Rod Mycobacterium: Diagnostika a Identifikace (PDF)

Rod Mycobacterium  Rod Mycobacterium Nejdůležitější zástupci z hlediska patogenity komplex M. tuberculosis tuberkulóza plic ( kostí, kloubů, ledvin, mozkových plen, kůže…) M. leprae lepra (forma lepromatózní, tuberkuloidní)  Rod Mycobac...

Rod Mycobacterium  Rod Mycobacterium Nejdůležitější zástupci z hlediska patogenity komplex M. tuberculosis tuberkulóza plic ( kostí, kloubů, ledvin, mozkových plen, kůže…) M. leprae lepra (forma lepromatózní, tuberkuloidní)  Rod Mycobacterium Nejdůležitější zástupci z hlediska patogenity tzv. atypická mykobakteria  komplex M. avium ‐ intracellulare  M. kansasii  M. xenopi  M. fortuitum  M. gordonae… oportunní patogeny mykobakteriózy  infekce plic, krční lymfadenitidy, kožní léze…  nejčastěji postiženi jedinci s vážnými poruchami imunity  Rod Mycobacterium Tuberkulóza plic tuberkul kaseifikace kaverna Langhansovy buňky  Rod Mycobacterium Tuberkulóza v orofaciální oblasti většinou sekundární infekce z plic nejčastěji jazyk, méně bukální sliznice a gingiva vřed s vyvýšenými okraji nebo rozpadající se uzlíky scrofulosis kaseosní krční lymfadenitida  dif. dg.: občasný výskyt saprofytických (M. phlei, M. smegmatis) a tzv. atypických mykobakterií na sliznici DÚ  Rod Mycobacterium Diagnostika Odběr materiálu sputum (2‐5 ml, širokohrdlá nádobka), indukované inhalace solného roztoku BAL (zejména u imunokompromitovaných osob) laryngeální výtěr (nízká citlivost, vysoké riziko infekce) žaludeční výplach moč likvor, pleurální exsudát, punktát, hnis stěry a výtěry menstruační krev stolice biopsie, pitevní materiál  okamžitý transport  uchovávání v chladničce  Rod Mycobacterium Diagnostika Mikroskopie barvení podle Ziehl‐Neelsena barvení fluorochromy (auramin, rhodamin)  acidorezistentni tyčinky (provazce, Muchova granula…)  Rod Mycobacterium Diagnostika Kultivace zpracování vzorku  dekontaminace průvodní mikroflóry (kyseliny, zásady, detergenty)  homogenizace (třepačka, mukolytika)  koncentrace (centrifugace)  inokulace  pevné půdy Löwenstein‐Jensenova půda Ogawova  tekuté půdy Šulova  inkubace 6 – 9 týdnů / 37 °C (kožní mykobakteriózy 30 °C)  Rod Mycobacterium Diagnostika Moderní metody detekce Rychlá kultivace v uzavřeném systému princip detekce projevů metabolismu mykobakterií při jejich růstu v tekutých kultivačních půdách  tvorba CO2  spotřeba O2  změna barvy indikátoru růstu Rod Mycobacterium Diagnostika  Rod Mycobacterium Diagnostika Molekulárně genetická detekce (DNA/RNA) Amplifikační metody (komerční soupravy)  amplifikace genu pro rRNA hybridizace se značenou DNA sondou detekce hybridů RNA‐DNA luminiscencí  amplifikace DNA PCR hybridizace se značenou rRNA sondou detekce hybridů DNA‐RNA ELISA  detekce DNA LCR amplifikace dvojice sond spojených ligasou detekce produktu fluorescencí  Rod Mycobacterium Identifikace Konvenční metody – screening odlišení komplexu M. tuberculosis od ostatních mykobakterií  mikromorfologie  morfologie kolonií v tekutých i na pevných půdách, pigmentace  Rod Mycobacterium Identifikace Konvenční metody – screening citlivost k antituberkulotikům (růst na půdách bez a s antituberkulotikem)  izonikotinhydrazid  streptomycin  pyrazinamid  ethambutol  rifampicin citlivost k hydrazidu kyseliny thiofenkarbonové biochemické testy  test tvorby niacinu  redukce nitrátů  Rod Mycobacterium Identifikace Konvenční metody – druhová diferenciace testy rezistence (k 5% NaCl, hydroxylaminu, p‐benzoátu sodnému) teplotní tolerance (30 – 45 °C) test fotochromogenity (pigmentace na světle) biochemické reakce  průkaz arylsulfatázy  průkaz kyselé fosfatázy  průkaz beta‐galaktosidázy  průkaz diaminooxidázy  průkaz acylamidáz  redukce železitých iontů  hydrolýza Tweenu 80  utilizace sacharidů  štěpení paraaminosalicylátu  Rod Mycobacterium Identifikace Nové metody – druhová diferenciace význam  zkrácení doby pro identifikaci druhů  finančně náročné  chromatografické metody (plynová, tenkovrstevná) analýza mykolových kyselin analýza metylesterů mastných kyselin analýza glykolipidů  molekulárně genetické metody štěpení DNA restrikčními endonukleázami hybridizace DNA : DNA nebo DNA : RNA