Determinaciones Bioquímicas PDF

Determinaciones bioquímicas Medios de cultivo: se pueden calsificasificar en no selectivos, selectivos, diferenciales y especializados No selectivos: diseñados para permitir el crecimiento de la mayor parte de los gérmenes que no necesitan condiciones exigentes 1) Agar sangre: Contiene sangre an...

Determinaciones bioquímicas Medios de cultivo: se pueden calsificasificar en no selectivos, selectivos, diferenciales y especializados No selectivos: diseñados para permitir el crecimiento de la mayor parte de los gérmenes que no necesitan condiciones exigentes 1) Agar sangre: Contiene sangre animal que se mezcla con un medio de cultivo base como soja tripticasa 2) Agar chocolate: Contiene sangre lisada, hace que los nutrientes se libera a la sangre siendo el medio más rico, es ENRIQUECIDO 3) Tioglicolato: medio líquido, permite el desarrollo de bacterias aeróbicas y recuperar microorganismos anaerobios. 4) Sabouraud: se emplea para el desarrollo de hongos, inhibe a las bacterias ya que se reduce el pH y se agregan antibióticos 5) CLDE: ENRIQUECIDO, diferencial. Los fermentadores de lactosa producen colonias amarillas en el agar de CLED; las NO fermentadoras de lactosa dan colonias azules. Medio básico, deficiente en electrolitos, ideal para recuentos, buena información bacilos + y -, cocos y levaduras Selectivos y diferenciales: se diseñan para poder recuperar gérmenes específicos que pueden estar presentes en una mezcla de otros gérmenes. Los medios se enriquecen con inhibidores que suprimen el crecimiento de genes no deseados. Se agregan compuestos específicos como azúcares, si las bacterias los fermentan arrojan un color 1) AGAR McConkey: Método selectivo para detectar bacterias Gram -, la presencia de sales biliares y cristal violeta inhiben a las Gram positivas. Es diferencial para aquellas bacterias que fermentan lactosa 2) Manitol salado: Método de cultivo selectivo para cocos en acumulo gram + (estafilococos). El medio incluye extractos de caseína, es diferencial para el Staphylococcus Aureus 3) Lowenstein jensen: selectivo para micobacterias, contiene glicerol 4) Azida: no es diferencial, permite recuperar coco gram + en cadena, solo algunos Especializados 1) TCBS: recuperar vibrio 2) McCONKEY SORBITOL: diferenciar dentro de enterobacterias escherichia coli 3) Muller Hinton: para realizar antibiograma Medios líquidos: medios de enriquecimiento, si tengo poco MO le ofrezco los medios para proliferar Identificación bacilos Gram negativos Cultivar en Agar McConkey: determinó o no si es fermentadora o no de lactosa Pruebas bioquímicas Agar TSI: contiene 3 azúcares glucosa, lactosa y sacarosa, se basa en la capacidad de los organismos de fermentar carbohidratos y liberar sulfuro de hidrógeno. Contiene como indicador a cambios de pH el rojo fenol. Resultados ➔ Alcalino/alcalino:No fermenta glucosa, pH se mantiene, descartamos enterobacterias ➔ Alcalino/ácido: solo fermenta glucosa el plano inclinado se mantiene rojo y el fondo amarillo ➔ Ácido/ácido: fermenta los 3 azúcares  ◆ Puede haber o no producción de gas lo que desplaza el agar, en organismos con metabolismo butilenglicolino no se frena la reacción y veo mucho aire, aquellos con metabolismo ácido-mixto se frena la reacción. ◆ Puede haber o no producción de SH2 que lo evidencio con hierro presente. Reacción oxidasa: se realiza en aquellos que no fermentan glucosa, sirve para determinar la presencia de enzimas oxidadas que oxidan el producto proporcionado en presencia de oxígeno. Forman compuesto coloreados LIA: Medio de cultivo, basado en la decarboxilación y desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio y provocan el viraje del color púrpura al amarillo. El ambiente ácido favorece la actividad enzimática decarboxilasa y se metaboliza la lisina a cadaverina elevando el pH del medio de cultivo y tornándolo al color púrpura o violeta. Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad lisina decarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color amarillo Pruebas INVIC Agar SIM: hago la prueba del indol (producto del metabolismo del triptófano), usando un medio rico en triptófano, el indol se combina con ciertos aldehídos y forma un compuesto coloreado en la superficie lo revelo con el reactivo de kovacs, también veo movilidad y SH2 (negro) RMVP: separo en dos tubos Rojo de metilo: evidenciar fermentación ácido mixta de la glucosa manteniendo estables sus productos terminales, el medio se acidifica. Agrego para el revelado rojo de metilo, que se mantiene si el resultado es + Voges Proskauer: evidenciar capacidad de producir como producto final acetoina correspondiente al metabolismo butilenglicolico, utilizo un medio de cultivo rico en nutrientes y glucosa. Ante un resultado + evidencio un halo rojo en la superficie luego del agregado de alfa naftol. Se ve acompañado por exceso de gas ya que como el medio no se acidifica la reaccion no se frena Agar Citrato: pueden producir energía utilizando el citrato como fuente de carbono, si puede emplearlo se alcaliniza el medio y se produce un viraje a azul del indicador de azul de bromotimol. Proveo un medio de cultivo con nitrógeno y citrato. Agar fenilalanina: capacidad de desaminar fenilalanina produciendo ácido fenilpiruvico por presencia de la FA deaminasa. Un resultado + se evidencia por un color verdoso tras la adición de cloruro férrico en medio ácido Bacilos Gram negativos fermentadores indol citrato FA RM VP DNA E.coli + - - + - - K. - + - - + - Pneumoniae Enterobacter - + - - + - cloacae  Serratia - + - - + + marcescens Bacteria oxidasa Proteus + + + + - - Acinetobacter negativa mirabilis baumannii Bacilos gram negativos no fermentadores stenotrophomonas negativa maltophilia Pseudomonas positiva Identificación Cocos Gram + aeruginosa Diferenciación entre Cocos Gram + en cadena o en acúmulos: En un medio Agar sangre realizó la prueba de la catalasa, la enzima se encuentra en la mayoría de la bacterias aeróbicas que contienen citocromo, aquellas que cuentan con esta enzima descompone el peróxido de hidrógeno y se evidencia la presencia de burbujas. Diferenciación entre cocos Gram + en acumulo: tengo que ver si se trata de un staphylococcus o de un micrococcus, lo realizo mediante la prueba de bacitracina donde si veo un halo de inhibición se trata de un micrococcus. Identificación de Cocos Gram + en acúmulos Microorganismo DNA Coagulasa Manitol Salado Staphylococcus aureus + + + SCN - - variable ➔ Agar DNA: el staphylococcus aureus produce una DNAsa termoestable que hidroliza el ADN, se inocula la muestra sobre el agar DNA y se revela con HCl, un resultado positivo se evidencia con una zona clara rodeadas de una colonia. ➔ Coagulasa: el staphylococcus aureus produce una enzima llamada coagulasa que causa coagulación del plasma, la formación de un coágulo indica reacción positiva. ➔ Agar Manitol: la degradacion del manitol hacer virar el rojo de fenol a amarillo indicando acidificacion, un resultado amarillo se evidencia con el medio amarillo. Identificación de Cocos Gram + en cadena MO Colonia BE NaCl Bacitracina PYR CAMP Optoquina S. Pneumoniae hemólisis alfa - - NO NO NO sensible (S) S. Viridans hemólisis alfa VAR - NO NO NO resistente S. Pyogenes hemólisis beta - - S + - NO S. Agalactiae hemólisis beta - - R - + NO Enterococcus hemólisis + + NO + NO NO gamma  ➔ Agar Bilis Esculina: determinar la facultad de un organismo de hidrolizar la esculina en presencia de bilis, se evidencia el resultado positivo por un color negro a castaño. ➔ Cloruro de Sodio: se evidencia la tolerancia al crecimiento en medios con cloruro de sodio, un resultado positivo se observa turbidez y desarrollo ➔ Bacitracina: el streptococcus Pyogenes es inhibido por la bacitracina por lo que se observa un halo de inhibición, en cambio aquellas resistentes crecen por encima. Se cultiva en agar sangre ➔ Optoquina: la sensibilidad a la optoquina es utilizada para diferenciar S Pneumoniae de S.Viridans, el resultado positivo se interpreta con un halo de inhibición de 16mm, si es resistente hay ausencia de halo. Se cultiva en agar sangre con 5% de CO2 Antibióticos Grupo Mecanismo ejemplos B-lactamicos Inhiben ensamblaje de cadenas de Ampicilina, ampicilina-sulbactam peptidoglicano de la pared celular, son activos (B-LACTÁMICO E INHIBIDOR frente a bacterias en proliferación BETALACTAMASA), ertapenem, carbapenem Cefalosporinas: Ceftazidima, cefazolina, cefoxitina Glicopéptidos Inhibe la transpeptidación Vancomicina Polipéptidos Inhiben la despolarización y reciclado del Bacitracina transportador lipídico Lipopéptidos Aumentan permeabilidad de la pared generando Polimixinas la muerte en gram - Rifamicinas Inhibe la transcripción del arn inhibiendo la arn Rifampicina polimerasa Aminoglucósidos Se unen de manera irreversible a la sub 30s del Amikacina, gentamicina ribosoma Quinolonas Inhiben topoisomerasa II en BGN y Ciprofloxacina (amplio espectro) topoisomerasa IV en CGP necesarias en la síntesis del ADN Sulfonamidas Inhiben la síntesis de ácido fólico microbiano TMS (trimetroprim-sulfametoxazol) Nitrofuranos Forman metabolitos activos que dañan la Nitrofurantoina estructura bacteriana, inhiben la sintesis de proteinas Macrólidos Se unen a la subunidad 50s del ribosoma eritromicina, claritromicina, acitromicinsaa Antibiogramas ¿Cuándo realizar pruebas de sensibilidad? ➔ Cuando se conoce la sensibilidad del MO al medicamento pero el paciente es alérgico ➔ Cuando no puedo predecir su sensibilidad por más que conozca de que MO se trata  ➔ Si la bacteria habitualmente es resistente a los ATB utilizados en el tratamiento ➔ Evaluar resistencia a nuevos antibióticos ➔ Se deben realizar en una cepa aislada, solo puedo analizar directamente si se trata de una toma de orina suprapuvica Método de antibiograma por difusión: se utilizan para bacterias aerobias de crecimiento rápido y para algunas bacterias con requerimientos nutricionales especiales. No me permite una lectura directa del CIM, el ATB difunde en el agar creando gradientes de cc, el crecimiento queda inh a una determinada cc y distancia del disco - Se lleva a cabo en un agar Muller-hinton que demuestra buena reproducibilidad, bajo contenidos de inhibidores de sulfonamida, trimetoprima y tetraciclina Bacterias con requerimientos nutricionales especiales Reactivos para la realización del ATB ❖ pH: 7,2 y 7,4 ❖ Humedad : no presentar exceso ❖ Efecto de la timina: exceso de timina pueden revertir los efectos inhibitorios de las sulfonamidas, trimetoprimas dando un informe de falsa resistencia ❖ Composición de cationes divalentes: exceso de Ca++ y Mg++ afectan resultados de tetraciclina y aminoglucósidos Selección de antimicrobianos a probar: debo utilizar medicamentos que luego sean aplicables a el tratamiento terapéutico, referirse por su nombre genérico - Grupo A: ambulatorios o de rutina - Grupo B: importancia clínica o infecciones hospitalarias - Grupo U: enumera cientos antimicrobianos, con uso limitado al tracto urinario EJ: nitrofurantoína Discos de antimicrobianos: almacenar los discos 8 grados o en -14 grados Preparación del inóculo: para estandarizar se usa una suspensión de sulfato de bario como estándar de turbidez, en la escala 0.5 de Mac Farland. Lo podemos preparar de manera directa inoculando una colonias aislada o por el método de desarrollo previo 1. Inoculación de las placas con un hisopo 2. Aplicación de los discos en las placas 3. Lectura e interpretación de los resultados Sensible: la cepa se puede tratar con la dosis del ATB recomendada Intermedio: cepas que pueden ser inhibidas por cc más altas siempre y cuando se pueda aumentar la dosis o que se concentre únicamente en el tejido infectado Resistente: no son inhibidas por las cc Control de calidad: se prueban cepas de referencia con sensibilidad al ATB ➔ Se busca evaluar exactitud y precisión, calidad y desempeño del operador. ➔ La selección de cepas de referencia debe obtenerse de una fuente reconocida (ATCC). ➔ Se lleva a cabo un control de calidad del lote de placas, o discos ➔ Cada dia que se realice la prueba debe controlarse ➔ Si tengo resultados fuera de rango requiere de acciones correctivas:  ◆ Si identifico el error debo documentarlo y corregir la razón; uso erróneo de la cepa; mantenimiento inapropiado; contaminación; uso de placas incorrectas ya sean muy finas o muy gruesas; errores en el ensayo con T de incubación, inóculo, disco ◆ Si no puedo identificar el error: probar 5 dias seguidos el Mo y la droga involucrados, sin aun asi no tengo resultados correctos debo obtener una nueva cepa, materiales ◆ Si mi control de calidad falla puedo optar en los informes por suprimir el resultado, utilizar un método alternativo, revisar de manera indv los resultados de los pacientes Limitaciones del método por difusión: obtenemos resultados favorables para staphylococcus spp, enterococcus spp, enterobacteriaceae, P aeruginosa, acinetobacter spp, haemophilus influenzae, N gonorrhoeae, streptococcus spp Método de antibiograma por E test: podemos determinar la CIM por lectura directa, se emplea una tira de plástico con 15 diluciones de un ATB, tras la incubación observaremos una forma de elipse y será el valor de CIM el punto donde el extremo de inhibición toca la tira Antibiograma por difusión: se basa en la determinación de crecimiento del MO en presencia de cc crecientes del ATB que se encuentra diluido en un caldo o agar En medio líquido: se observa directamente el CIM cuando no hay crecimiento (transparente) En medio sólido: serie de placas con cc diferentes de ATB las cuales se inoculan con distintas cepas de un MO, el CIM se marca cuando no se observa crecimiento Tracto urinario Microbiota normal del tracto urinario Microbiota transitoria - Lactobacillus - Enterococcus - Streptococcus - Enterobacterias (E. coli, Klebsiella, - Staphylococcus coagulasa - Proteus) - Candida (hongo) - Neisseria gonorrhoea MO patológicos según cómo ingresan y causan la infección Ascendentes: ingresan por uretra causan la infección y pueden seguir subiendo ➔ Enterobacterias: Proteus mirabilis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae ➔ Bacilos gram - NF: Pseudomonas aeruginosa ➔ Cocos gram +: Enterococcus spp y Staphylococcus saprophyticus Descendentes: comienzan la infección en otro sitio y son eliminadas por orina, causan la infección después de haber causado una infección previa ➔ Cocos gram +: Staphylococcus aureus ➔ Levaduras: Candida spp Toma de muestras de orina: Se recomienda descartar el primer chorro de orina para evitar contaminación con microbiota de la vagina, o uretra. Se aconseja higienizar la zona y las manos previo a la toma de muestra, las muestras deben ser transportadas inmediatamente en recipientes estériles para orina y mantenidas refrigeradas. Procesamiento de la muestra: la muestra puede cultivarse por el método manual (utilizando un ansa de 5 ul) o automatizado (un tip de 10ul), este tipo de cultivos además de permitirme obtener un recuento de UFC, me permite analizar las características de la o las colonias. Se cultivan en agar CLDE Además de un cultivo se indica un análisis de orina completa para evaluar la sedimentación donde observó presencia de leucocitos, hematíes y otros elementos como piocitos. Los valores normales de estos elementos son de 0-5 por campo Conservación: si deben transcurrir más de 30 minutos, transportar en telgopor con una bolsa con hielo Recuento de colonias: un número mayor a 105 se considera patológico, informar al medico la cantidad de colonias ➔ Manual: UFC/ml= N colonias X 1000 ul/5 ul = N colonias X 200 ➔ Automatizado: N colonias X 1000 ul/10 ul =N colonias X 100 CLDE: medio no selectivo, diferencial (fermentación de lactosa), semicuantitativo Observaciones de los cultivos ➔ Tipo de MO: si son cocos (Más puntiformes, colonias 3D, de menor tamaño) o si son bacilos (aspecto mucoso, colonias chatas, de mayor tamaño) ➔ Si es fermentador (agar amarillo) o no fermentador ➔ Si observo un único microorganismo (monomicrobiano) o más de un tipo de colonia ➔ Recuento Patologías posibles: si es mayor a 103 - Cistitis: infección urinaria baja, común en las mujeres, con aumento de la frecuencia para orinar y dolor al orinar - Bacteriuria asintomática: común en embarazadas, puede manifestarse con un sedimento patológico o no. Recuento de >105 sin síntomas - Infección urinaria alta: síntomas como disuria, polaquiuria y urgencia miccional, fiebre y dolor - Pielonefritis: En el sedimento urinario veo piocitos Identificación de bacterias: cultivo en CPSID, pruebas de sensibilidad a antibióticos, pruebas de identificación bioquímica Siembra en spot en CPSID: cambia de color segun la flia de MO ➔ ROJO: E coli ➔ VERDE: Klebsiella, Enterobacter, Serratia (KES) ➔ MARRÓN: Proteus, Morganella, Providencia ➔ Blanco (acinetobacter) o transparente (pseudomona): hacer pruebas bioquímicas Antibiograma Grupo Antibiótico Bacilos gram - Enterobacterias Ambulatorio: ampicilina, ampicilina-sulbactam, nitrofuranos, cefazolina, tms, ciprofloxacina Hospitalaria: ceftazidima, cefotaxima, amikacina, ertapenen Cocos gram + En acúmulos Cefoxitina, nitrofuranos, tms, ciprofloxacina, gentamicina, novobiocina En cadena Ampicilina, Nitrofuranos, Vancomicina  Factores de virulencia Mecanismo Escherichia coli El lipopolisacárido cuenta con un serogrupo O con capacidad antigénica, Antígeno K asociado con la mucosidad de las colonias, resistencia a fagocitosis y alteración del complemento, Adhesinas, hemolisinas, resistencia bactericida Klebsiella pneumoniae Cápsula de tipo K2, endotoxinas, sideróforos, fimbrias, resistencia bactericida, aerobactina Proteus mirabilis Tiene ureasas que aumentan el ph y dan1a las células renales, flagelos (acceso contracorriente), sideróforos, adhesinas, inmunoglobulina A proteasa Enterobacter cloacae Staphylococcus Contiene ureasa, hemaglutinina (unión al urotelio), muy común en la mujer, puede saprophyticus producir litiasis urinaria (piedras en los riñones), no es tan común en el hombre Enterococcus faecalis Forman biofilms, que les permite adhesión, evasión del sistema inmune y resistencia a ATB, contiene proteínas que favorecen formación del mismo, feromonas, antígeno A, pili Bacterias frecuentes - bacilos gram negativos MO CLDE Pruebas bioquímicas Antibiograma E. coli Fermentadora TSI: ácido/ácido con gas Sensible a todo LIA: + descabox lys CITRATO: - RM: + INDOL: + Proteus No fermentadora TSI: alcalino/ácido con gas y SH2 Resistente nitrofurantoína Mirabilis LIA: desaminación de Lys color rojo CITRATO: + RM: + INDOL: + FA: + Klebsiella Fermentadora TSI: - pneumoniae LIA: CITRATO: + VP: + INDOL: - Enterobacter Fermentadora TSI: ácido/ácido con gas nitrofurantoína sensible, cloacae LIA: - ciprofloxacina sensible y VP: + TMS intermedio Indol: - FA: - Movilidad: si Pseudomona No fermentadora TSI: sin cambio Resistente a aeruginosa LIA: positivo ciprofloxacina CITRATO: +  FA: - RM: + SIM: - Tracto respiratorio Tracto respiratorio microbiota habitual - TRS: Streptococcus viridans, Corynebacterium (BG+), Peptostreptococcus común - TRI: tecnicamente es esteril TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR Patologías comunes ➔ Faringitis: síndrome inflamatorio de faringe de etiología diversa, común en niños de edad escolar, generalmente es de curso benigno y autolimitada. Sin embargo el médico puede solicitar hisopado de fauces por ciertos MO que ejercen complicaciones a distancia. Los MO se adhieren a la mucosa y se multiplican localmente, se transmiten por gotas de saliva Probables agentes etiológicos para faringitis ❖ Viral: 70-80% ❖ Bacteriana: Streptococcus b-hemolíticos del grupo A (S. Pyogenes), C o G. Se diferencian según sus polisacáridos de pared. Que pueden producir faringitis o faringoamigdalitis, si es productor de toxinas genera escarlatina. Clasificación de la faringitis Estreptocócica: streptococcus pyogenes (Lo busco siempre), beta-hemolíticos C o G. Streptococcus Pyogenes: es colonizante, si no hay cuadro clínico no tiene que entrar un hisopado. Si hay infección no tratada se pueden detectar anticuerpos de efecto protecto frente al MO que tenga la misma proteina M (no sirven para todos los pyogenes) Tratamiento: para prevenir complicaciones supurativas (otitis, sinusitis, abscesos), no supurativas (fiebres reumáticas), mejorar sintomatología e infectividad. Toma de muestra y conservación: se utiliza un hisopo punta de dacron y baja lengua (no tocar lengua ni úvula), se transporta en tubo seco y se puede conservar 24hs a TA. Se toman dos hisopos uno para cultivo y otro para test rapido Diagnostico microbiologico: siembra en AG de carnero, identificación bioquímica, identificacion serologica, método rápido (específicos pero poco sensibles, si da negativo hago un cultivo, si da positivo no cultivo, se extraen los antígenos de la pared del MO). DEBO PICAR EL AGAR PARA CREAR UN AMBIENTE MICROAEROFILAS Identificación del S. Pyogenes: cocos gram + en cadena puntiformes, anaerobios facultativos, homofermentativos (ácido láctico sin producción de gas), beta-hemolíticos mayor a la colonia,  pueden ser capsulados, coagulasa negativa, son sensibles a la bacitracina (hago un inóculo se disuelve en solución fisiológica) masivo con ansa) PYR + (a partir del inóculo masivo de bacitracina) Pruebas de sensibilidad: no son resistentes a penicilina se suelen tratar con b-lactámicos por vía oral, son resistentes a macrólidos. Se busca detectar 3 tipos de resistencia ❖ MLS [macrólidos, lincosamidas (clindamicina) y estreptograminas inducible ❖ MLS constitutivo ❖ Eflujo activo: bombas de expulsión Factores de virulencia ❖ Proteína M: le confiere resistencia a fagocitos PMN ❖ Ácido lipoteicoico ❖ Proteína F: adhesión y evasión del SI ❖ Hemolisinas estables o lábiles frente al O2 (Formo una atmósfera microaerófila) No estreptocócica: Arcanobacterium hemolyticum (adolescentes) o Neisseria Gonorrhoeae (antecedentes epidemiológicos, nos tiene q pedir el médico) Arcanobacterium haemolyticum: causal de la faringitis en adolescentes, con Rash escarlatiniforme, es sensible a penicilina pero suele haber fracaso terapéutico, el tratamiento de elección son los Macrólidos (eritromicina). Cocobacilo gram +, catalasa -, Camp inversa + INHIBE B HEMOLISIS Otras patologías del SRS ➔ Difteria: el agente etiológico es el Corynebacterium diphtheriae, bacilo Gram +, catalasa +, la bacteria tiene un fago que expresa toxinas causantes de la difteria. ➔ Tos convulsa: Bordetella pertussis, obtener la muestra por aspirado nasofaríngeo, se siembra en medio Bordet Gengou x 1 semana. Es capsulado, produce toxinas dermonecrótica y endotoxinas. Son cocobacilos Gram negativo ➔ Otitis media aguda: los MO colonizan el epitelio nasofaríngeo, ingresan al oído medio que habitualmente es esteril. Los agentes etiológicos responsables son streptococcus pneumoniae o haemophilus influenzae, moraxella catarrhalis ◆ Sintomatología: dolor de oído, enrojecimiento del tímpano, faringe, se diagnostica con cuadro clínico ◆ Toma de muestra: Punción del tímpano ➔ Sinusitis aguda: los MO que colonizan el epitelio pueden invadir los senos paranasales que habitualmente son estériles, los agentes etiológicos responsables son S. Pneumoniae, H influenzae, moraxella catarrhalis ◆ Sintomatología: secreciones por nariz, fiebre, congestión de faringe ◆ Toma de muestra: punción de senos paranasales. Streptococcus pneumoniae: cocos gram + en pares (diplococos), anaerobio facultativo que requiere de CO2 (microaerofilia), colonias redondas, mucosas, Alfa-hemolitico. A las 48hs observó colonias umbilicadas x autolisinas Optoquina sensible (halo mayor a 16mm), si me da dudosa el halo hago solubilidad de bilis positiva del reactivo es desoxicolato de sodio, si es + se activa la autolisina rompiendo la PC). Puede presentar resistencia a betalactámicos x alteración del sitio blanco. - Resistencia a la penicilina hago una prueba de screening con oxacilina en Muller Hinton sangre, si da > a 20 es sensible, si es menor no puedo determinar que es resistente, hago Etest para CIM de PENICILINA - Factores de virulencia: cápsula de polisacárido, autolisina, adherencia a células blanco Haemophilus influenzae: cocobacilos gram - pleomórfico, anaerobio facultativo. Requiere CO2, crece en medios enriquecidos (chocolate), de no contar con este medio necesito añadir factor X y V. Pueden presentar cápsula y resistencia a betalactámicos por alteración del sitio blanco o producción de beta-lactamasa. Moraxella catarrhalis: diplococo gram - , catalasa +, oxidasa +, aerobios, dnasa +, detección de b-lactamasa TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR Patologías frecuentes ➔ Neumonía: respuesta del parénquima pulmonar asociado a la agresión bacteriana, se genera por aspiración de gérmenes colonizantes, inoculación directa, vía hematógena Toma de muestra: los cultivos tienen baja sensibilidad por la contaminación de la muestra con secreciones o con microbiota colonizadora. Se suelen tomar esputo, hemocultivos (si paso a sangre), serología, o métodos más invasivos como biopsia pleural, lavado bronquial (tuberculosis), puncion transtraqueal, aspirado traqueal (significativo >106) o lavado broncoalveolar (> 104) Calidad de la muestra: es representativa si tengo menos de 10 células epiteliales por campo y más de 25 leucocitos por campo a bajo aumento. Cuando ingresa una muestra realizó una tinción de gram y Ziehl-Nielsen, por más que no sea representativa si tengo un resultado + informo sobre micobacteria Cultivo de micobacterias: medios sólidos tradicionales Lowentein jensen (gold standar) pueden tardar hasta 30-60 días, o medios líquidos acorta el tiempo. Agentes etiológicos 65 años o con comorbilidades Neumonía severa hospitalizados - Streptococcus - Streptococcus pneumoniae - Streptococcus pneumoniae - Haemophilus influenzae pneumoniae - Mycoplasma pneumoniae - Staphylococcus aureus - Haemophilus influenzae - Enterobacterias - Staphylococcus aureus - Mycoplasma pneumoniae - Enterobacterias - Chalmydophila spp - Mycoplasma pneumoniae - Chalmydophila spp - Legionella spp Pseudomonas aeruginosa: SIEMBRO EN MCCONKEY, no fermentador bacilo gram -, aerobio, inmovil metabolismo oxidativo de carbohidratos, produce olor característico, TSI sin cambios, INVIC,  ➔ Tuberculosis: se disemina de persona a persona por medio de aerosoles, permanecen en el aire mayor cantidad de tiempo, es un bacilo ácido-alcohol resistentes, cortos, aerobios, inmóviles, no flagelados, no esporulados Mycobacterium tuberculosis: los mecanismos de virulencia comprende la habilidad para crecer en monocitos y macrofagos, prevenir acidificación del fagosoma, factores que impiden activación de macrofragos. Tracto genital Microbiota normal ➔ Vagina: Lacto bacillus, gardnerella vaginales, prevotella, candida ➔ Uretra femenina: lactobacillus, streptococcus, corynebacterium, e.coli ➔ Uretra masculina: corynebacterium, staphylococcus, streptococcus ➔ Ano: e. colli, enterococcus, firmicutes Enfermedades de transmisión sexual comunes: Clamidia, Gonorrea, sífilis, tricomoniasis Toma de muestra ❖ Uretra masculina: limpiar la zona ESPERAR QUE VUELVA A EXUDAR , insertar un hisopo esteril aproximadamente 2cm y rotar lentamente ❖ Endocérvix: se utiliza un espéculo para visualizar el cuello uterino y canal vaginal, se limpia la mucosa, el cepillo se rota suavemente dentro del endocérvix para recoger células ❖ Anal ❖ Flujo vaginal: uso espéculo, sin limpiar y too con hisopo muestra del fondo del canal vaginal, la voy a cultivar a cultivar en Sabouraud porque me interesa ver candida Siembra de muestras genitales: Con sc fisiológica en el tubo, libero la muestra y la recojo con una pipeta. Luego, la dispenso en el agar y la estrío con el aNsa. Realizo la tinción de Gram. Utilizo medios de cultivo agar chocolate y Thayer-Martin, e incubo durante 72 horas en una atmósfera con un 5% de CO₂. En las muestras anales y vaginales, es importante utilizar el medio Thayer-Martin ya que inhibe la microbiota habitual. ESPERO 72HS HASTA RECHAZAR LA MUESTRA COMO NEGATIVA MO Síntomas Muestra Colonias y Características Factores de virulencia Neisseria -Secreciones Endocérvix y -Mucosas Pilinas (ausencia de Gonorrhoeae mucopurulentas, uretra, anal, -Puntiformes inmunidad), proteasa de IGA, urgencia miccional faringe -Transparente endotoxinas, movilidad -Transmisión sexual -Diplococos gram - (artritis séptica) -Leucocitos Chlamydia -Secreción uretral Endocérvix y -Bacilos gram - la pared contiene LPS, trachomatis blanquecina y uretra -Parásito intracelular membrana externa MOMP transparente obligado específicas para cada tipo de -Infertilidad -tratamiento con especie. No tratar con -ETS acitromicina b-lactamicos Mycoplasma Bacterias parte de la endocérvix - adhesinas tipo P1, cambia genitalium microbiota vaginal, se expresión de las lipoproteínas la considera ETS en de superficie el hombre. Candida Vaginitis bacteriana Flujo vaginal y -Sabouraud y agar sangre Tratamiento con albicans -Prurito vaginal, ardor, uretra -incubado 24-48hs en CO2, fluconazol aumento del flujo masculina atmósfera ambiente, 33-37 vaginal amarillento grados Veo leucocitos -Desbalance en la e inflamación microbiota Trichomona Prurito vaginal, Flujo, semen, Observar en fresco al MO - vaginalis -ETS uretra Gram y giemsa en muestra en fresco se observan trofozoitos con flagelo Gardnerella Vaginosis bacteriana. Bacilos pleomórficos - Anaerobius no hay inflamación, Hago gram Mobiluncus clue cells, sin Cultivo en agar sangre en Mycoplasma leucocitos, OLOR A CO2 PESCADO Sífilis Chancro sifilítico: Uretra: -Busco espiroquetas -Tratamiento con lesión con bordes femenina -limpiar la zona, dejar que penicilina elevados, fondo masculina, exude, llenar el ojo del ansa -Se autoresuelve pero se limpio, indolora, vagina, ano, y colocarlo sobre sobre un vuelve más fuerte glande, boca porta, lo pongo en una cámara húmeda Neisseria Gonorrhoeae: Pruebas de identificación ◆ Oxidación de los azúcares: medio CTA (Semisólido) que permite el desarrollo de bacterias, a cada uno de los tubos le agrego maltosa, lactosa o glucosa. Oxida solo la glucosa, se ve color AMARILLO ◆ Catalasa positiva: ◆ Oxidasa positiva, fermentadora Tracto gastrointestinal Diarrea: aumento del número de deposiciones y/o disminución de su consistencia. Tengo MO inhibiendo absorción a lo largo del intestino delgado Disentería: diarrea con moco sanguinolento y purulento acompañada de fiebre Diarrea líquida con sangre: acuosa con o sin moco, volumen importante, estrías sanguíneas Duración - Aguda: hasta dos semanas, aumento de la fluidez y frecuencia - Persistente: hasta 4 semanas - Crónica: más de 4 semanas Etiología Infecciosa ➔ Virales: adenovirus, norovirus, sapovirus  ➔ Bacteriana ➔ Parasitarias No infecciosa ➔ Intoxicaciones alimentaria ➔ Fármacos Infecciones gastrointestinales Gastroenteritis: náuseas, vómitos, cólicos, diarrea y ocasionalmente fiebre. La patogenia se da por un MO que ingresan y resisten los mecanismos de defensa del huésped y alcanzan el tracto gastrointestinal Mecanismos de transmisión ➔ Directa: contacto persona-persona ruta fecal oral EJ: shigella, campylobacter, clostridioides, giardia duodenalis ➔ Indirecta: agua o objetos contaminados. EJ: Giardia, cryptosporidium Dosis infectante ➔ Bajo inóculo entre 100-500: Shigella, Giardia, Cryptosporidium, E. coli 0157: H7 ➔ Inóculo moderado 1000-10000: Salmonella spp, campylobacter ➔ Inoculo alto >100.000: E.coli enteroinvasiva, E.coli enterotoxigenica Etiología de las gastroenteritis → clasificación por patogenia 1) Adherencia a la mucosa gastrointestinal y producción de enterotoxinas: V. cholerae, E.coli enterotoxigénica 2) Adherencia a la mucosa y destrucción del ribete en cepillo: E. coli enteropatogénica, rotavirus, noravirus, cryptosporidium 3) Invasión de la mucosa y multiplicación intraepitelial: shigella spp, E.coli enteroinvasiva 4) Translocación en la mucosa y proliferación en lámina propia y nódulos mesentéricos: Salmonella spp. Campylobacter, Yersinia 5) Translocación e infección generalizada: Salmonella Typhi, Paratyphi A y B Diarrea inflamatoria tipo II Diarrea secretora ❖ Shigella ❖ V. cholerae ❖ EIEC ❖ ETEC ❖ EHEC ❖ EPEC ❖ Campylobacter jejuni ❖ Rotavirus ❖ Salmonella ❖ Adenovirus ❖ C. difficile ❖ G.lamblia Invasión de la mucosa, producción de citotoxinas, colon, Enterotoxina o reducción de superficie absortiva, MF con leucocitos, Disentería intestino delgado, MF sin leucocitos, Diarrea acuosa Diagnóstico microbiológico → se realiza un COPROcultivo que busca únicamente Shigella y Salmonella, todos los otros MO deben pedirse aparte. No está indicado siempre, generalmente en pacientes internados, inmunosuprimidos, o con diarrea con sangre ➔ Cultivo en medios selectivos y diferenciales para BG-: Incubación 35-37 en atm normal - Agar Mcconkey: me interesan las colonias no fermentadoras de lactosa  -Agar Hektoen: busco colonias no fermentadoras y aquellas que producen SH2 (OJO pq el proteus tmb produce SH2 ➔ Caldo de enriquecimiento Gram negativo: frenan desarrollo de e coli Micosis superficiales Infecciones fúngicas que afectan tejidos queratinizados: piel, uñas, cabellos, asi como tambien las mucosas Dermatofitosis (tiñas): micosis superficiales ocasionadas por dermatofitos, hongos queratinolíticos, que afectan la piel y sus anexos. Raramente producen invasión profunda, son cosmopolita, afectan a todo tipo de pacientes. Los dermatofitos son hongos filamentosos hialinos, ramificados y tabicados - Epidermophyton - Trichophyton - Microsporum - Nannizzia Factores predisponentes: edad, humedad, tratamiento con corticoides, diabetes, contacto con animales, inmunosupresión, mala higiene. Hábitat natural ❖ Antropofílicos: Trichophyton tonsurans, Trichophyton rubrum, T.interdigitale, Epidermophyton floccosum ❖ Zoofilicos: Microsporum canis, Trichophyton benhamiae ❖ Zoofílicos: Nannizzia gypsea Clasificación Formas superficiales ➔ Tinea capitis: dermatofitos más frecuentes en niños ➔ Tinea corporis: tinea de la piel lampiña en zonas descubiertas o grandes pliegues ➔ Tinea imbricada ➔ Tinea cruris: placas eritematoescamosas con bordes vesiculosos ➔ Tinea pedis: afecta pliegues interdigitales, plantas talones, bordes Formas profundas ➔ Querion de celso: tinea capitis inflamatoria, con pústulas y abscesos múltiples, dolor a la presión, genera una alopecia importante ➔ Tiña de la barba: pústulas foliculares aisladas, de evolución crónica Diagnostico microbiologico 1) Preparación del paciente: suspender el tratamiento antifúngico, realizar baños con agua y sal para las onicomicosis, concurrir con zapatos cerrados si la lesión es en el piel, no colocar cremas, polvos y esmaltes 3 días previos 2) Toma de muestra a) Uñas: limpiar con alcohol 70%, raspar la parte inferior (lesión subungueal) de la uña con bisturí o espátula recolectando escamas. Para lesiones superficiales raspar la parte superior.  b) Cuero cabelludo: seleccionar el área y limpiar con alcohol 70%, recolectar 10 pelos con pinza o escamas de cuero cabelludo por raspado. c) Piel y espacios interdigitales: limpiar con alcohol 70%, raspar con bisturi en los bordes externos de la lesión o en forma completa si es un espacio interdigital. 3) Examen micológico directo observación microscópica de raspado→ evaluar filamentos hialinos, tabicados y ramificados - KOH-tinta - Blanco de calcoflúor (M. De fluorescencia): no podemos decir si el hongo es hialino 4) Examen directo en caso que sean pelos → puedo ver 2 dos tipos de parasitación endothrix y ectothrix (m.canis) 5) Cultivo: incubar a 28ªc x 15 días en tubo a) Agar sabouraud b) Agar lactrimel con cliclohemximidad: inh desarollo de hongos ambientales 6) Identificación: Una vez que creció el hongo se hace observación macroscópica (pigmento del anverso y reverso, textura) y microscopía haciendo un disgregado con azul de lactofenol (estructuras de reproducción) Pitiriasis versicolor: micosis superficial frecuentes en adultos jóvenes en regiones tropicales, no es contagiosa, es producida por levaduras del género Malassezia spp que forma parte de la microbiota habitual de la piel. - Predomina en tronco (cercano a glándulas sebáceas porque son lipofílicas) y se caracteriza por la presencia de manchas hipo o hiperpigmentadas - Especies más frecuentes M.furfur, M.globosa, tengo que cultivarlas adicionando ácidos grasos al medio Diagnostico microbiologico 1) Toma de muestra y examen directo: se toma por raspado, se realiza un examen micológico directo en busca de elementos levaduras y filamentos finos (fideos con albóndigas) 2) Cultivo: se cultivan en agar sabouraud, veo colonias elevadas convexas, lisas con textura suave y color crema 3) Microscopia por disociado: observo levaduras esféricas agrupadas y asociadas a hifas cortas Piedras: micosis superficiales benignas caracterizadas por cúmulos fúngicos con aspecto nodular adheridos al pelo, afectan pelo de la cabeza, axila, pubis o barba - Piedra blanca: el agente etiológico son levaduras del género Trichosporon (asahii, asteroides, inkin), afectan más vello de cabeza y axila - Piedra negra: pediatria hortae, nodulos duros negros, afectan vellos de cabeza, barba, bigote y pubis Tiña negra: micosis superficial asintomática causada por Hortaea werneckii, afecta las palmas produciendo manchas hiperpigmentadas color café oscuro o negras Diagnostico microbiologico: en el examen directo con KOH observo hifas de color verde osucuro ramificadas y delgadas. Luego del cultivo macroscópicamente veo levaduras negras y brillantes, en el disociado veo células levaduriformes principalmente hialinas Candidiasis superficiales: producidas por el género Candida spp (albicans, tropicales, parapsilosis) forman parte de la microbiota de la piel, tubo digestivo, TRS, vagina ➔ Candidiasis oral: difusa o limitada a una región, puede afectar paladar, mejillas, lengua formando placas mucosas blanquecinas. Está predispuesta por el uso de corticoides, inmunosupresión, diabetes, prótesis dentales. Se recomienda mantener una buena higiene dental y limitar el consumo de alimentos con azúcar ➔ Candidiasis vaginal: asociada a vaginitis, causa dolor, ardor, prurito, secreción vaginal espesa sin olor. Está predispuesta por embarazo, ATB, anticonceptivas. El tratamiento puede ser tópico u oral ➔ Candidiasis balanitis: inflamacion del glande, mismo sintomas que en la mujer, la muestra la tomo con un hisopo, está predispuesta por diabetes o falta de higiene ➔ Candidiasis cutáneas: afecta grandes pliegues, zona del pañal o uñas, la diabetes, atb, sudoración son factores predisponentes CRITERIOS DIAGNÓSTICOS Examen directo positivo (FHT) + Cultivo positivo (aislamiento de dermatofito). Diagnóstico: dermatofitosis Examen directo negativo + Cultivo positivo (aislamiento de dermatofito). Diagnóstico: dermatofitosis Examen directo: FHT o filamentos + Cultivo con hongo filamentoso oportunista REPETIR TOMA DE MUESTRA. Si se vuelve a aislar el mismo hongo que en 3) Diagnóstico: micosis por hongo oportunista Micosis oportunistas Son un grupo de micosis causadas por hongos que viven normalmente como saprofitos en el ambiente o en cavidades naturales de humanos, en su mayoría afectan a personas con un grado de inmunodeficiencia (HIV, CANCER, DBT, uso de inmunosupresores) 1. Candidiasis: micosis oportunista más frecuente, afecta a individuos de cualquier edad, forma parte de la microbiota, son hongos levaduriformes unicelulares con o sin pseudomicelios Factores de patogenia del hongo - adherencia a células epiteliales - enzimas proteolíticas, y filamentación para penetrar en tejidos Factores de contagio del huésped - internación prolongada - uso de ATB - catéteres - Cirugía abdominal Toma de muestra: - mucocutáneas: raspado de lesiones, hisopados (si son húmedas) - diseminadas: punciones de sitios estériles, biopsias, orina Identificación: cultivo en agar sabouraud y agar cromogenico Candidiasis mucocutánea crónica: lesiones en piel, mucosa asociada a trastornos metabólicos y fallas en el SI  Candidiasis diseminada: predispuesto por alteración inmunitaria, uso de catéteres vasculares, ATB, cirugías, hay afección de otros órganos por diseminación hematógena 2. Criptococosis: micosis por levaduras exógenas capsuladas del género Cryptococcus spp, se adquiere por vía inhalatoria, el 90% de los casos son pulmonares pero puede diseminarse por vía hematógena a cualquier visera, especialmente el SNC (criptococosis meníngea) en pacientes inmunodeficientes. Factores de patogenia - cápsula polisacárida: evasión de la fagocitosis - Crecimiento a 37 Factores predisponentes - HIV - Trasplantes - Corticoides Cuadros clinicos: criptococosis pulmonar, meníngea, diseminada Muestras: LCR (sedimento), urocultivo, biopsia cutánea, muestras respiratorias Identificación ➔ Examen directo: tinta china, observó levaduras redondas capsuladas ➔ Cultivo: agar sabouraud (928-37 grados) observó colonias brillosas blancas ➔ CGB: diferenciar C. gatti (positiva viraje a azul) de C.neoformans ➔ Anticuerpos monoclonales para detección del antígeno capsular Cryptococcus neoformans: cosmopolita, está asociado a inmunosupresión, el reservorio principal son las heces de palomas, pollos. Cryptococcus gatti: presente en zonas tropicales, afecta a pacientes inmunocompetentes, su reservorio son la corteza de los árboles de eucalipto 3. Neumocistosis: neumonía causada por el hongo Pneumocystis jirovecii, afecta a personas con inmunosupresión severa, no se conocen hospederos ambientales y se contagia por gotas respiratorias, no es cultivable, se adhiere al alveolo pulmonar Ciclo biológico: tienen una forma infectante (trofozoito) con afinidad a los neumocitos I, se conjugan estas formas tróficas formando el prequiste, sufre procesos de meiosis hasta llegar al quiste maduro, asco con 8 ascosporas Muestra: esputo inducido (sensibilidad depende de que tan bien este realizado), lavado broncoalveolar, punción o biopsia pulmonar Examen directo - Fresco - Blnco de calcoflúor - Gram-weigert: tiñe la pared, se ven basófilos las ascosporas - Grocott  4. Aspergilosis: enfermedad cosmopolita, ubicuos en la naturaleza, pueden provocar enfermedad pulmonar alérgica hasta infección fúngica invasiva (IFI) - son hongos filamentosos hialinos y tabicados - las especies involucradas en el humano son A.fumigatus, A.flavus, A.niger, A.terreus - Penetran principalmente por inhalación Factores predisponentes IFI: Alcoholismo, HIV, neutropenia Aspergilosis broncopulmonar alérgica: común en pacientes alérgicos, asmáticos, genera episodios recurrentes de obstrucción bronquial Aspergilosis pulmonar crónica: puede darse en forma de aspergiloma que se ubica en cavidades previas post enfermedades como EPOC, Tbc, sarcoidosis IPA: relacionada con neutropenia severa, síntomas pulmonares intensos Diagnostico: imagenes, examen directo y cultivo, histopatología Muestras para examen directo: esputo, lavado broncoalveolar Tinciones: blanco de calcoflúor y giemsa Cultivo: Agar sabouraud y BHI, se estudia macroscópicamente y microscópicamente las estructuras de reproducción M.O A.fumigatus A.flavus A.niger A.terreus Aspecto Aterciopelado, Pulverulento Punteado negro aterciopelado algodonoso Color anverso Verde botella, blanco Verde amarillento blanco amarillento cafe Color reverso Incoloro Incoloro, cafe amarillento cafe vesícula Mazo o domo Esférica globosa hemisférica Flalides Paralelas Radiada radiadas dos series Conidióforo liso rugoso largo liso  Herpes virus Patología del herpes virus ➔ Fase Inicial: durante las primeras 48-72 horas, no se observa nada a simple vista, pero el paciente puede comenzar a sentir un cosquilleo que puede intensificarse hasta convertirse en dolor, y algún ganglio puede inflamarse. En el punto inicial aparece un enrojecimiento de la zona. ➔ Desarrollo de la pápula En esta área se produce un proceso inflamatorio que genera una elevación del área de infección, formando una lesión conocida como pápula. El dolor en la zona se intensifica. ➔ Formación de la Vesícula o Ampolla: La lisis celular provocada por la infección genera una acumulación de líquidos en el tejido, lo que da lugar a una lesión llamada vesícula o ampolla. ➔ Ruptura de la vesícula: La vesícula o ampolla puede romperse por un proceso mecánico, liberando el líquido vesicular que contiene restos celulares y miles de virus, los cuales pueden infectar otras células. ➔ Formación de la Úlcera y Costra: La vesícula se convierte entonces en una úlcera, que se cubre con material seroso, formando una costra. Finalmente, la piel comienza a reconstituirse hasta quedar intacta. Que ocurre a nivel interno: A medida que el virus se replica en el sitio de la infección, penetra en las terminales nerviosas y migra a través de los axones del nervio sensitivo hasta el cuerpo neuronal en el ganglio sensitivo dorsal. Allí, la información genética del virus ingresa al núcleo de la neurona, donde permanece en un estado latente. El virus en estado latente puede activarse, migrar de nuevo por el nervio sensitivo y replicarse en el mismo lugar o cerca de la lesión inicial, afectando cualquier área inervada por la terminal dendrítica del axón. Esta activación se conoce como reactivación y la lesión resultante como recurrencia. Los disparadores de la recurrencia son muchos: efecto del sol, stress, lesión mecánica, etc. Estos desencadenantes de la recurrencia están relacionados con una disminución de la respuesta inmune celular. Infección en el hombre - Cuando el HSV toma contacto con un huésped susceptible ocurre lo que se denomina infección primaria. Esta infección puede o no manifestar síntomas. Si manifiesta síntomas estamos en presencia de un enfermo, En el caso de no presentar síntomas, estamos en presencia de un portador asintomático. - La mayoría de las infecciones a HSV tipo 1 son asintomáticas. En cualquiera de los dos casos hay liberación de virus infectivos que pueden disparar nuevos ciclos infectivos en otras células y pueden ser transmitidos a otra persona. - Entre el 50 al 90% de los casos, la infección primaria termina en una infección latente, la que tiene la característica de reactivarse, dando lo que se denomina una infección recurrente.  Procesamiento de la muestras de herpes: tener en cuenta si es un paciente de la comunidad, si es o no sexualmente activo, si pudo haber estado expuesto a algún factor desencadenante. Se piden siempre análisis por ets con VDRL. Virus de la varicela zoster ➔ Es una de las enfermedades eruptivas más frecuente de la infancia, producida por el virus Varicela Zóster. ➔ Es altamente contagiosa, afecta a casi todas las personas antes de alcanzar la edad adulta, a menos que esté vacunada. ➔ Se la consideró como una enfermedad benigna pero algunos casos de personas gestantes, recién nacidas, inmunocomprometidas y en adolescentes o personas adultas sanas pueden desarrollar complicaciones graves como sobreinfección bacteriana de las lesiones, neumonía, encefalitis ➔ Como resultado de la primoinfección el virus queda alojado en las células de los ganglios sensitivos produciendo una infección latente ➔ La entidad clínica, herpes zoster ocurre por la reactivación del virus, relacionado con la depresión inmunología de individual, las lesiones están localizadas en un punto específico Ciclo de replicación viral: ocurre una replicación a nivel del epitelio bucal/respiratorio con una primera viremia hacia el día 4 post infección, la segunda viremia ocurre unos 14 días después. La infección primaria afecta principalmente a niños, el herpes zoster afecta principalmente a adultos Análisis de la muestra para ambos Técnica muestra Características Observación directa Toma de la lesión, se debe - microscopía electrónica de campo oscuro: ver o no asegurar la toma de presencia de treponemas células a partir del - coloraciones de giemsa: se ven policariocitos hisopado del fondo de la - anatomía patológica lesión, si es posible rompiendo una vesícula aislamiento= cultivo Idem observacion - Solo en centros de referencia para investigación directa - Veo el efecto citopático del virus sobre los fibroblastos Búsqueda de Toda búsqueda directa en La probabilidad de una imagen positiva varía según el antígenos virales: la cual no se ven células periodo de infección siendo mayor en la etapa de la vesícula inmunofluorescencia debe descartarse Caso +: veo fluorescencia, Caso - no veo directa Biología molecular Cualitativa: Muy útil en Diagnóstico rápido de alta sensibilidad y especificidad, no casos de alteraciones está disponible en todos los centros de atención neurológicas  donde se realiza en LCR. Cuantitativa: carga viral Estado de situación con la infección o presunción del disparo de una infección recurrente activa o evolución del tratamiento con antivirales Búsqueda de ac Utilidad relativa. Pensar en la alta tasa de positividad y en específicos las recurrencias CASOS POSIBLES - IgM + IgG -: primoinfección - IgM + IgG muy alto: recurrencia, infección activa - IgM - IgG: + de bajo título infección pasada Dado que ninguna técnica puede aseverar la existencia de enfermedad activa, nunca deben considerarse parámetros aislados para definir la misma, siempre se deben buscar otros factores asociados al riesgo de infección Citomegalovirus El síndrome mononucleósico (smn), es un conjunto de síntomas y signos, caracterizado por cuatro manifestaciones clínicas: Fiebre, Faringitis o dolor de garganta, Poliadenopatía - esplenomegalia, Fatiga, Erupción cutánea. Con leucocitosis mononuclear y linfocitosis atípica. - La mayoría de las infecciones transcurren de manera asintomática - Causa infección generalizada en lactantes, trasplantados, que reciben quimioterapia, que tienen SIDA. Solo se contagia cuando es ACTIVO, si está latente NO. - No genera anticuerpos heterófilos Manifestaciones del paciente trasplantados: efectos sobre el paciente y el injerto, hepatitis, pancreatitis, neumonitis Ciclo de replicación: luego de la penetración en la célula blanco, el ácido nucleico viral inicia un proceso de transcripción lento produciendo proteínas muy tempranas (proteínas viral P72) , tempranas y lentas. Diagnóstico de laboratorio 1) Aislamiento de estructuras viales específicas: Cultivo (convencional y shell vial permite obtener en 24hs y detectar la proteínas tempranas)] 2) Citología o histopatológicas: Histología e Inmunohistoquímica, se observa una inclusión nuclear llamada ojo de lechuza. Inmunofluorescencia directa sobre los leucocitos 3) Demostración de la cinética de respuesta inmune a) Test de antigenemia PP65: El número de linfocitos positivos constituye un marcador estrechamente relacionado con el curso de la infección. Estadísticamente es significativa la ausencia de CMV pp65 en linfocitos de sangre periférica de pacientes seropositivos asintomáticos. Indica una infección activa b) Serología (IgM, IgG) 4) Detección de DNA cuali y cuantitativo: carga viral,  ➔ Prevención de la enfermedad ➔ Tratamiento de enfermedad por CMV ➔ Monitoreo de la respuesta a la terapia ➔ Pronóstico de la enfermedad Epstein Barr Es la mayor causa de la mononucleosis aguda infecciosa, síndrome común caracterizado por fiebre, garganta irritada, fatiga extrema y ganglios linfáticos inflamados. - Asociado a enfermedad proliferativa post trasplante - La célula afectada es el LB → EBV entra en un estado latente dentro del linfocito sin experimentar periodo de replicación viral completa - Se transmite por saliva infectada → infección en la bucofaringe que luego difunde a todo el organismo. - Genera Ac heterófilos - LA LATENCIA ES EN LA SANGRE (LEUCOCITOS) POR ESO PUEDO HACER CARGA VIRAL. Diagnóstico de laboratorio 1. Serología complementaria: se informan IgM e IgG por dilución del suero siendo un resultado + aquel > a 1/16 2. Monotest: los Ac heterófilos aparecen en la fase aguda de la infección a las 2-5 semanas, útiles en adolescentes y adultos, buena sensibilidad en la primera y última semana 3. Carga viral: utilidad de seguimiento por PCR, con plasma, CUANDO SE MOVILIZA A NIVELES ALTOS LA ENFERMEDAD ESTÁ PROGRESANDO  Virus respiratorios características: la mayoría son de presentación estacional, afectan preferentemente a niños o personas dentro del grupo de riesgo, presentan reinfecciones frecuentes, y son de denuncia obligatoria. Tradicionales - Adenovirus - Virus sincicial - Influenza A-B - Parainfluenza Emergentes - Influenza aviaria - Influenza A H1N1 - SARS - COVID-19 Mecanismo infeccioso: el virus ingresa y se replica en el epitelio nasal, se produce daño epitelial y liberación de fluido (moco), a su vez el virus también se libera, reacciona con el sistema inmune y se da una regeneración del epitelio. En pacientes inmunocomprometidos puede evolucionar a complicaciones más graves Clínica de los virus respiratorios - Vías aéreas altas: tos, faringitis, otitis, resfriado - Vías aéreas bajas: bronquitis, neumonías, traqueobronquitis - Manifestaciones asociadas al adenovirus conjuntivitis sin secreción Epidemiología: circulan durante todos los meses peros los brotes ocurren mayormente en inviernos, ya que a T bajas y humedad aumenta la susceptibilidad del epitelio respiratorio a la infección, favorece la supervivencia del virus en las secreciones respiratorias Influenza: tiene un periodo de incubación de 3 días, de comienzo agudo, síntomas respiratorios y digestivos. Es un ARN virus, envuelto y con dos tipos de proteínas virales: neuraminidasa (NA) y hemaglutinina (HA) ambas proteínas contribuyen a la penetración del virus a la célula, la propagación del virus - FLU A: posee gran variabilidad genética, producen enfermedades en humanos, aves, porcinos, la respuesta inmune específica protege ante una infección provocada por el mismo virus ➔ Variación genética: se produce en las glicoproteínas de membranas, pueden ser mutaciones menores drift (también ocurren en FLU B), o mayores shift que ocurren cambios dramáticos, generando una potencial pandemia. - FLU B: existen dos variantes linaje victoria o linaje yamagata y tienen prácticamente el mismo nivel de frecuencia Atacar al virus: es liposoluble, es lábil al calor, desecación y uso de antisépticos, etanol, agua con lavandina Vacunación: elaborada a partir de virus atenuados, se incluye una cepa de FLU B que se elige al azar y dos cepas de FLU A. Debe ser dada anualmente porque la composición genética está determinada por los subtipos más frecuentes que circulan durante la temporada previa en el otro hemisferio. Virus sincicial: ARN virus envuelto, tiene un corto periodo de incubación, genera un cuadro típico de bronquiolitis (obstrucción de las vías respiratorias inferiores), tiene una manifestación grave en bebés menores a 4 meses, en adultos y niños es prácticamente asintomático, es de las causas más frecuentes de hospitalización por IRA. Tiene tropismo por el epitelio bronquial, produce edema y necrosis que colapsa los bronquiolos y se escuchan las sibilancias. CORONAVIRUS: virus de ARN monocatenario, envuelto con 3 proteínas principales, proteína spike (S), proteína de la nucleocápside, proteína de la envoltura. La proteína s contiene dominio variable de unión al receptor que facilita la entrada viral a la células Diagnóstico de laboratorio Toma de muestra: tracto respiratorio superior ya sea hisopado nasofaríngeo + orofaríngeo, en pacientes con enfermedad respiratoria severa se puede realizar un lavado broncoalveolar o aspirado traqueal. Sin células no hay virus - Virus tradicionales: la muestra se transporta en un vial 2SP contiene ATB para inhibir microbiota de la nariz, se deben mantener refrigeradas 4 grados Método directo: preferentemente inmunofluorescencia directa o biología molecular ❖ IFD: rapido, puedo hacer un panel respiratorio para 7 virus, buena sensibilidad ❖ Biología molecular: se emplea un panel viral que realiza un screening para los virus más comunes empleando la técnica de PCR-multiplex, identificó las bandas por PM. - Virus emergentes: previo a la aplicación de la vacuna se realizaban tests rápidos para la búsqueda de antígenos IgG o IgM, al igual que la técnica de elisa o quimioluminiscencia - Inmunocromatografía: cuando hago el testeo menor a 7 días desde el inicio de los síntomas y el resultado es negativo no puedo descartar que sea negativo ya que aun no los está produciendo activamente - Elisa: búsqueda de ac utilizando antígenos que representan la proteína spike - Inmunocromatografía búsqueda de antígeno