <p>Forniscono risultati immediati.</p> Signup and view all the answers

    Qual è una caratteristica dei test colorimetrici nei Point of Care?

    <p>Forniscono risultati attraverso reazioni visibili.</p> Signup and view all the answers

    Quale tra le seguenti è una caratteristica delle IgG?

    <p>Indicano un'infezione pregressa.</p> Signup and view all the answers

    In che modo i livelli di anticorpi influenzano la diagnosi di una malattia?

    <p>Sono influenzati dalla capacità di produzione dell'organismo.</p> Signup and view all the answers

    Perché è importante utilizzare lo stesso primer a livello globale?

    <p>Per garantire la compatibilità dei dati.</p> Signup and view all the answers

    Cosa rappresenta una mutazione nel contesto della riproduzione virale?

    <p>Un cambiamento che può rendere la rilevazione del virus meno efficace.</p> Signup and view all the answers

    Perché le mutazioni a ridosso del 3’ del primer sono considerate più impattanti?

    <p>Perché influenzano la legatura della sonda al DNA.</p> Signup and view all the answers

    Qual è l'effetto dell'aumento della numerosità del campione nel rilevamento delle mutazioni virali?

    <p>Aumenta la probabilità di rilevare errori causati da mutazioni.</p> Signup and view all the answers

    Cosa indica un titolo anticorpale di 1:16?

    <p>Una diluizione maggiore rispetto a 1:4</p> Signup and view all the answers

    Qual è il problema principale quando una sonda non si lega a causa di una mutazione nel virus?

    <p>Non si verifica fluorescenza e il virus risulta non rilevato.</p> Signup and view all the answers

    Cosa ha stabilito il centro per il controllo e la prevenzione delle malattie degli Stati Uniti riguardo all'identificazione del SARS-CoV-2?

    <p>Un protocollo unificato per tutti i paesi.</p> Signup and view all the answers

    Quale funzione rappresenta il soggetto sano nel grafico?

    <p>Funzione verde</p> Signup and view all the answers

    Cosa avviene quando il siero migra alla seconda linea sulla striscia di carta assorbente?

    <p>Gli anticorpi contro le IgG bloccano la migrazione</p> Signup and view all the answers

    Quale simbolo indica che la sonda ha staccato il suo fluorocromo durante il processo di rilevazione?

    <p>La presenza di fluorescenza.</p> Signup and view all the answers

    Cosa indica la presenza simultanea di IgM e IgG nel terzo soggetto?

    <p>Malattia in risoluzione</p> Signup and view all the answers

    Qual è una similitudine tra l'osservazione delle mutazioni virali e gli effetti collaterali dei farmaci?

    <p>Entrambi richiedono campioni grandi per essere evidenti.</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione sui kit di test per anticorpi è corretta?

    <p>Consistono in una striscia di carta con antigeni marcati</p> Signup and view all the answers

    Qual è una caratteristica chiave del test descritto?

    <p>È rapido e facile da attuare</p> Signup and view all the answers

    Cosa rappresenta una striscia che si colora nella control lane?

    <p>Il siero ha percorso tutta la striscia</p> Signup and view all the answers

    Qual è il significato del secondo soggetto che presenta solo IgM?

    <p>Malattia in atto</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    PCR Quantitativa e Variabilità nell'Infezione

    • I test qRT-PCR sono potenti ma possono dare informazioni fuorvianti se non interpretate correttamente.
    • Il tasso di falsi negativi per qRT-PCR era del 9,3%, mentre la sensibilità era del 90,7%.
    • La carica virale misurata con PCR quantitativa può essere la stessa in un soggetto che inizia a presentare sintomi e in uno che si sta riprendendo.
    • È importante considerare la fase dell'infezione per interpretare correttamente i risultati della qRT-PCR.
    • Un soggetto in fase di picco di infettività avrà una carica virale alta e dovrebbe essere isolato, mentre un soggetto in fase di remissione avrà una carica virale più bassa e potrebbe non essere più contagioso.
    • La presenza di RNA negativo può essere utilizzata per determinare se la carica virale è in fase ascendente o discendente.

    Variabilità Tecnica nei Test PCR

    • I diversi paesi utilizzavano primer diversi per la PCR, portando a differenze di efficienza, specificità e sensibilità nei test.
    • La difficoltà nel confrontare i dati raccolti in diversi paesi con primer diversi è legata all'influenza della regione del genoma amplifcata sull'efficienza della PCR e alle mutazioni del virus.
    • La similarità tra SARS-CoV2, SARS-CoV e MERS-CoV complica l'analisi, necessitando di primer specifici per SARS-CoV2.
    • Per ridurre al minimo la variabilità tecnica è necessario:
      • Utilizzare regioni più conservate possibili del genoma virale.
      • Utilizzare più di una copia di primer per amplificare diverse regioni.
      • Standardizzare il primer utilizzato a livello mondiale.
    • Le mutazioni del virus possono influenzare i risultati della PCR, in particolare se si verificano nelle regioni del primer e della sonda.
    • Le mutazioni a ridosso del 3' del primer sono considerate più impattanti rispetto a quelle vicino al 5'.
    • Il CDC (Centers for Disease Control and Prevention) ha stabilito un protocollo RT-PCR per l'identificazione specifica di SARS-CoV2 per standardizzare i test.

    Point of Care Test (POCT)

    • I POCT sono test eseguiti presso il punto di cura o assistenza del paziente, offrendo risultati rapidi.
    • I POCT richiedono test sensibili, specifici, poco costosi e rapidi.
    • Alcuni POCT si basano su PCR semplificate che utilizzano reazioni colorimetriche.
    • Un esempio di test colorimetrico è la tecnologia LAMP (Loop-mediated isothermal amplification).

    Identificazione degli Anticorpi

    • Gli anticorpi non sono utili per la diagnosi precoce dell'infezione da SARS-CoV2 perché compaiono dopo un certo periodo di tempo dall'esposizione al virus.
    • Le IgM sono le prime immunoglobuline a comparire e hanno una bassa specificità.
    • Le IgG aumentano successivamente e indicano un'infezione pregressa.
    • I livelli di anticorpi non sempre correlano con la gravità della malattia.
    • La risposta umorale al SARS-CoV2 è di breve durata e le cellule B di memoria possono scomparire rapidamente.
    • La quantità di anticorpi viene espressa come titolo anticorpale.
    • Esistono dei kit rapidi per la ricerca di anticorpi che possono essere utilizzati nei POCT.
    • Questi kit si basano su una striscia di carta assorbente su cui viene depositata una goccia di siero del soggetto.
    • La presenza di anticorpi specifici contro la proteina S del virus viene rivelata attraverso una reazione colorimetrica.
    • I test rapidi per la ricerca di anticorpi non sono quantitativi e non permettono di determinare la quantità di immunoglobuline presenti.

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    Questo quiz esplora l'interpretazione dei risultati dei test qRT-PCR e la loro efficacia nella valutazione dell'infezione. Si discute la variabilità tecnica e l'importanza della fase dell'infezione per comprendere correttamente i dati ottenuti. Comprendere queste informazioni è cruciale per prendere decisioni informate sulla gestione dell'infezione.

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