Técnicas Generales de Laboratorio PDF

Técnicas generales de laboratorio  Técnicas generales de laboratorio Páginas: 120 TÉCNICAS GENERALES DE LABORATORIO Número de páginas 120 © FP ESTUDIOS ISBN: 978-84-120588-8-8 Depósito Legal: AS-00485-2021 Registro de la propiedad: 13521544077666611752 El siguiente documen...

Técnicas generales de laboratorio  Técnicas generales de laboratorio Páginas: 120 TÉCNICAS GENERALES DE LABORATORIO Número de páginas 120 © FP ESTUDIOS ISBN: 978-84-120588-8-8 Depósito Legal: AS-00485-2021 Registro de la propiedad: 13521544077666611752 El siguiente documento está elaborado en base al Real Decreto que regula los contenidos del ciclo formativo del que esta obra forma parte: TÉCNICO SUPERIOR EN LABORATORIO CLÍNICO Y BIOMÉDICO Todos los derechos reservados. No se permite la reproducción total o parcial de esta obra, ni su incorporación a un sistema informático, ni su transmisión en cualquier forma o por cualquier medio sin autorización del titular. La infracción de dichos derechos puede constituir un delito contra la propiedad intelectual. Impreso en España- Printed in Spain  Índice ÍNDICE 1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos.................................. 5 1.1. Introducción........................................................................................................ 5 1.2. Clasificación de los materiales de laboratorio........................................ 6 1.3. Equipos básicos de laboratorio.................................................................... 12 1.4. Limpieza, desinfección y esterilización del material de laboratorio........................................................................................................... 14 1.5. Reactivos.............................................................................................................. 16 2. Aplicación de protocolos de seguridad y prevención de riesgos en el laboratorio.................................................................................................................... 25 2.1. Principios generales de seguridad en el laboratorio............................ 25 2.2. Normas para el personal de laboratorio................................................... 26 2.3. Operaciones de seguridad en el laboratorio........................................... 28 2.4. En caso de accidente en el laboratorio...................................................... 28 2.5. Medidas de protección individuales y colectivas.................................. 29 3. Realización de disoluciones y diluciones............................................................... 35 3.1. Introducción........................................................................................................ 35 3.2. Medidas de la masa con balanzas de precisión...................................... 36 3.3. Medidas de volumen con material volumétrico.................................... 39 3.4. Disoluciones........................................................................................................ 43 3.5. Diluciones............................................................................................................. 46 4. Aplicación de procedimientos de separación de sustancias.......................... 55 4.1. Introducción........................................................................................................ 55 4.2. Métodos básicos de separación................................................................... 57 4.3. Extracción de biomoléculas por solubilidad diferencial..................... 58 4.4. Filtración, diálisis y centrifugación.............................................................. 62 4.5. Electroforesis....................................................................................................... 64 4.6. Cromatografía..................................................................................................... 65 5. Realización de la valoración técnica de la coherencia y la fiabilidad de los resultados.......................................................................................... 73 5.1. Conceptos estadísticos básicos.................................................................... 73 5.2. Control de calidad en la fase analítica....................................................... 75 5.3. Serie analítica...................................................................................................... 76 5.4. Representaciones gráficas de control de calidad.................................. 77 6. Realización de técnicas de microscopía y digitalización de imágenes............................................................................................................................ 83 6.1. Introducción........................................................................................................ 83 6.2. Componentes básicos de un microscopio............................................... 84 3 Técnicas generales de laboratorio 6.3. Conceptos básicos de microscopia óptica............................................... 86 6.4. Tipos de microscopios..................................................................................... 87 6.5. Uso del microscopio óptico........................................................................... 88 7. Aplicación de sistemas de gestión de la calidad en el laboratorio............... 95 7.1. ISO 15189:2012.................................................................................................. 95 7.2. Fases de un laboratorio................................................................................... 96 4  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos 1. C  lasificación de materiales, equipos básicos y reactivos 1.1. Introducción 1. ¿Cómo podríamos definir un laboratorio de análisis clínico y biomédico? Se define como establecimiento público o privado donde se realizan análisis de distintas muestras biológicas (humanas), para el diagnós- tico, tratamiento, prevención, seguimiento, control y vigilancia de diver- sas patologías. Para que los resultados analíticos sean eficientes, de calidad y correc- tos es fundamental, la conservación del material de laboratorio, una 5 Técnicas generales de laboratorio limpieza adecuada y una esterilización completa y correcta del equipo. En caso contrario, se generarían numerosos inconvenientes: habría que repetir de nuevo las pruebas realizadas, lo que ocasionaría un retraso en el diagnóstico clínico y una nueva molestia al paciente. 1.2. Clasificación de los materiales de laboratorio Nos referimos a los accesorios y equipos con los que se manipulan las muestras biológicas, reactivos, etc. Pueden clasificarse en: Materiales de un solo uso: – Papel de filtro – Puntas de pipeta – Pipetas Pasteur 6  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos Materiales de múltiples usos: – Gradillas – Utensilios de vidrio: vasos de precipitado, pipetas volumétricas, vidrio de reloj, etc. – Balanzas analíticas Podemos encontrar diversas clasificaciones para los materiales de laboratorio entre las más frecuentes: según su composición. Sim em- bargo la forma más operativa de clasificar los materiales de laboratorio sería según su funcionalidad. 7 Técnicas generales de laboratorio 1.2.1. Clasificacion según su composición En esta clasificación encontramos: Materiales de plástico – Ventajas: resistentes a roturas. – Inconvenientes: no resisten disolventes orgánicos ácidos y bases. – Ejemplos: Puntas de pipeta, pipetas Pasteur, placas de Petri, via- les o también conocidos como eppendorf. Material de vidrio – Ventajas: mas resistente que el plástico y muy estable. – Vidrio borosilicatado, el más frecuente. Presente una gran resis- tencia térmica. – Ejemplos: Vasos de precipitado, probetas, pipetas volumétricas, buretas, matraz Erlenmeyer, matraces aforados, cubre/porta objetos. Material de porcelana – En el laboratorio de análisis clínico su uso no es muy común. – Ventajas: resistente a altas temperaturas – Ejemplos: morteros, embudos Büchner, crisol de porcelana, es- pátula de porcelana, cápsula de porcelana. 8  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos IMAGEN MATERIAL USO Protegen a la pipeta de la entrada de Puntas de residuos. Estas pipetas tienen un filtro pipeta que evita la contaminación al evitar que llegue el residuo a la pipeta. Sirve para transferir pequeñas Pipeta cantidades de líquidos. Se usa cuando Pasteur no se requiere precisión al transferir un volumen. Es similar a un cuentagotas. Utilizada normalmente para realizar Placa de Petri cultivos o siembras. No cierra herméticamente. Se utilizan para depositar una muestra biológica que tiene que ser centrifugada. Vial Tiene una tapa para que durante el centrifugado no se pierda la muestra y un fondo cónico. De vidrio borosilicatado. Se utiliza para preparar o calentar sustancias, Vaso de preparados, medir o traspasar líquidos. precipitado Se pueden encontrar con diferentes volúmenes desde 100ml hasta varios litros. Permite contener líquidos y medir su Probeta volumen pero no con mucha precisión. Permiten dosificar líquidos. Son de un Pipeta volumen determinado, la cantidad de volumétrica líquido vertido corresponde al volumen de la pipeta. 9 Técnicas generales de laboratorio IMAGEN MATERIAL USO Permite realizar mediciones Bureta volumétricas con gran precisión. Se utiliza principalmente para calentar Matraz líquidos cuando hay peligro de Erlenmeyer evaporación. Se utiliza para medir un volumen exacto Matraz de líquido en función de la capacidad aforado volumétrica que tenga el matraz. Portaobjetos: fina placa de cristal sobre la que se depositan las muestras para su posterior análisis Cubre/Porta microscópico. objetos Cubreobjetos: permite cubrir la muestra depositada en el portaobjetos. Permite moler, triturar y mezclar Mortero sustancias sólidas. Embudo Se utiliza para realizar filtraciones al Búchner vacío o filtración a presión asistida Principalmente para calentar, calcinar, Crisol de quema y fundir sustancias debido a que porcelana resiste altas temperaturas. 10  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos IMAGEN MATERIAL USO Espátula de Para coger pequeñas cantidades de porcelana compuestos sobre todo polvo. Sirve para evaporar el exceso de solvente de una muestra. Se coloca Cápsula de la preparación en la capsula sobre porcelana una rejilla de asbesto y se somete a calor con un mechero, esto permite la evaporación. 1.2.2. Clasificación según sus funciones Materiales de calor y frio: mecheros Bunsen, baños térmicos, ca- lefactores eléctricos, autoclaves, estufas; frigoríficos, congeladores. Materiales de medición de la temperatura, el tiempo y la masa: termómetros, balanzas, cronómetros, baños termostáticos. Material pata extracciones y toma de muestras biológicas: algo- dón, guantes, bandejas, etiquetas identificativas, lancetas, agujas desechables, contenedor de objetos punzantes, capilares, recipiente para orina y/o heces, frascos de hemocultivos, tubos para los dife- rentes tipos de muestras que se soliciten. IMPORTANTE: TODOS LOS MATERIALES QUE SE ENCUENTRAN EN EL LABORATORIO DEBEN ESTAR DEBIDAMENTE CLASIFICADOS, CONTROLADOS Y BAJO UN CONTROL DE MANTENIMIENTO QUE GARANTICE LA SEGURIDAD, EFICACIA Y CALIDAD DE LOS MISMOS. 11 Técnicas generales de laboratorio 1.3. Equipos básicos de laboratorio Equipo básico (auxiliar o complementario) – Neveras – Congeladores – Baños de agua – Balanzas – Microscopios – Ph-metros Equipo específico – De alto nivel de automatización: requieren técnicos expertos – Analizadores manejables (menos automatizados) en los que el técnico de laboratorio tiene mayor participación. Para cubrir las necesidades del laboratorio es fundamental la fiabilidad y practicabilidad del analizador y los equipos. Equipos básicos más frecuentes y utilizados en el laboratorio: Balanzas analíticas – Balanza de doble platillo (mayores cantidades). – Balanza de precisión (menores cantidades). Incluye correcciones de tara. Margen de erros mínimo. 12  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos Microscopios – Sistema de lentes que permite ampliar la imagen. – Se pueden observar células, microorganismos y diversas muestras biológicas. – Métodos de contraste: se utilizan para observa- ciones microscópicas. Las más destacas son: microscopia de campo oscuro, contraste de fase y fluorescencia. Centrífugas – Se utilizan para separar sustancias que difieren en su masa mediante un principio de gravedad a través de una fuerza centrífuga. – A partir de sangre total se puede obtener suero o plasma mediante centrifugación. Además, permite contabilizar la concentración de células en sangre total y en otras muestras biológicas. Cabinas de seguridad biológicas, pueden clasificarse en función del nivel de seguridad que proporcionan: – Cabinas de seguridad de clase I: para mani- pular agentes biológicos de bajo o moderado riesgo. El frontal se encuentra abierto. – Cabinas de seguridad de clase II: mismo nivel de protección que las primeras, pero mantienen los materiales estériles en su interior. – Cabinas de seguridad de clase III: garantizan una protección total. Están completamente cerradas y solo se puede acceder a ellas me- diante unos guantes que tienen incorporados. 13 Técnicas generales de laboratorio Limpieza, desinfección y esterilización 1.4. del material de laboratorio Limpieza: eliminación por medios mecánicos o físicos cualquier mate- ria extraña, contaminantes, polvo, grasa, etc. Desinfección: eliminación de microorganismos, pero no 100% una des- contaminación total. La forma más usual de limpiar los materiales es a mano frotando con un cepillo con agua y detergente y enjugando con agua destila- da. También se pueden sumergir los materiales en una solución de limpieza durante 20-30 minutos y finalmente se enjuagarán con agua destilada. Cada vez se utilizan más técnicas de ultrasonido como método de limpieza. Cuando se quieren eliminar restos difíciles se emplean ácidos y bases que tienen una acción más agresiva. Lo más frecuente es una disolu- ción saturada de dicromato potásico en ácido sulfúrico o en ácido nítri- co: mezcla cromática. Finalmente, se deja secar el material boca abajo en el fregadero, pero si queremos agilizar este proceso lo introduciremos en una estufa, excep- to si es material de vidrio graduado o de plástico. 14  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos MÉTODOS DE DESINFECCIÓN MECÁNICOS Y FÍSICOS QUÍMICOS Más común: ebullición 20 min. Alcohol etílico de 70º; Rayos ultravioletas clorógenos (lejía); formol; (laboratorios de bacteriología, detergentes derivados del biología molecular, cultivos amonio, clorofenoles. celulares). Esterilización: proceso físico o químico donde se eliminan los microorganismos, esporas. – Calor húmedo y seco MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN FÍSICOS QUÍMICOS Calor: método letal para la Deben ser tóxicos y volátiles para esterilización y depende del que se elimine fácilmente después tiempo de exposición y la de su uso. temperatura. Óxido de etileno, glutaraldehído – Calor húmedo, mediante y formol. desnaturalización y Antes de la esterilización se debe coagulación de proteínas. limpiar para eliminar cualquier – Calor seco, principalmente resto de materia orgánica u otros para el material de vidrio. residuos Radiaciones ionizantes Rayos ultravioletas: poco penetrantes y afectan al material genético de los microorganismos Filtración: para disoluciones de materiales termolábiles. 15 Técnicas generales de laboratorio 1.5. Reactivos El reactivo más común en los laboratorios es el agua, considerada el disolvente universal y, por lo tanto, es vital el uso de agua de muy buena calidad para evitar interferencias y sesgos en los resultados. Se define como reactivo a cualquier sustancia que interactúe con otra sustancia en una reacción y de lugar a otras sustancias de propieda- des, características y conformación distinta, denominadas producto de reacción. Los reactivos deben ser de gran calidad y pureza para asegurar que las pruebas de laboratorios se realicen de manera eficaz, todo esto se debe a la amplia variedad de pruebas que existen, la sensibilidad de estas, etc. Tipos de reactivos: Sólidos (Etiqueta de un reactivo sólido). 16  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos Liofilizados (en polvo) no contiene agua. Puede conservarse duran- te un largo período de tiempo. Conservan sus propiedades físicas, químicas, biológicas y características organolépticas. Líquidos (Etiqueta de un reactivo líquido). Es el reactivo más fácil y rápido de usar, viene preparado para su uso directo. 17 Técnicas generales de laboratorio Disoluciones preparadas. Se pueden encontrar con diferentes concentraciones y disolventes. Con el paso del tiempo se pueden degradar y sus características organolépticas pueden cambiar. Los envases que contienen reactivos deben estar correctamente etiquetados: Nombre del reactivo Datos de referencia Fórmula química Ingredientes especiales Grado de pureza Fecha de envasado Fecha de caducidad Número de lote Condiciones de almacenamiento Clasificación como material peligroso (si es necesario) 18  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos Ejemplos de reactivos: NaOH 4% KOH 10% Azul de lactofenol Alcohol impotable Ácidos Bases Sales Detergentes Neutro y Alcalino Indicadores de PH Síntesis Orgánica. Soluciones Volumétricas y Titrisoles 19  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos Autoevaluación 1. ¿Debe contener un envase de un reactivo la fecha de caducidad y el grado de impureza? a. SI b. NO c. DEPENDE 2. ¿Cuánta cantidad de agua contienen los reactivos liofilizados? a. Según el tipo de reactivo contienen una cierta can- tidad de agua. b. No contienen agua. 3. ¿Qué técnicas de limpieza se utilizan cada vez más? a. Detergentes b. Técnicas de ultrasonido c. Una mezcla de agua con jabón. 4. ¿Qué métodos de desinfección existen? a. Mecánicos, físicos y químicos. b. Mecánicos, biológicos y químicos. c. Físicos y químicos. 5. ¿Cuál es la cabina de seguridad biológica que más seguridad proporciona? a. Cabina de seguridad biológica de clase I. b. Cabina de seguridad biológica de clase III. 21 Técnicas generales de laboratorio 6. ¿Es obligatoria la limpieza, desinfección y esteriliza- ción en el laboratorio? a. Sólo la limpieza. b. Sólo la limpieza y la esterilización. c. Sólo la desinfección. 7. ¿Es el agua un reactivo? a. Sí, pero apenas se usa en el laboratorio. b. Sí, de hecho, es el reactivo más común del labora- torio. c. No, sim embargo se emplea mucho en el laboratorio como disolvente universal. 8. ¿Deben calibrarse algunos instrumentos de laborato- rio? a. Sí. b. No. c. A veces. 9. ¿Cuáles son los materiales más resistentes a roturas? a. Materiales de porcelana b. Materiales de plástico. c. Materiales de vidrio borosilicato. 10. ¿Cómo clasificarías el autoclave? a. Material de extracción. b. Material de calor y frío. c. Material de medición de la temperatura. 22  1. Clasificación de materiales, equipos básicos y reactivos Soluciones 1. b 2. b 3. b 4. a 5. b 6. a 7. b 8. a 9. b 10. b 23