Tema 2 Obtención y purificación de ácidos nucleicos

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Questions and Answers

Cuál es el propósito de la centrifugación rápida de los tubos después de la PCR?

Eliminar contaminantes del DNA

Acelerar la temperatura de la levadura

Separar las células del medio

Concentrar el DNA en el fondo del tubo (correct)

Cuál es el objetivo principal de la mezcla maestra de PCR?

Preparar la levadura para el cultivo

Facilitar la amplificación del DNA (correct)

Almacenar células a altas temperaturas

Aumentar la eficiencia de la extracción de DNA

¿Cuál es el objetivo principal de la obtención de DNA según el contenido?

Secuenciación de ADN mitocondrial

Clonación de fragmentos de DNA genómico (correct)

Mejora de cultivos bacterianos

Purificación de proteínas

¿Qué técnicas se utilizan para obtener DNA que se utilizará como molde para PCR?

Calentamiento a alta temperatura y permeabilización celular Signup and view all the answers

¿Cuál es una de las principales diferencias entre los métodos ultra-rápidos y los métodos estándar de extracción de DNA?

Las temperaturas aplicadas y el uso de congelación Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes es una finalidad de la obtención de vectores de clonación?

Construcción de genotecas Signup and view all the answers

¿Qué tipo de bacterias se mencionan en relación a los métodos ultra-rápidos de extracción de DNA?

S. suis Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes métodos es utilizado para la obtención rápida de DNA de una colonia?

Obtención de DNA con discos de celulosa Signup and view all the answers

En la extracción orgánica de ácidos nucleicos, ¿qué mezcla se utiliza comúnmente?

Fenol:cloroformo Signup and view all the answers

¿Cuál es el principal componente en la lisis celular durante la extracción de ácidos nucleicos?

Buffer de lisis Signup and view all the answers

¿Qué técnica se utiliza para determinar la concentración de ácidos nucleicos?

Cuantificación espectrofotométrica Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes afirmaciones sobre la hibridación de sondas es correcta?

Las sondas se utilizan para identificar secuencias específicas Signup and view all the answers

En el procedimiento de lisis alcalina, ¿cuál es el objetivo principal de este método?

Romper las células para liberar plásmidos Signup and view all the answers

¿Cuál es un criterio de pureza importante que se evalúa en la cuantificación espectrofotométrica?

Absorbancia a 260 nm y 280 nm Signup and view all the answers

¿Qué método se utiliza para purificar fragmentos de DNA a partir de geles?

Purificación con perlas magnéticas Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes es un método de marcaje usado en la preparación de sondas de DNA?

Marcaje terminal Signup and view all the answers

Study Notes

Procesamiento de Levadura para PCR

Transferir levadura al agua, agitando suavemente para suspender células.
Calentar en PCR: 99ºC durante 5 minutos; luego mantener a 4ºC.
Centrifugar y enfriar en hielo; levadura lista para usar o congelar a -20ºC.
Antes de usar, agitar la suspensión celular en vórtex; el DNA está en las células.

Métodos Rápidos de Extracción de DNA

Existen diferentes tipos de extracción según el propósito (clonación, análisis, etc.).
Los métodos rápidos implican calentar células a alta temperatura o permeabilizarlas para acceder al DNA.

Métodos Ultra-Rápidos

Protocolo de PCR rápida de colonias: tomar una colonia y mezclar con agua nuclease-free, hervir y congelar.
Alternativa: pre-calentar colonia a 95ºC, enfriar y utilizar para PCR.

Extracción de DNA de Colonias

Para PCR, preparar alícuotas de 50 µL de agua en tubos de PCR.
Recoger cantidad pequeña de levadura con pipeta, evitando contacto con el agar.

Procedimientos de Lisis Celular

Existen métodos estándar para la obtención de ácidos nucleicos enfocados en la lisis celular y medio de extracción.
La extracción orgánica con fenol: cloroformo o Trizol, son comunes.

Purificación y Concentración de Ácidos Nucleicos

Uso de alcohol isopropílico para la precipitación durante la concentración.
Métodos de purificación incluyen adsorción a sílice y uso de perlas magnéticas.

Análisis Cuantitativo y Cualitativo

Cuantificación espectrofotométrica y criterios de pureza basados en absorbancia.
Electroforesis en gel de agarosa para estudios cualitativos; permite visualizar patrones de tamaño de ácidos nucleicos.

Extracción Orgánica de Ácidos Nucleicos

Usar fenol a pH neutro o ácido afecta la separación de RNA y DNA.
En pH ácido, el RNA es preferentemente recuperado en la fase acuosa, mientras fragmentos de DNA pequeños fraccionan en la fase orgánica.

Reactivo Trizol para Aislamiento de RNA

Trizol es una solución monofásica para aislamiento de RNA total; mantiene la integridad del RNA durante la lisis celular.
La centrifugación separa soluciones en fases acuosa y orgánica; el RNA se recupera de la fase acuosa mediante precipitación.

Propósito de la Extracción

El objetivo es obtener DNA (o RNA) libre de contaminantes; retener calidad para aplicaciones posteriores como PCR.
Importancia del uso de reactivos seguros para evitar daños en las muestras.

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Description

En este quiz aprenderás los pasos clave para transferir levadura al agua y los procedimientos adecuados para el tratamiento térmico antes de la PCR. Conocerás la importancia de la temperatura y la centrifugación en el proceso. ¡Pon a prueba tus conocimientos sobre biotecnología y técnicas de laboratorio!