Re-Incubación de Indicadores Biológicos de Lectura por Fluorescencia PDF

Create a better future Re-incubación de Indicadores Biológicos de lectura por Fluorescencia: un error muy común Rev. 1 | Enero 2022 Durante la última década, la industria de los indicadores biológicos ha enfr...

Create a better future Re-incubación de Indicadores Biológicos de lectura por Fluorescencia: un error muy común Rev. 1 | Enero 2022 Durante la última década, la industria de los indicadores biológicos ha enfrentado nuevos desafíos, tales como la necesidad de una mayor velocidad de reprocesamiento de materiales reutilizables; el desarrollo de nuevos dispositivos e instrumentos médicos, la aparición de nuevas tecnologías para su reprocesamiento y la necesidad de indicadores adecuados para su control. Frente a estos nuevos desafíos, los fabricantes de controles de esterilización han invertido esfuerzos en el desarrollo de indicadores biológicos de lectura rápida, que se basan en la fluorescencia como método de detección temprana, reduciendo sustancialmente los tiempos necesarios para disponer nuevamente de instrumentos estériles. La fluorescencia es un fenómeno luminoso de muy corta duración, indetectable por el ojo humano, mediante el cual las sustancias con capacidad de fluorescer absorben energía, se “excitan” y posteriormente emiten luz, es decir, fluorescen (ver Figura 1). Cada molécula fluorescente es capaz de absorber y emitir energía con determinadas características, las cuales permiten estimular y detectar su presencia mediante filtros y sensores especiales (por ejemplo en la posición de lectura de una incubadora auto-lectora). Luz (fotones de alta energía) Absorbe Emite fotón fotón Luz (fotones de Estado Basal Excitación Emisión menor energía) Figura 1. Representación gráfica de lo que sucede con una molécula capaz de fluorescer al ser estimulada con energía adecuada. Terragene®, pionera en innovación tecnológica en control de infecciones, desarrolló indicadores biológicos basados en el sistema de fluorescencia cuando las esporas inoculadas en los mismos permanecen viables luego del proceso de esterilización, reduciendo significativamente los tiempos de incubación. El sistema de detección temprana por fluorescencia está basado en la actividad enzimática. Ésta proviene de una enzima (proteína con actividad intrínseca) que se encuentra en las esporas. Estas enzimas quedarán disponibles en el momento que las esporas tomen contacto con el medio de cultivo, se hidraten y germinen. En ese momento las enzimas comenzarán a actuar sobre el sustrato fluorescente que está disponible en el medio de cultivo. Lo que ocurre a partir de la unión entre el sustrato y la enzima va a determinar cómo se comporta el IB y esto está descripto por la cinética de la reacción. En otras palabras, la aparición, permanencia y desaparición de la fluorescencia dependen de la actividad enzimática. Fluorescencia Fase Fase Fase Fase Inicial Lineal saturación decaimiento ∆F=0 ∆F>0 ∆F=0 ∆F0). En este momento la autolectora realiza lecturas de fluorescencia durante el tiempo correspondiente al programa del IB o hasta detectar una diferencia entre las mismas, arrojando un resultado positivo. Durante la fase de saturación o estacionaria no hay actividad enzimática neta debido a que todas las enzimas están ocupadas con sustrato, por lo que no hay un aumento neto de la fluorescencia (ΔF=0). Si se incuba e intenta leer un IB en esta etapa de actividad enzimática del sistema, por ejemplo reincubando el IB, el resultado arrojado por la autolectora será negativo, debido a que el valor de referencia inicial de fluorescencia se encuentra en su valor máximo, por lo que la incubadora no va detectar diferencias de fluorescencia a lo largo de toda la incubación. El resultado será negativo aún cuando el indicador haya arrojado un resultado positivo durante su primera incubación (cuando el valor de referencia era el correspondiente a la fase inicial de la actividad enzimática). En la fase de decaimiento o inhibición (ΔF