Electroforesis de Ácidos Nucleicos 5.2

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Questions and Answers

¿Cuál de las siguientes opciones NO es una característica del campo eléctrico que afecta la tasa de migración en la electroforesis?

Temperatura del medio (correct)

Diferencia de potencial entre los electrodos

Fuerza iónica del tampón

Gradiente entre los electrodos

¿Cuál de las siguientes opciones NO es una característica de la molécula que afecta la tasa de migración en la electroforesis?

Forma

Carga

Tamaño

Viscosidad del medio (correct)

¿En qué dirección se mueve una molécula con carga negativa en una electroforesis?

Hacia el polo positivo (ánodo) (correct)

No se mueve

Hacia el polo negativo (cátodo)

Depende de la fuerza iónica del tampón

¿Cuál es el principal factor que afecta la separación de las moléculas en una electroforesis?

El tamaño, carga y forma de las moléculas (C) Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes NO es un efecto perjudicial del calor generado durante la electroforesis?

Disminución del tamaño de las moléculas (A) Signup and view all the answers

Si se aumenta la diferencia de potencial entre los electrodos en una electroforesis, ¿qué ocurre con la tasa de migración de las moléculas?

Aumenta (D) Signup and view all the answers

¿Cuál es la función del gel en una electroforesis?

Actuar como un filtro que separa las moléculas por tamaño (B) Signup and view all the answers

¿Qué tipo de biomoléculas se pueden separar mediante electroforesis?

Proteínas y ácidos nucleicos (A) Signup and view all the answers

En la electroforesis de ADN bicatenario, ¿cuál es la función del buffer TAE?

Proveer un pH estable para la migración del ADN (B) Signup and view all the answers

En la electroforesis de ADN, ¿cuál es el propósito de utilizar un marcador de peso molecular?

Determinar el tamaño del ADN en las muestras desconocidas (C) Signup and view all the answers

En la electroforesis de ADN, ¿cuál es la función del tampón de carga?

Aumentar la densidad de la muestra para que se deposite en el pocillo de manera uniforme (C) Signup and view all the answers

Durante la electroforesis de ADN, ¿en qué dirección migra el ADN?

Hacia el ánodo (polo positivo) (A) Signup and view all the answers

¿Cuál es la función del bromuro de etidio en la visualización de ADN?

Se intercala entre las bases nitrogenadas del ADN y emite fluorescencia al ser iluminado con luz UVA (D) Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes es un colorante fluorescente alternativo al bromuro de etidio?

Safe View (C) Signup and view all the answers

En la electroforesis de ADN, la velocidad de migración del ADN depende de:

El tamaño del ADN y la concentración del gel de agarosa (B) Signup and view all the answers

En la electroforesis de ADN, ¿cuál de los siguientes elementos NO es esencial para el proceso?

Colorante azul de metileno (A) Signup and view all the answers

En electroforesis de ácidos nucleicos, ¿qué efecto tiene la concentración de agarosa en el tamaño de los poros del gel?

A mayor concentración de agarosa, menor tamaño de poro. (A) Signup and view all the answers

¿Qué tipo de peine en electroforesis produce bandas más definidas?

Peine fino. (C) Signup and view all the answers

¿Cuál es la función principal del tampón o buffer de electroforesis?

Mantener el pH estable durante la electroforesis. (A) Signup and view all the answers

¿Cuál es el objetivo principal de disminuir la viscosidad del tampón en la electroforesis?

Disminuir la resistencia al medio. (A) Signup and view all the answers

¿De qué material se extrae la agarosa utilizada en la electroforesis?

Algas. (A) Signup and view all the answers

En general, ¿qué concentración de agarosa es suficiente para la electroforesis?

1%. (D) Signup and view all the answers

¿Qué tipo de electroforesis es posible realizar con geles de agarosa?

Solo electroforesis de ácidos nucleicos. (D) Signup and view all the answers

¿Qué característica de la electroforesis se ve afectada por el tamaño del peine utilizado?

La resolución de las bandas. (D) Signup and view all the answers

Study Notes

Electroforesis

Es una técnica separativa usada para separar ácidos nucleicos y proteínas.
La separación de macromoléculas depende de dos variables: carga y masa.
Las moléculas se separan basándose en su velocidad de migración en un campo eléctrico.
Un electrodo repele las moléculas, mientras que el otro las atrae.
La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio.
Esto hace que se desplacen cuando están en un campo eléctrico hacia el polo con carga opuesta.
La fricción del gel (agarosa) afecta la separación de moléculas, principalmente ADN, según su tamaño.
En electroforesis, los ácidos nucleicos con carga negativa migran hacia el polo positivo (ánodo).
La electroforesis consiste en la migración de las moléculas a través de un gel o matriz porosa, basada en su tamaño o peso molecular.
El movimiento es generado por el campo eléctrico.

Concentración de geles de Agarosa

Los geles de agarosa pueden tener diferentes concentraciones.
Geles más concentrados tienen poros más pequeños, lo que permite separar mejor fragmentos pequeños.
Geles menos concentrados tienen poros más grandes, permitiendo separar mejor fragmentos grandes.

Componentes de la Electroforesis

Agarosa: Polímero natural extraído de algas, usado para crear un gel. La obtención implica una suspensión en un tampón que se calienta hasta disolución y luego se vierte en moldes con peines.
El gel se enfría a temperatura ambiente hasta solidificar, y su densidad depende de la concentración de agarosa.
Peine: Se utiliza para formar los pocillos en el gel, donde se colocan las muestras. Peines finos dan bandas más precisas, mientras que los gruesos menos.
Tampón: Proporciona el medio para la transmisión de la corriente eléctrica y mantiene el pH constante. Aporta fuerza iónica para aumentar la conductancia del ADN.
Los tampones de electroforesis para ADN bicatenario incluyen TAE y TBE, con diferentes proporciones de componentes.
Marcadores de ADN: ADN de tamaño conocido (de peso molecular), colocado en el extremo del gel, usado para comparar la migración y estimar tamaños.

Efectos perjudiciales del calor en la electroforesis

El calor generado durante la electroforesis puede causar efectos negativos.
Aumenta la tasa de difusión de los iones en la muestra y el tampón, ensanchando las bandas.
Puede crear corrientes de convección en la muestra, causando mezcla de las bandas.
Se produce inestabilidad térmica y se disminuye la viscosidad del tampón, reduciendo su resistencia al medio.

Visualización de los ácidos nucleicos

Se usa bromuro de etidio para visualizar ADN en gel.
Se intercala en el ADN, y emite fluorescencia bajo luz UVA. Es tóxico.
Para visualizar hay otros colorantes alternativos como Safe View.
Se desconectan los cables y el gel se analiza en un transiluminador UV y se fotografían los resultados.

Pasos para realizar la electroforesis

Los pocillos se cargan con las muestras usando una micropipeta.
Se colocan marcadores de ADN conocido y controles positivos/negativos.
Se conecta el equipo para aplicar el voltaje apropiado.
El ADN se mueve hacia el polo positivo (ánodo) y su migración se sigue por el avance del colorante de carga.

Datos de electroforesis de ejemplo (Imagen 16)

Se muestran fragmentos de ADN (marcadores o estándares).
Los tamaños se indican en pares de bases (pb).

Datos de electroforesis de ejemplo (Imagen 21)

Se muestran los fragmentos separados según sus tamaños en pb.

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Description

Este cuestionario aborda los principios de la electroforesis, una técnica esencial para la separación de ácidos nucleicos y proteínas. Se exploran factores como la carga, masa y la influencia del gel en el proceso de separación. Aprenderás cómo la migración de biomoléculas se ve afectada por el campo eléctrico y el pH del medio.