Microbiologia - Completo - Compresso PDF

I‭‬‭batteri‬ ‭I‬‭batteri‬‭s ono‬‭forme‬‭di‬‭v ita‬‭unicellulari‬‭di‬‭piccole‬‭dimensioni‬‭e‬‭i‬‭primi‬‭a‬‭c omparire‬‭furono‬‭gli‬ ‭archeobatteri.‬‭Da‬‭essi‬‭s i‬‭originarono‬‭tutte‬‭le‬‭altre‬‭forme‬‭di‬‭v ita‬‭in‬‭quanto‬‭evolvendosi‬‭s i‬ ‭formarono‬‭i‬‭m iceti,‬‭i‬‭protozoi,‬‭le‬‭piante,‬‭gli...

I‭‬‭batteri‬ ‭I‬‭batteri‬‭s ono‬‭forme‬‭di‬‭v ita‬‭unicellulari‬‭di‬‭piccole‬‭dimensioni‬‭e‬‭i‬‭primi‬‭a‬‭c omparire‬‭furono‬‭gli‬ ‭archeobatteri.‬‭Da‬‭essi‬‭s i‬‭originarono‬‭tutte‬‭le‬‭altre‬‭forme‬‭di‬‭v ita‬‭in‬‭quanto‬‭evolvendosi‬‭s i‬ ‭formarono‬‭i‬‭m iceti,‬‭i‬‭protozoi,‬‭le‬‭piante,‬‭gli‬‭animali‬‭e‬‭v ia‬‭dicendo.‬‭I‬‭v irus‬‭furono‬‭gli‬‭ultimi‬‭a‬ ‭c omparire,‬‭essi‬‭s ono‬‭organismi‬‭parassiti‬‭obbligati,‬‭ovvero‬‭organismi‬‭c apaci‬‭di‬‭riprodursi‬ ‭s olamente‬‭dopo‬‭aver‬‭infettato‬‭una‬‭c ellula‬‭ospite‬‭di‬‭c ui‬‭utilizzano‬‭i‬‭m eccanismi‬‭funzionali.‬ ‭ lassificazione‬‭in‬‭base‬‭alla‬‭forma‬ C ‭I‬‭batteri‬‭possono‬‭essere‬‭distinti‬‭in‬‭base‬‭alla‬‭forma‬‭delle‬‭c ellule:‬ ‭-‬ ‭I‬‭c occhi‬‭s ono‬‭s ferici,‬‭s emplici‬‭e‬‭s ono‬‭i‬‭più‬‭antichi.‬‭Essi‬‭s i‬‭aggregano‬‭per‬‭definire‬ ‭s pecifiche‬‭s pecie‬‭di‬‭batteri.‬‭Sono‬‭estremamente‬‭resistenti‬‭a‬‭s alinità,‬‭ph‬‭e‬ ‭temperatura.‬‭Possono‬‭aggregarsi‬‭fra‬‭di‬‭loro‬‭andando‬‭a‬‭formare:‬‭i‬‭diplococchi‬‭(coppie‬ ‭c he‬‭c ondividono‬‭una‬‭faccia‬‭più‬‭piana),‬‭gli‬‭s treptococchi‬‭(disposti‬‭a‬‭formare‬‭una‬ ‭c atenella)‬‭e‬‭gli‬‭s tafilococchi‬‭(disposti‬‭a‬‭formare‬‭dei‬‭grappoli).‬‭G li‬‭s trepto‬‭e‬‭gli‬‭s tafilo‬ ‭hanno‬‭diverse‬‭s pecie.‬ ‭-‬ ‭I‬‭bacilli‬‭s ono‬‭bastoncini‬‭allungati‬‭e‬‭s ono‬‭la‬‭s econda‬‭s pecie‬‭più‬‭diffusa,‬‭v ivono‬ ‭prevalentemente‬‭all’interno‬‭degli‬‭organismi‬‭v iventi,‬‭ad‬‭esempio‬‭all’interno‬‭del‬‭nostro‬ ‭intestino.‬‭Sono‬‭più‬‭propensi‬‭a‬‭c olonizzare‬‭rispetto‬‭ai‬‭c occhi.‬‭Possono‬‭aggregarsi‬‭fra‬ ‭loro‬‭a‬‭formare‬‭delle‬‭lunghe‬‭c atene,‬‭m a‬‭s ono‬‭particolarmente‬‭rari.‬ ‭-‬ ‭I‬‭c occobacilli‬‭s ono‬‭batteri‬‭c he‬‭presentano‬‭una‬‭forma‬‭intermedia‬‭alle‬‭due‬‭precedenti.‬ ‭-‬ ‭I‬‭v ibrioni‬‭hanno‬‭la‬‭forma‬‭di‬‭una‬‭v irgola‬‭e‬‭s ono‬‭principalmente‬‭patogeni‬‭e‬‭dotati‬‭di‬‭un‬ ‭flagello‬‭c he‬‭gli‬‭dona‬‭la‬‭m obilità‬‭.‬‭Un‬‭esempio‬‭è‬‭il‬‭batterio‬‭c he‬‭provoca‬‭il‬‭c olera.‬ ‭-‬ ‭G li‬‭s pirilli‬‭hanno‬‭una‬‭forma‬‭s imile‬‭ai‬‭bacilli‬‭m a‬‭c on‬‭delle‬‭c urvature‬‭c he‬‭fanno‬ ‭assumere‬‭alla‬‭c ellula‬‭una‬‭forma‬‭elicoidale.‬‭Sono‬‭organismi‬‭patogeni‬‭in‬‭particolare‬‭per‬ ‭m alattie‬‭s essuali‬‭c ome‬‭la‬‭s ifilide.‬‭Si‬‭possono‬‭trovare‬‭nel‬‭c orpo‬‭umano,‬‭in‬‭particolare‬ ‭nel‬‭tratto‬‭gastrointestinale,‬‭nella‬‭bocca‬‭e‬‭nella‬‭v agina.‬ ‭-‬ ‭I‬‭c orinebatteri‬‭s ono‬‭batteri‬‭piccoli‬‭a‬‭forma‬‭di‬‭bastoncino,‬‭dritta‬‭o‬‭c urva‬‭c he‬ ‭parassitano‬‭piante,‬‭animali‬‭e‬‭uomo‬‭c ompreso.‬‭Sono‬‭utilizzati‬‭industrialmente‬‭per‬‭la‬ ‭produzione‬‭di‬‭amminoacidi‬‭(es.‬‭glutammato)‬‭e‬‭dal‬‭punto‬‭di‬‭v ista‬‭m edico‬‭in‬‭quanto‬ ‭fanno‬‭parte‬‭della‬‭flora‬‭c ommensale‬‭(Agente‬‭patogeno‬‭rilevante‬‭è‬‭l’‬‭agente‬‭eziologico‬ ‭della‬‭difterite).‬ ‭1‬ ‭ olorazione‬‭di‬‭gram‬ C ‭Un‬‭tecnica‬‭c he‬‭può‬‭essere‬‭utilizzata‬‭per‬‭distinguere‬‭i‬‭diversi‬‭tipi‬‭di‬‭batteri‬‭è‬‭quella‬‭della‬ ‭c olorazione‬‭di‬‭G ram.‬‭Essa‬‭è‬‭una‬‭tecnica‬‭di‬‭c olorazione‬‭differenziale‬‭c he‬‭c onsente‬‭di‬ ‭dividere‬‭i‬‭batteri‬‭in‬‭G ram‬‭positivi‬‭e‬‭G ram‬‭negativi.‬‭Si‬‭differenziano‬‭in‬‭blu‬‭o‬‭rosso‬‭per‬‭poter‬ ‭risalire‬‭alla‬‭s pecie‬‭e‬‭alla‬‭patologia‬‭c he‬‭può‬‭dare.‬‭Tale‬‭tecnica‬‭s i‬‭effettua‬‭attraverso‬‭una‬‭s erie‬ ‭di‬‭passaggi:‬ ‭-‬ ‭Da‬‭un‬‭c ampione‬‭s i‬‭s tempera‬‭dell’acqua‬‭e‬‭la‬‭s i‬‭lascia‬‭evaporare‬‭in‬‭m odo‬‭c he‬‭le‬ ‭s trutture‬‭lipidiche‬‭aderiscono‬‭al‬‭v etrino.‬ ‭-‬ ‭Dopodiché‬‭s i‬‭usa‬‭il‬‭c ristal‬‭v ioletto‬‭per‬‭c irca‬‭un‬‭m inuto;‬‭dopo‬‭questa‬‭c olorazione‬‭tutti‬‭i‬ ‭batteri‬‭all’interno‬‭del‬‭c ampione‬‭(‬‭s ia‬‭gram‬‭positivi‬‭c he‬‭negativi)‬‭risulteranno‬‭c olorati‬‭di‬ ‭v iola.‬‭Si‬‭aggiunge‬‭poi‬‭della‬‭iodurata‬‭per‬‭m ordenzare‬‭il‬‭blu.‬ ‭-‬ ‭Si‬‭v a‬‭a‬‭decolorare‬‭c on‬‭dell’acetone‬‭o‬‭dell’alcool‬‭per‬‭10/15‬‭s ec‬‭in‬‭m odo‬‭c he‬‭i‬‭G ram‬ ‭negativi‬‭s i‬‭c olorano‬‭di‬‭bianco,‬‭m entre‬‭i‬‭G ram‬‭positivi‬‭rimangono‬‭c olorati‬‭di‬‭v iola‬‭in‬ ‭quanto‬‭l’alcol‬‭non‬‭è‬‭penetrato‬‭nella‬‭parete.‬‭Vediamo‬‭c he‬‭il‬‭diverso‬‭m odo‬‭c on‬‭c ui‬‭le‬ ‭due‬‭tipologie‬‭di‬‭batteri‬‭rispondono‬‭alla‬‭decolorazione‬‭è‬‭dovuto‬‭alla‬‭diversa‬‭s truttura‬ ‭della‬‭parete‬‭c ellulare‬‭dei‬‭G ram‬‭positivi‬‭e‬‭dei‬ ‭G ram‬‭negativi.‬ ‭-‬ ‭L'ultimo‬‭s tadio‬‭è‬‭l’aggiunta‬‭del‬‭rosso‬‭s afranina‬ ‭c he‬‭v a‬‭a‬‭c olorare‬‭i‬‭gram‬‭negativi‬‭di‬‭un‬‭rosso‬ ‭intenso,‬‭m entre‬‭i‬‭gram‬‭positivi‬‭non‬‭s ubiscono‬ ‭alcuna‬‭m odifica.‬ ‭ ram‬‭identificò‬‭c he‬‭i‬‭gram‬‭positivi‬‭s arebbero‬‭i‬‭più‬ G ‭resistenti‬‭c ome‬‭i‬‭batteri‬‭nell’aria‬‭m entre‬‭i‬‭negativi‬‭quelli‬ ‭ad‬‭esempio‬‭dell’intestino.‬‭I‬‭positivi‬‭s olitamente‬‭s ono‬ ‭c occhi,‬‭m entre‬‭i‬‭negativi‬‭s olitamente‬‭s ono‬‭bacilli.‬ ‭ truttura‬‭di‬‭una‬‭c ellula‬‭batterica‬ S ‭I‬‭batteri‬‭hanno‬‭una‬‭dimensione‬‭c he‬‭v a‬‭dagli‬‭0,5‬‭a‬‭3‬‭m icrometri.‬ ‭La‬‭c ellula‬‭batterica‬‭è‬‭procariotica‬‭al‬‭c ui‬‭interno‬‭è‬ ‭c ontenuto‬‭il‬‭c itoplasma‬‭dove‬‭s i‬‭trovano‬‭DNA,‬‭acqua‬ ‭(80%),‬‭RNA‬‭(di‬‭v ario‬‭tipo)‬‭e‬‭ribosomi‬‭(dove‬‭avviene‬‭la‬ ‭s intesi‬‭delle‬‭proteine).‬ ‭ ello‬‭s pecifico,‬‭il‬‭c itoplasma‬‭non‬‭è‬‭altro‬‭c he‬‭un‬‭gel‬ N ‭c olloidale‬‭c ostituito‬‭da‬‭acqua‬‭e‬‭da‬‭altre‬‭s ostanze‬‭s ia‬ ‭organiche‬‭(zuccheri,‬‭proteine)‬‭c he‬‭inorganiche‬‭(sali‬‭di‬ ‭c alcio‬‭e‬‭m agnesio).‬ ‭Il‬‭DNA‬‭(anche‬‭definito‬‭nucleoide),‬‭grazie‬‭all’enzima‬ ‭girasi,‬‭è‬‭generalmente‬‭s uper‬‭avvolto‬‭per‬‭poter‬‭essere‬‭c ontenuto‬‭nella‬‭c ellula‬‭ospite‬‭date‬‭le‬ ‭s ue‬‭grandi‬‭dimensioni.‬‭Esso‬‭è‬‭c ircolare‬‭c on‬‭un‬‭genoma‬‭aploide‬‭c he‬‭può‬‭essere‬‭trasferito‬ ‭tramite‬‭pilo‬‭s essuale.‬‭Non‬‭presenta‬‭quindi‬‭la‬‭m embrana‬‭nucleare.‬ ‭ a‬‭m embrana‬‭plasmatica‬‭ha‬‭il‬‭c ompito‬‭di‬‭s eparare‬‭il‬‭c itoplasma‬‭dall’ambiente‬‭esterno.‬‭Essa‬ L ‭è‬‭una‬‭s orta‬‭di‬‭m embrana‬‭protettiva‬‭c he‬‭racchiude‬‭tutto‬‭il‬‭c ontenuto‬‭c itoplasmatico‬‭e‬‭s volge‬ ‭la‬‭funzione‬‭di‬‭m antenere‬‭l’omeostasi‬‭(fattore‬‭particolarmente‬‭importante‬‭c he‬‭definisce‬‭la‬ ‭c apacità‬‭di‬‭autoregolazione‬‭degli‬‭esseri‬‭v iventi‬‭e‬‭c he‬‭m antiene‬‭c ostante‬‭l’ambiente‬‭interno‬ ‭degli‬‭organismi)‬‭all’interno‬‭della‬‭c ellula.‬ ‭2‬ I‭noltre,‬‭a‬‭livello‬‭della‬‭m embrana‬‭avvengono‬‭alcune‬‭reazioni‬‭fondamentali‬‭(tra‬‭c ui‬‭la‬ ‭respirazione)‬‭c he‬‭s ervono‬‭per‬‭fornire‬‭alla‬‭c ellula‬‭l’energia‬‭necessaria‬‭per‬‭s volgere‬ ‭determinate‬‭funzioni‬‭c ome‬‭il‬‭trasporto‬‭dei‬‭fluidi‬‭al‬‭s uo‬‭interno‬‭o‬‭il‬‭proprio‬‭m ovimento‬‭tramite‬ ‭pili‬‭e‬‭flagelli.‬ ‭Essa‬‭è‬‭formata‬‭da‬‭un‬‭doppio‬‭s trato‬ ‭fosfolipidico‬‭e‬‭da‬‭diverse‬‭proteine‬‭c on‬‭la‬ ‭funzione‬‭di‬‭c anale‬‭per‬‭il‬‭passaggio‬‭di‬ ‭m olecole‬‭attraverso‬‭la‬‭m embrana‬‭e‬‭fungono‬ ‭anche‬‭da‬‭recettori‬‭di‬‭s egnale‬‭a‬‭livello‬‭della‬ ‭m embrana.‬‭Non‬‭c ontiene‬‭s teroli.‬ ‭ l‬‭di‬‭s opra‬‭della‬‭m embrana‬‭plasmatica‬‭troviamo‬‭la‬‭parete‬‭batterica‬‭,‬‭ovvero‬‭una‬‭m aglia‬‭rigida‬ A ‭formata‬‭da‬‭NAM‬‭(acetilmuramico)‬‭NAG‬‭(acido‬‭glucosamina)‬‭alternati‬‭e‬‭c ollegati‬‭s aldamente‬ ‭fra‬‭loro.‬‭Inoltre‬‭s ono‬‭presenti‬‭le‬‭n-glicine‬‭c he‬‭c ollegano‬‭perpendicolarmente‬‭gli‬‭acidi‬ ‭m uramici.‬ I‭n‬‭generale,‬‭la‬‭parete‬‭s erve‬‭a‬‭dare‬‭forma,‬‭rigidità,‬‭a‬‭isolare‬‭il‬‭batterio‬‭da‬‭tutti‬‭gli‬‭agenti‬‭esterni‬ ‭e‬‭per‬‭permettere‬‭l’ancoraggio‬‭ad‬‭eventuali‬‭flagelli.‬ ‭La‬‭parete‬‭non‬‭s i‬‭deve‬‭m ai‬‭bucare,‬‭nemmeno‬‭durante‬‭la‬‭s cissione,‬‭perché,‬‭avendo‬‭un‬ ‭ambiente‬‭ipersalino‬‭all’interno,‬‭c on‬‭una‬‭lacerazione‬‭della‬‭parete‬‭entrerebbe‬‭acqua‬‭e‬‭farebbe‬ ‭s coppiare‬‭il‬‭batterio‬‭s tesso.‬ ‭ a‬‭parete‬‭è‬‭quella‬‭s truttura‬‭c he‬‭differenzia‬‭i‬‭batteri‬‭G ram‬‭positivi‬‭da‬‭quelli‬‭negativi.‬ L ‭I‬‭gram‬‭negativi‬‭s ono‬‭forme‬‭batteriche‬‭più‬‭evolute‬‭rispetto‬‭a‬‭quelli‬‭positivi‬‭in‬‭quanto‬‭hanno‬ ‭c olonizzato‬‭il‬‭c orpo‬‭umano‬‭formando‬‭ad‬‭esempio‬‭la‬‭flora‬‭intestinale.‬‭Essendo‬‭all'interno‬‭del‬ ‭c orpo‬‭umano‬‭i‬‭fattori‬‭esterni‬‭rimangono‬‭s tabili,‬‭m a‬‭devono‬‭difendersi‬‭dal‬‭s istema‬ ‭immunitario.‬‭Inoltre‬‭al‬‭s uo‬‭esterno‬‭ha‬‭una‬‭m embrana‬‭esterna‬‭dotata‬‭di‬‭porine‬‭c he‬ ‭permettono‬‭il‬‭passaggio‬‭di‬‭m etaboliti‬‭e‬‭c ataboliti‬‭s elezionati.‬‭Ecco‬‭perché‬‭s ono‬‭più‬‭resistenti‬ ‭ad‬‭antibiotici.‬‭Inserite‬‭nella‬‭m embrana‬‭esterna‬‭s ono‬‭s ituate‬‭delle‬‭endotossine‬‭o‬ ‭lipopolisaccaridi‬‭c he‬‭liberano‬‭tossine‬‭in‬‭c aso‬‭di‬‭m inaccia‬‭di‬‭m orte.‬ ‭In‬‭s intesi,‬‭la‬‭parete‬‭dei‬‭G ram‬‭positivi‬‭è‬‭m onostratificata‬‭e‬‭s pessa,‬‭m entre‬‭quella‬‭dei‬‭G ram‬ ‭negativi‬‭è‬‭rappresentata‬‭da‬‭un‬‭doppio‬‭foglietto‬‭s ottile,‬‭uno‬‭s pazio‬‭periplasmico‬‭e‬‭un’ulteriore‬ ‭parete‬‭esterna.‬ ‭ on‬‭presentano‬‭m itocondri,‬‭c orpi‬‭del‬‭golgi‬‭e‬‭RE.‬ N ‭I‬‭ribosomi‬‭hanno‬‭una‬‭grandezza‬‭di‬ ‭70‬‭s ‬‭invece‬‭c he‬‭80,‬‭infatti‬‭s ono‬‭più‬‭piccoli.‬ ‭ a‬‭c apsula‬‭,‬‭c omposta‬‭di‬‭acido‬‭ialuronico,‬‭è‬‭un‬‭m eccanismo‬‭di‬‭evasione‬‭in‬‭quanto‬‭permette‬ L ‭ai‬‭batteri‬‭di‬‭proteggersi‬‭dai‬‭fagociti‬‭ovvero‬‭c ellule‬‭c apaci‬‭di‬‭inglobarli‬‭e‬‭ucciderli.‬‭Tramite‬‭la‬ ‭c apsula,‬‭i‬‭fagociti‬‭non‬‭riconoscono‬‭i‬‭batteri,‬‭in‬‭quanto‬‭v engono‬‭s cambiati‬‭per‬‭tessuto‬ ‭c onnettivo‬‭pur‬‭fuoriuscendo‬‭da‬‭essi‬‭pili‬‭e‬‭flagelli.‬‭Le‬‭c ellule‬‭attaccate‬‭dai‬‭batteri‬‭producono‬ ‭c hemochine‬‭o‬‭c itochine‬‭c he‬‭attivano‬‭il‬‭s istema‬‭immunitario‬‭e‬‭quindi‬‭richiamano‬‭i‬‭fagociti.‬ ‭3‬ ‭ ovimento‬ M ‭Il‬‭m ovimento‬‭avviene‬‭s olo‬‭grazie‬‭a‬‭determinate‬‭s trutture,‬‭s e‬‭queste‬‭non‬‭fossero‬‭presenti‬‭il‬ ‭batterio‬‭rimane‬‭fermo.‬‭Nello‬‭s pecifico‬‭il‬‭flagello‬‭permette‬‭il‬‭m ovimento‬‭nei‬‭liquidi.‬‭Esso‬‭è‬ ‭c omposto‬‭da‬‭flagellina‬‭ovvero‬‭una‬‭proteina‬‭c ontrattile‬‭c he‬‭grazie‬‭all’ATP‬‭generato‬‭nella‬ ‭m embrana‬‭c ellulare‬‭permette‬‭ad‬‭esso‬‭di‬‭dar‬‭m otilità‬‭al‬‭batterio.‬ ‭I‬‭pili‬‭e‬‭le‬‭fimbrie‬‭permettono‬‭il‬‭m ovimento‬‭nelle‬‭parti‬‭prive‬‭di‬‭liquidi‬‭c ome‬‭ad‬‭esempio‬‭lungo‬‭le‬ ‭pareti‬‭delle‬‭v ie‬‭urinarie,‬‭in‬‭quanto‬‭c ontraendosi‬‭permettono‬‭al‬‭batterio‬‭di‬ ‭procedere.‬‭Le‬‭fimbrie‬‭inoltre‬‭permettono‬‭l’aggancio‬‭alle‬‭c ellule‬‭epiteliali.‬ ‭ iproduzione‬ R ‭Si‬‭riproducono‬‭per‬‭v ia‬‭asessuata‬‭tramite‬‭s cissione‬‭binaria.‬‭Dopo‬‭c he‬‭il‬‭DNA‬ ‭s i‬‭è‬‭replicato,‬‭la‬‭c ellula‬‭inizia‬‭ad‬‭allungarsi‬‭e‬‭a‬‭formare‬‭un‬‭s etto‬‭nel‬‭punto‬‭in‬ ‭c ui‬‭andrà‬‭poi‬‭a‬‭dividersi.‬‭Q uando‬‭quest’ultimo‬‭passaggio‬‭avviene,‬‭s i‬‭v anno‬‭a‬ ‭riformare‬‭le‬‭pareti‬‭e‬‭s i‬‭ottengono‬‭c osì‬‭due‬‭c ellule‬‭divise‬‭perfettamente‬‭a‬‭m età.‬ ‭Se‬‭avviene‬‭la‬‭produzione‬‭di‬‭s pore‬‭la‬‭s eparazione‬‭avverrà‬‭in‬‭m odo‬ ‭asimmetrico.‬ ‭ icobatteri‬ M ‭I‬‭m icobatteri‬‭s ono‬‭ancora‬‭più‬‭resistenti‬‭e‬‭s elettivi,‬‭ricchi‬‭di‬‭lipidi‬‭(come‬‭i‬‭batteri‬‭della‬ ‭tubercolosi).‬‭Essi‬‭s ono‬‭delle‬‭s pecie‬‭batteriche‬‭c he‬‭non‬‭possono‬‭essere‬‭c olorate‬‭c on‬‭la‬ ‭c olorazione‬‭di‬‭G ram‬‭poiché‬‭la‬‭loro‬‭parete‬‭presenta‬‭delle‬‭c aratteristiche‬‭tipiche‬‭s ia‬‭dei‬‭G ram‬ ‭positivi‬‭c he‬‭dei‬‭G ram‬‭negativi.‬‭In‬‭particolare,‬‭questi‬‭batteri‬‭s ono‬‭particolarmente‬‭resistenti‬‭ad‬ ‭acidi‬‭e‬‭alcoli;‬‭questo‬‭è‬‭dovuto‬‭alla‬‭c omposizione‬‭della‬‭loro‬‭parete.‬‭Vediamo‬‭infatti‬‭c he‬‭la‬ ‭parete‬‭c ellulare‬‭dei‬‭m icobatteri‬‭è‬‭c ostituita‬‭prevalentemente‬‭da‬‭c ere‬‭(anche‬‭dette‬‭acidi‬ ‭m icolici)‬‭e‬‭peptidoglicani.‬‭Inoltre,‬‭s ulla‬‭parte‬‭più‬‭s uperficiale‬‭della‬‭parete‬‭s ono‬‭poi‬‭presenti‬ ‭anche‬‭gli‬‭acidi‬‭glutamminici‬‭c on‬‭le‬‭porine.‬‭Esiste‬‭perciò‬‭una‬‭particolare‬‭c olorazione‬‭c apace‬ ‭di‬‭differenziare‬‭questi‬‭batteri‬‭dagli‬‭altri‬‭definita‬‭Ziehl-Neelsen.‬ ‭ olorazione‬‭Ziehl-Neelsen‬ C ‭Considerando‬‭c he‬‭i‬‭m alati‬‭di‬‭tubercolosi‬‭producono‬‭m uco‬ ‭s pesso‬‭c on‬‭presenza‬‭di‬‭s angue,‬‭s i‬‭prende‬‭un‬‭c ampione‬‭c he‬ ‭prende‬‭il‬‭nome‬‭di‬‭espettorato.‬ ‭Q uesta‬‭c olorazione‬‭v iene‬‭effettuata‬‭c on‬‭un‬‭trattamento‬‭a‬ ‭c alore‬‭e‬‭s i‬‭c ompone‬‭di‬‭v arie‬‭fasi:‬ ‭-‬ ‭L’espettorato‬‭v iene‬‭fluidificato‬‭tramite‬‭idrossido‬‭di‬ ‭potassio,‬‭s i‬‭posizione‬‭s u‬‭v etrino‬‭per‬‭farlo‬‭asciugare‬‭e‬ ‭s i‬‭posiziona‬‭la‬‭c arbolfucsina‬‭(rosso)‬‭c he‬‭penetra‬‭nelle‬ ‭c ere‬‭del‬‭m icobatterio.Tramite‬‭una‬‭pinza‬‭c on‬‭m anici‬ ‭isolati‬‭s i‬‭riscalda‬‭s u‬‭bunsen‬‭per‬‭far‬‭s ciogliere‬‭le‬‭c ere‬ ‭ed‬‭andare‬‭c osì‬‭a‬‭c olorare‬‭il‬‭batterio.‬‭Q uando‬‭s i‬ ‭percepiscono‬‭dei‬‭fumi‬‭le‬‭c ere‬‭s i‬‭s ono‬‭allentate‬‭e‬‭una‬ ‭v olta‬‭raffreddato‬‭il‬‭c ampione,‬‭il‬‭c olore‬‭rimarrà‬‭intrappolato‬‭all’interno‬‭del‬‭m icobatterio.‬ ‭-‬ ‭Si‬‭v a‬‭poi‬‭ad‬‭effettuare‬‭una‬‭decolorazione‬‭c on‬‭alcool‬‭o‬‭acido‬‭c loridrico,‬‭in‬‭s eguito‬‭alla‬ ‭quale‬‭i‬‭m icobatteri‬‭rimangono‬‭c olorati‬‭m entre‬‭gli‬‭altri‬‭batteri‬‭s i‬‭decolorano.‬ ‭-‬ ‭A‬‭questo‬‭punto‬‭s i‬‭effettua‬‭una‬‭c olorazione‬‭di‬‭c ontrasto‬‭c on‬‭blu‬‭di‬‭m etilene,‬‭la‬‭quale‬ ‭andrà‬‭a‬‭c olorare‬‭s olo‬‭i‬‭non‬‭m icobatteri‬‭facendo‬‭c osì‬‭risaltare‬‭il‬‭c olore‬‭rosso‬‭dei‬ ‭m icobatteri.‬ ‭4‬  ‭ e‬‭spore‬ L ‭Tutte‬‭le‬‭c ellule‬‭batteriche‬‭possono‬‭andare‬‭incontro‬‭a‬‭differenziamento,‬‭ovvero‬‭perdono‬ ‭alcune‬‭c aratteristiche‬‭per‬‭diventare‬‭una‬‭nuova‬‭forma‬‭più‬‭s pecializzata.‬‭Nei‬‭pluricellulari‬‭è‬‭di‬ ‭tipo‬‭irreversibile‬‭c ome‬‭nelle‬‭s taminali‬‭totipotenti,‬‭m entre‬‭negli‬‭unicellulari‬‭il‬‭processo‬‭in‬‭alcuni‬ ‭c asi‬‭è‬‭reversibile‬‭c ome‬‭nel‬‭c aso‬‭di‬‭una‬‭particolare‬‭c ategoria‬‭di‬‭batteri‬‭c he‬‭possono‬‭dare‬ ‭origine‬‭a‬‭s pore.‬ ‭ a‬‭s pora‬‭è‬‭la‬‭trasformazione‬‭di‬‭un‬‭batterio‬‭c apace‬‭di‬‭s porulare‬‭v olta‬‭alla‬‭difesa‬‭della‬‭c ellula‬ L ‭v egetativa‬‭ed‬‭è‬‭quindi‬‭più‬‭resistente‬‭(durata‬‭di‬‭oltre‬‭30‬‭anni).‬ ‭Esistono‬‭due‬‭tipologie‬‭di‬‭s pore:‬ ‭-‬ ‭Esospore‬‭permettono‬‭al‬‭batterio‬‭di‬‭entrare‬‭in‬‭uno‬‭s tato‬‭di‬‭quiescenza‬‭e‬‭avviene‬ ‭s olitamente‬‭nei‬‭m iceti‬‭(funghi).‬‭Inoltre,‬‭le‬‭esospore‬‭s ono‬‭più‬‭resistenti‬‭all’ambiente‬ ‭esterno‬‭rispetto‬‭alla‬‭c ellula‬‭v egetativa‬‭dalla‬‭quale‬‭hanno‬‭avuto‬‭origine,‬‭m a‬‭allo‬‭s tesso‬ ‭tempo‬‭s ono‬‭m olto‬‭m eno‬‭resistenti‬‭rispetto‬‭alle‬‭endospore.‬ ‭-‬ ‭Endospore‬‭s i‬‭formano‬‭all’interno‬‭della‬‭c ellula‬‭v egetativa‬‭(anche‬‭detta‬‭s porangio).‬‭È‬ ‭importante‬‭s apere‬‭c he‬‭la‬‭c ellula‬‭v egetativa‬‭e‬‭la‬‭endospora‬‭c he‬‭s i‬‭c rea‬‭al‬‭s uo‬‭interno‬ ‭s ubiscono‬‭dei‬‭destini‬‭c ompletamente‬‭differenti;‬‭v ediamo‬‭infatti‬‭c he‬‭la‬‭c ellula‬ ‭v egetativa‬‭v a‬‭incontro‬‭a‬‭m orte‬‭e‬‭v iene‬‭lisata‬‭liberando‬‭la‬‭s pora‬‭formatasi‬‭al‬‭s uo‬ ‭interno,‬‭m entre‬‭la‬‭s pora‬‭v iene‬‭s emplicemente‬‭diffusa‬‭nell’ambiente.‬ ‭ ostituenti‬ C ‭Una‬‭s pora‬‭è‬‭di‬‭m inor‬‭dimensione‬‭rispetto‬‭alla‬‭m adre‬‭da‬‭0,5‬‭a‬‭1‬‭m icron.‬‭Effettuando‬‭una‬ ‭s cansione‬‭al‬‭m icroscopio,‬‭è‬‭possibile‬‭osservare:‬ ‭-‬ ‭c ore‬‭:‬‭c ostituisce‬‭la‬‭parte‬‭c entrale‬‭e‬‭c ontiene‬‭il‬‭c itoplasma‬‭disidratato.‬‭Il‬‭c romosoma‬‭è‬ ‭rivestito‬‭dalle‬‭proteine‬‭s olubili‬‭SASP,‬‭dall’acido‬‭dipicolinico,‬‭dal‬‭dipicolinato‬‭di‬‭c alcio‬ ‭(difesa‬‭della‬‭s pora‬‭da‬‭attacchi‬‭esterni),‬‭da‬‭enzimi‬‭e‬‭dall’rRNA.‬ ‭-‬ ‭m embrana‬‭plasmatica‬‭:‬‭s i‬‭trova‬‭all’esterno‬‭della‬‭s pora‬‭e‬‭v iene‬‭acquisita‬‭dalla‬‭c ellula‬ ‭m adre.‬ ‭-‬ ‭c orteccia‬‭della‬‭parete‬‭e‬‭s porale‬ ‭-‬ ‭m embrana‬‭esterna‬ ‭-‬ ‭tunica‬‭s porale‬‭è‬‭c ostituita‬‭da‬‭un‬‭foglietto‬‭interno‬‭e‬‭uno‬‭esterno.‬ ‭-‬ ‭involucri‬‭s porali:‬‭dall’interno‬‭v erso‬‭l’esterno‬‭troviamo‬‭la‬‭c orteccia‬ ‭(costituita‬‭da‬‭dipicolinato‬‭di‬‭c alcio‬‭e‬‭peptidoglicano),‬‭il‬‭c oats‬ ‭(costituito‬‭da‬‭lipidi‬‭e‬‭proteine)‬‭e‬‭l’esosporio‬‭(involucro‬‭ulteriore‬ ‭c he‬‭s i‬‭trova‬‭s olo‬‭in‬‭alcune‬‭s pore‬‭ed‬‭è‬‭formato‬‭da‬‭uno‬‭s trato‬‭fosfo‬ ‭lipoproteico).‬ ‭ eneralmente,‬‭le‬‭s pore‬‭s ono‬‭più‬‭piccole‬‭della‬‭c ellula‬‭m adre.‬ G ‭La‬‭s pora‬‭può‬‭essere‬‭localizzata‬‭in‬‭diverse‬‭posizioni‬‭all’interno‬‭dello‬‭s porangio:‬ ‭-‬ ‭posizione‬‭c entrale‬ ‭-‬ ‭posizione‬‭s ubterminale:‬‭la‬‭s pora‬‭s i‬‭s ta‬‭m uovendo‬‭v erso‬‭l’apice‬‭e‬‭s i‬‭s ta‬‭preparando‬‭a‬ ‭lasciare‬‭lo‬‭s porangio‬ ‭-‬ ‭posizione‬‭terminale:‬‭la‬‭s pora‬‭s i‬‭localizza‬‭a‬‭livello‬‭del‬‭polo‬‭del‬‭batterio.‬ ‭5‬ ‭ olorazione‬‭di‬‭Schaeffer-Fulton‬ C ‭È‬‭importante‬‭s apere‬‭c he‬‭per‬‭questa‬‭c olorazione‬‭è‬‭necessario‬‭l’ausilio‬‭del‬‭c alore;‬‭nello‬ ‭s pecifico‬‭v iene‬‭utilizzato‬‭uno‬‭s trumento‬‭c he‬‭permette‬‭di‬‭s caldare‬‭l’acqua‬‭posta‬‭all’interno‬‭di‬ ‭un‬‭becher.‬‭Vediamo‬‭c he‬‭una‬‭v olta‬‭portata‬‭ad‬‭ebollizione‬‭l’acqua,‬‭il‬‭v etrino‬‭v iene‬‭immerso‬ ‭permettendo‬‭al‬‭v apore‬‭di‬‭far‬‭penetrare‬‭il‬‭v erde‬‭di‬‭m alachite.‬ ‭A‬‭questo‬‭punto,‬‭v iene‬‭effettuata‬‭una‬‭decolorazione‬‭c on‬‭acqua‬ ‭grazie‬‭alla‬‭quale‬‭s arà‬‭possibile‬‭osservare‬‭le‬‭s pore‬‭c olorate‬‭di‬ ‭v erde‬‭e‬‭i‬‭batteri‬‭decolorati.‬‭Successivamente,‬‭avviene‬‭una‬‭c ontro‬ ‭c olorazione‬‭c on‬‭rosso‬‭s afranina‬‭in‬‭m odo‬‭da‬‭ottenere‬‭le‬‭endospore‬ ‭c olorate‬‭di‬‭v erde‬‭e‬‭i‬‭batteri‬‭c olorati‬‭di‬‭rosso.‬‭Le‬‭s pore‬‭s i‬‭possono‬ ‭quindi‬‭v isualizzare‬‭al‬‭m icroscopio‬‭grazie‬‭alla‬‭presenza‬‭della‬ ‭tunica,‬‭in‬‭c ontrasto‬‭di‬‭fase‬‭s i‬‭osserva‬‭infatti‬‭qualcosa‬‭di‬ ‭c atarifrangente.‬ ‭La‬‭c ellula‬‭v egetativa‬‭può‬‭andare‬‭incontro‬‭a‬‭2‬‭diversi‬‭c icli:‬‭c iclo‬‭v egetativo‬‭o‬‭s porulazione.‬ I‭l‬‭c iclo‬‭v egetativo‬ ‭Il‬‭c iclo‬‭v egetativo‬‭c orrisponde‬‭ad‬‭una‬‭normale‬‭divisione‬‭c ellulare‬‭in‬‭c ui,‬‭tramite‬‭s cissione‬ ‭binaria,‬‭la‬‭c ellula‬‭m adre‬‭s i‬‭divide‬‭in‬‭due‬‭c ellule‬‭figlie‬‭perfettamente‬‭s immetriche,‬‭grazie‬‭alla‬ ‭formazione‬‭del‬‭s etto.‬‭Inoltre,‬‭in‬‭questo‬‭c aso,‬‭il‬‭DNA‬‭v a‬‭incontro‬‭a‬‭replicazione‬‭in‬‭m odo‬‭da‬ ‭ottenere‬‭due‬‭m olecole‬‭identiche‬‭e‬‭la‬‭s egregazione‬‭dei‬‭c romosomi‬‭avviene‬‭prima‬‭della‬ ‭formazione‬‭del‬‭s etto.‬‭Durante‬‭un‬‭normale‬‭c iclo‬‭v egetativo‬‭s i‬‭ottengono‬‭quindi‬‭due‬‭c ellule‬ ‭figlie‬‭identiche‬‭alla‬‭c ellula‬‭m adre.‬ I‭n‬‭v itro‬‭la‬‭c rescita‬‭batterica‬‭ha‬‭un‬‭inizio‬‭di‬‭fase‬‭di‬‭adattamento,‬‭dopodiché‬‭s i‬‭ha‬‭la‬‭fase‬ ‭esponenziale‬‭nella‬‭quale‬‭i‬‭batteri‬‭iniziano‬‭a‬‭replicarsi‬‭s fruttando‬‭le‬‭s ostanze‬‭nutritive‬‭presenti‬ ‭in‬‭c ultura.‬‭Nel‬‭m omento‬‭in‬‭c ui‬‭c i‬‭s ono‬‭m olti‬‭c ataboliti‬‭e‬‭le‬‭s ostanze‬‭iniziano‬‭a‬‭s carseggiare,‬‭il‬ ‭batterio‬‭m uore,‬‭s e‬‭il‬‭batterio‬‭è‬‭s porigeno‬‭s i‬‭innesca‬‭il‬‭processo‬‭di‬‭s porulazione.‬ ‭ a‬‭s porulazione‬ L ‭La‬‭s porulazione‬‭s i‬‭innesca‬‭nel‬‭m omento‬‭in‬‭c ui‬‭il‬‭batterio,‬‭grazie‬‭ad‬‭alcune‬‭m olecole‬‭c apaci‬ ‭di‬‭c arpire‬‭le‬‭c ondizioni,‬‭c apta‬‭c he‬‭le‬‭c ondizioni‬‭esterne‬‭s iano‬‭estreme‬‭o‬‭pericolose‬‭per‬‭il‬ ‭batterio‬‭s tesso.‬‭Non‬‭tutti‬‭i‬‭batteri‬‭possiedono‬‭la‬‭c apacità‬‭di‬‭s porulare;‬‭i‬‭principali‬‭in‬‭grado‬‭di‬ ‭s volgere‬‭questo‬‭processo‬‭s ono‬‭principalmente‬‭i‬‭gram‬‭positivi‬‭c ome‬‭il‬‭Bacillus‬‭Subtilis‬‭ed‬‭il‬ ‭Clostridium‬‭tetani‬‭(legato‬‭al‬‭v accino‬‭antitetanico).‬ ‭6‬ ‭La‬‭s porulazione‬‭avviene‬‭in‬‭più‬‭fasi:‬ ‭-‬ ‭Divisione‬‭asimmetrica‬‭della‬‭c ellula‬‭:‬‭formazione‬‭di‬‭un‬‭s etto‬‭asimmetrico‬‭c on‬‭un‬ ‭m aggior‬‭s pazio‬‭nella‬‭c ellula‬‭m adre‬‭e‬‭m inore‬‭nella‬‭prespora.‬‭Prima‬‭della‬‭formazione‬ ‭definitiva‬‭del‬‭s etto,‬‭avviene‬‭la‬‭replicazione‬‭del‬‭DNA,‬‭m entre‬‭la‬‭s egregazione‬‭dei‬ ‭c romosomi‬‭s i‬‭v erifica‬‭s uccessivamente‬‭alla‬‭formazione‬‭del‬‭s etto‬‭in‬‭quanto‬‭il‬‭DNA‬ ‭v iene‬‭trasmesso‬‭tramite‬‭il‬‭s etto.‬ ‭-‬ ‭Avvolgimento‬‭(engulfment)‬‭:‬‭la‬‭c ellula‬‭m adre‬‭c omincia‬‭ad‬‭espandersi‬‭e‬‭v a‬‭c osì‬‭ad‬ ‭inglobare‬‭interamente‬‭la‬‭prespora.‬‭Rompendosi‬‭il‬‭s etto,‬‭il‬‭c itoplasma‬‭della‬‭s pora‬ ‭inizia‬‭a‬‭espandersi,‬‭la‬‭m embrana‬‭s arà‬‭uguale‬‭alla‬‭c ellula‬‭m adre‬‭m a‬‭c on‬‭polarità‬ ‭opposta‬‭e‬‭quindi‬‭la‬‭s pora‬‭v iene‬‭rilasciata‬‭nello‬‭s tesso‬‭ambiente‬‭della‬‭c ellula‬‭m adre.‬ ‭Una‬‭v olta‬‭rilasciata‬‭nell’ambiente,‬‭la‬‭s pora‬‭è‬‭s oggetta‬‭alla‬‭formazione‬‭di‬‭un‬ ‭rivestimento,‬‭il‬‭quale‬‭è‬‭c ostituito‬‭da‬‭peptidoglicani.‬ ‭-‬ ‭Late‬‭s porulation‬‭:‬‭durante‬‭la‬‭formazione‬‭del‬‭rivestimento‬‭v iene‬‭accumulato‬‭l’acido‬ ‭dipicolinico‬‭nel‬‭c itoplasma‬‭c he‬‭porta‬‭alla‬‭disidratazione‬‭di‬‭esso‬‭dovuto‬‭all’alta‬ ‭c oncentrazione‬‭di‬‭c alcio.‬‭Esso‬‭s i‬‭forma‬‭a‬‭livello‬‭della‬‭c ellula‬‭m adre‬‭e‬‭s i‬‭porta‬ ‭all’interno‬‭della‬‭s pora‬‭dove‬‭andrà‬‭a‬‭formare‬‭il‬‭dipicolinato‬‭di‬‭c alcio,‬‭il‬‭quale‬ ‭c ontribuisce‬‭a‬‭c onferire‬‭termoresistenza.‬‭Iniziano‬‭a‬‭c odificarsi‬‭le‬‭proteine‬‭s olubili‬ ‭SASP‬‭c on‬‭lo‬‭s copo‬‭di‬‭proteggere‬‭dalle‬‭radiazioni‬‭ultraviolette.‬‭A‬‭questo‬‭punto‬‭s i‬ ‭innescano‬‭tutti‬‭i‬‭m eccanismi‬‭finali‬‭c he‬‭permettono‬‭la‬‭formazione‬‭dei‬‭rivestimenti‬‭più‬ ‭esterni‬‭ovvero‬‭la‬‭tunica‬‭c he‬‭c onferisce‬‭resistenza‬‭agli‬‭agenti‬‭c himici,‬‭formata‬‭da‬‭oltre‬ ‭50‬‭proteine‬‭e‬‭c ostituita‬‭da‬‭due‬‭s trati:‬‭pluristratificato‬‭lamellare‬‭e‬‭uno‬‭più‬‭denso.‬ ‭-‬ ‭Lisi‬‭della‬‭c ellula‬‭m adre:‬‭una‬‭v olta‬‭pronta,‬‭s i‬‭innescano‬‭tutta‬‭una‬‭s erie‬‭di‬‭c ambiamenti‬ ‭m orfologici‬‭c he‬‭portano‬‭lentamente‬‭alla‬‭lisi‬‭della‬‭c ellula‬‭m adre.‬‭È‬‭proprio‬‭in‬‭questo‬ ‭m omento‬‭c he‬‭la‬‭s pora‬‭v iene‬‭rilasciata‬‭definitivamente;‬‭il‬‭rilascio‬‭della‬‭s pora‬ ‭nell’ambiente‬‭esterno‬‭avviene‬‭in‬‭s eguito‬‭a‬‭m orte‬‭della‬‭c ellula‬‭m adre.‬ ‭7‬ ‭ a‬‭germinazione‬ L ‭Una‬‭v olta‬‭s tabilizzate‬‭nuovamente‬‭le‬‭c ondizioni,‬‭la‬‭s pora‬‭reverte‬‭il‬‭processo‬‭di‬‭s porulazione‬ ‭e‬‭s i‬‭ha‬‭la‬‭germinazione‬‭c he‬‭prevede‬‭il‬‭ritorno‬‭di‬‭una‬‭s pora‬‭batterica‬‭alla‬‭s ua‬‭forma‬ ‭v egetativa.‬ ‭La‬‭germinazione‬‭s i‬‭s volge‬‭in‬‭3‬‭fasi:‬ ‭-‬ ‭Fase‬‭di‬‭attivazione:‬‭la‬‭s pora‬‭recepisce‬‭tramite‬‭s ensori‬‭le‬‭c ondizioni‬‭non‬‭più‬‭ostili.‬ ‭-‬ ‭Fase‬‭di‬‭germinazione:‬‭s i‬‭ha‬‭il‬‭rilascio‬‭di‬‭c ationi‬‭c ompreso‬‭di‬‭c alcio‬‭permettendo‬‭c osì‬ ‭la‬‭reidratazione‬‭della‬‭c ellula.‬‭Successivamente‬‭la‬‭c orteccia,‬‭la‬‭tunica,‬‭le‬‭SASP‬‭e‬‭tutti‬ ‭gli‬‭involucri‬‭fondamentali‬‭per‬‭la‬‭resistenza‬‭s i‬‭lisano‬‭e‬‭il‬‭c ore‬‭può‬‭diffondersi‬ ‭idratandosi‬‭s empre‬‭più.‬‭Di‬‭c onseguenza‬‭la‬‭s pora‬‭inizia‬‭a‬‭riprendere‬‭le‬‭s ue‬‭normali‬ ‭attività‬‭m etaboliche.‬‭Nello‬‭s pecifico,‬‭v ediamo‬‭c he‬‭essa‬‭perde‬‭c ompletamente‬‭il‬ ‭rivestimento,‬‭inizia‬‭a‬‭s intetizzare‬‭le‬‭m acromolecole‬‭necessarie‬‭per‬‭la‬‭s opravvivenza‬ ‭e‬‭ritorna‬‭alla‬‭fase‬‭v egetativa.‬ ‭-‬ ‭Fase‬‭di‬‭esocrescita‬ ‭.B.‬‭la‬‭s porulazione‬‭è‬‭un‬‭processo‬‭c he‬‭ha‬‭una‬‭durata‬‭di‬‭c irca‬‭8‬‭ore,‬‭m entre‬‭la‬‭germinazione‬ N ‭s i‬‭avvia‬‭in‬‭c irca‬‭15‬‭m inuti‬‭e‬‭in‬‭1‬‭ora‬‭arriva‬‭già‬‭alle‬‭fasi‬‭terminali.‬ ‭ ttivazione‬‭dei‬‭geni‬ A ‭Per‬‭poter‬‭innescare‬‭il‬‭processo‬‭di‬‭s porulazione‬‭s ono‬‭necessari‬‭più‬‭di‬‭500‬‭geni;‬‭nello‬ ‭s pecifico,‬‭non‬‭s ono‬‭necessariamente‬‭c oinvolti‬‭nel‬‭processo,‬‭m a‬‭intervengono‬‭effettuando‬ ‭numerosi‬‭c ontrolli.‬ ‭Nelle‬‭primissime‬‭fasi‬‭(pre‬‭formazione‬‭del‬‭s etto)‬‭s i‬‭ha‬‭l’attivazione‬‭di‬‭un‬‭particolare‬ ‭m eccanismo‬‭detto‬‭phosphorelay,‬‭il‬‭quale‬‭m ette‬‭in‬‭gioco‬‭una‬‭s erie‬‭di‬‭fosforilazioni‬‭c he‬ ‭c ulminano‬‭nell’attivazione‬‭del‬‭gene‬‭Spo0A.‬ ‭È‬‭bene‬‭s apere‬‭c he‬‭l’avvio‬‭della‬‭fase‬‭di‬‭phosphorelay‬‭e‬‭le‬‭due‬‭c onseguenti‬‭fosforilazioni‬‭s ono‬ ‭possibili‬‭grazie‬‭alla‬‭presenza‬‭di‬‭c hinasi‬‭in‬‭grado‬‭di‬‭c aptare‬‭lo‬‭s timolo‬‭esterno‬‭e‬‭di‬‭attivare‬‭il‬ ‭primo‬‭s tep‬‭di‬‭phosphorelay.‬‭È‬‭però‬‭importante‬‭s apere‬‭c he‬‭non‬‭necessariamente‬‭questa‬ ‭s erie‬‭di‬‭fosforilazioni‬‭determinano‬‭la‬‭s porulazione;‬‭v ediamo‬‭infatti‬‭c he‬‭da‬‭un‬‭lato‬‭tali‬ ‭fosforilazioni‬‭s i‬‭accumulano‬‭fino‬‭ad‬‭avere‬‭una‬‭c oncentrazione‬‭tale‬‭da‬‭dare‬‭origine‬ ‭all’attivazione‬‭della‬‭c ascata‬‭s igma‬‭e‬‭all’attivazione‬‭della‬‭parte‬‭finale‬‭del‬‭processo‬‭di‬ ‭s porulazione,‬‭m entre‬‭dall’altro‬‭lato‬‭la‬‭fosforilazione‬‭potrebbe‬‭risultare‬‭bloccata‬‭e‬‭s i‬‭ha‬ ‭l’attivazione‬‭di‬‭v ie‬‭intermedie‬‭(se‬‭la‬‭c oncentrazione‬‭è‬‭bassa).‬ ‭8‬ ‭ attore‬‭s igma‬‭e‬‭c ascata‬‭s igma‬ F ‭I‬‭fattori‬‭s igma‬‭hanno‬‭la‬‭funzione‬‭di‬‭attivare‬‭determinati‬‭geni.‬‭Durante‬‭la‬‭s porulazione‬ ‭v engono‬‭attivati,‬‭a‬‭livello‬‭della‬‭c ellula‬‭m adre‬‭o‬‭a‬‭livello‬‭della‬‭SpoA,‬‭tutta‬‭una‬‭s erie‬‭di‬‭fattori‬ ‭s igma‬‭a‬‭c ascata.‬‭In‬‭particolare,‬‭s i‬‭parla‬‭di‬‭c ascata‬‭s igma‬‭in‬‭quanto‬‭l’attivazione‬‭di‬‭uno‬ ‭dipende‬‭dall’altro;‬‭c iò‬‭è‬‭fondamentale‬‭proprio‬‭per‬‭la‬‭c ontinuazione‬‭del‬‭processo‬‭s tesso‬‭di‬ ‭s porulazione.‬‭Nella‬‭c ellula‬‭m adre‬‭troveremo‬‭s igma‬‭A‬‭-‬‭s igma‬‭K‬‭-‬‭s igma‬‭E,‬‭m entre‬‭nella‬ ‭prespora‬‭s i‬‭ha‬‭s igma‬‭A‬‭-‬‭s igma‬‭F‬‭-‬‭s igma‬‭G.‬ ‭ a‬‭c ascata‬‭s igma‬‭ha‬‭inizio‬‭c on‬‭l’attivazione‬‭del‬‭fattore‬‭s igmaO‬‭da‬‭parte‬‭di‬‭Spo0A.‬‭A‬‭questo‬ L ‭punto,‬‭Spo0A‬‭dà‬‭avvio‬‭alla‬‭fase‬‭di‬‭s porulazione‬‭(formazione‬‭del‬‭s etto)‬‭e‬‭s i‬‭ha‬‭l’attivazione‬‭di‬ ‭una‬‭c ascata‬‭di‬‭fattori‬‭s igma‬‭attraverso‬‭un‬‭m eccanismo‬‭di‬‭c riss-cross;‬‭i‬‭fattori‬‭c he‬‭s i‬‭attivano‬ ‭appartengono‬‭s ia‬‭alla‬‭pre-spora‬‭c he‬‭alla‬‭c ellula‬‭m adre.‬ ‭ ‬‭questo‬‭punto,‬‭s i‬‭v iene‬‭ad‬‭attivare‬‭s igmaF‬‭nella‬‭prespora;‬‭prima‬‭di‬‭essere‬‭attivato,‬‭s i‬‭trova‬ A ‭bloccato‬‭da‬‭Spo0AB.‬‭Vediamo‬‭però‬‭c he‬‭nel‬‭m omento‬‭in‬‭c ui‬‭inizia‬‭la‬‭s porulazione‬‭v iene‬‭ad‬ ‭essere‬‭attivato‬‭un‬‭fattore‬‭c he‬‭funge‬‭da‬‭anti-‬‭inibitore‬‭di‬‭s po0AB‬‭,‬‭il‬‭quale‬‭permette‬ ‭l'attivazione‬‭del‬‭fattore‬‭s igmaF‬‭e‬‭blocca‬‭Spo0AB.‬ ‭ ’attivazione‬‭di‬‭s igmaF‬‭porta‬‭all’attivazione‬‭del‬ L ‭fattore‬‭s igmaE‬‭(già‬‭formato,‬‭m a‬‭inattivo)‬‭nella‬ ‭c ellula‬‭m adre,‬‭grazie‬‭ad‬‭un‬‭taglio‬‭proteolitico.‬ ‭(fase‬‭engulfment)‬ I‭l‬‭fattore‬‭s igmaE,‬‭a‬‭s ua‬‭v olta,‬‭v a‬‭poi‬‭ad‬‭attivare‬‭il‬ ‭fattore‬‭s igmaG‬‭(che‬‭può‬‭essere‬‭attivato‬‭dal‬ ‭fattore‬‭s igmaE‬‭o‬‭direttamente‬‭dal‬‭fattore‬‭s igmaF‬ ‭della‬‭prespora).‬‭In‬‭c ontemporanea‬‭a‬‭s igmaG‬ ‭dipendono‬‭i‬‭fattori‬‭c he‬‭c oncorrono‬‭alla‬ ‭formazione‬‭dei‬‭rivestimenti.‬ I‭nfine,‬‭è‬‭bene‬‭s apere‬‭c he‬‭l’ultimo‬‭fattore‬‭s igma‬ ‭c he‬‭v iene‬‭ad‬‭essere‬‭attivato‬‭è‬‭il‬‭fattore‬‭s igmaK‬ ‭(regola‬‭le‬‭fase‬‭di‬‭germinazione),‬‭il‬‭quale‬‭può‬‭essere‬‭attivato‬‭a‬‭3‬‭livelli‬‭ovvero:‬ ‭-‬ ‭direttamente‬‭dal‬‭fattore‬‭s igmaE‬ ‭-‬ ‭dal‬‭fattore‬‭s igmaG‬ ‭-‬ ‭tramite‬‭autoattivazione‬ I‭noltre,‬‭è‬‭bene‬‭s apere‬‭c he‬‭esistono‬‭anche‬‭tutta‬‭un’altra‬‭s erie‬‭di‬‭geni‬‭c he‬‭s ono‬‭c oinvolti‬‭nella‬ ‭formazione‬‭del‬‭rivestimento‬‭della‬‭s pora,‬‭i‬‭quali‬‭s ono‬‭divisi‬‭in‬‭4‬‭c lassi:‬ ‭-‬ ‭Prima‬‭c lasse:‬‭Sigma‬‭E.‬‭G eni‬‭c oinvolti‬‭nella‬‭formazione‬‭della‬‭pre-tunica.‬ ‭-‬ ‭Seconda‬‭c lasse:‬‭SigmaE‬‭e‬‭SpoIIID.‬‭G eni‬‭c he‬‭s i‬‭occupano‬‭della‬‭regolazione‬‭della‬ ‭trascrizione‬‭di‬‭tutti‬‭gli‬‭altri‬‭fattori.‬ ‭-‬ ‭Terza‬‭c lasse:‬‭SigmaK‬‭.‬‭G eni‬‭fondamentali‬‭per‬‭la‬‭formazione‬‭della‬‭tunica‬‭s pinale.‬ ‭-‬ ‭Q uarta‬‭c lasse‬‭:‬‭SigmaK‬‭e‬‭gerE.‬‭G eni‬‭c oinvolti‬‭nell'attivazione‬‭della‬‭germinazione,‬ ‭infatti‬‭la‬‭tunica‬‭s porale‬‭è‬‭c ompletata.‬ ‭9‬  ‭ icrobiologia‬‭diagnostica‬ M ‭La‬‭m icrobiologia‬‭c linica‬‭ha‬‭l'obiettivo‬‭di‬‭identificare‬‭l’agente‬‭patogeno‬‭responsabile‬‭di‬‭una‬ ‭m alattia‬‭infettiva,‬‭c osì‬‭da‬‭individuare‬‭appropriati‬‭interventi‬‭terapeutici.‬ ‭È‬‭importante‬‭l'uso‬‭di‬‭m etodologie‬‭v alide‬‭e‬‭s empre‬‭più‬‭avanzate‬‭ed‬‭eseguibili‬‭in‬‭tempi‬‭rapidi‬ ‭per‬‭ottenere‬‭informazioni‬‭utili‬‭alla‬‭diagnosi‬‭della‬‭terapia.‬‭Nel‬‭m entre‬‭c he‬‭s i‬‭effettuano‬‭analisi‬ ‭s i‬‭può‬‭s omministrare‬‭una‬‭terapia‬‭empirica,‬‭ovvero‬‭degli‬‭antibiotici‬‭ad‬‭ampio‬‭s pettro,‬ ‭nell’attesa‬‭dell’antibiogramma‬‭ovvero‬‭un‬‭elenco‬‭di‬‭antibiotici‬‭c on‬‭dei‬‭+‬‭e‬‭-‬‭in‬‭base‬‭alla‬ ‭s ensibilità‬‭al‬‭m icrorganismo‬‭patogeno.‬‭Una‬‭v olta‬‭ottenuto‬‭l’antibiogramma‬‭s i‬‭potrà‬ ‭s omministrare‬‭il‬‭farmaco‬‭più‬‭adatto.‬ I‭l‬‭c linico‬‭dovrà‬‭possedere‬‭delle‬‭c onoscenze‬‭di‬‭base‬‭approfondite‬‭s ulla‬‭patogenesi‬‭delle‬ ‭infezioni‬‭s ospette‬‭in‬‭m odo‬‭da‬‭c onsentire‬‭un‬‭prelievo‬‭c orretto‬‭e‬‭l’invio‬‭di‬‭un‬‭adeguato‬ ‭c ampione‬‭c linico‬‭al‬‭laboratorio‬‭di‬‭m icrobiologia.‬ I‭l‬‭percorso‬‭di‬‭diagnostica‬‭m icrobiologica‬ ‭La‬‭diagnostica‬‭m icrobiologica‬‭avviene‬‭attraverso‬‭un‬‭percorso‬‭a‬‭diverse‬‭fasi:‬ ‭-‬ ‭Fase‬‭pre-analitica‬‭:‬‭v i‬‭è‬‭la‬‭richiesta‬‭da‬‭parte‬‭del‬‭c linico,‬‭il‬‭prelievo,‬‭il‬‭trasporto,‬‭la‬ ‭c onservazione‬‭del‬‭c ampione,‬‭l’invio‬‭del‬‭c ampione‬‭e‬‭l’accettazione‬‭di‬‭esso.‬ ‭-‬ ‭Fase‬‭analitica‬‭:‬‭c onsiste‬‭nell’esecuzione‬‭dell'analisi‬‭c he‬‭oggigiorno‬‭avviene‬‭ormai‬‭in‬ ‭v ia‬‭automatizzate‬‭tranne‬‭alcune‬‭tecniche‬‭c he‬‭risultano‬‭ancora‬‭m anuali.‬ ‭-‬ ‭Fase‬‭post-analitica‬‭:‬‭c omprende‬‭la‬‭v alutazione‬‭(valutare‬‭il‬‭risultato‬‭dell’analisi),‬‭la‬ ‭refertazione‬‭(conferma‬‭la‬‭positività‬‭o‬‭la‬‭negatività‬‭all’agente‬‭patogeno‬‭e‬‭l’invio‬‭al‬ ‭reparto‬‭o‬‭al‬‭paziente‬‭s tesso)e‬‭lo‬‭s toccaggio‬‭c ampioni‬‭(in‬‭alcuni‬‭c asi‬‭bisogna‬ ‭c onservarli‬‭per‬‭effettuare‬‭eventuali‬‭test).‬‭In‬‭alcuni‬‭c asi‬‭v iene‬‭effettuata‬‭anche‬ ‭l’elaborazione‬‭s tatistica‬‭importante‬‭nell’epidemiologia‬‭per‬‭c ontrollare‬‭c ome‬‭s i‬ ‭trasmette‬‭il‬‭m icrorganismo‬‭nella‬‭popolazione.‬ ‭ ella‬‭fase‬‭pre‬‭c linica‬‭è‬‭importante‬‭c he‬‭la‬‭raccolta‬‭del‬‭c ampione‬‭v enga‬‭eseguita‬‭in‬‭dei‬ N ‭c ontenitori‬‭s terili‬‭c on‬‭adeguati‬‭terreni‬‭di‬‭trasporto‬‭a‬‭temperatura‬‭c ontrollata‬‭per‬‭permettere‬‭al‬ ‭m icrorganismo‬‭di‬‭rimanere‬‭in‬‭v ita.‬‭Il‬‭trasporto‬‭deve‬‭garantire‬‭la‬‭s icurezza‬‭e‬‭l’isolamento‬‭del‬ ‭c ampione‬‭in‬‭apposite‬‭buste‬‭a‬‭due‬‭s comparti.‬ ‭ ipologie‬‭di‬‭c ampione‬ T ‭Campioni‬‭c he‬‭possono‬‭essere‬‭analizzati:‬ ‭-‬ ‭m onomicrobici‬‭ovvero‬‭c ampioni‬‭s terili‬‭derivanti‬‭dal‬‭s angue‬‭s ia‬‭plasma‬‭(‬‭frazione‬ ‭liquida‬‭del‬‭s angue‬‭non‬‭c oagulato.‬‭importante‬‭l'anticoagulante‬‭nelle‬‭provette‬‭di‬ ‭raccolta)‬‭c he‬‭s iero‬‭(frazione‬‭liquida‬‭del‬‭s angue‬‭c oagulato)‬‭e‬‭dal‬‭liquor‬ ‭c efalorachidiano.‬ ‭-‬ ‭polimicrobici‬‭ovvero‬‭c ampioni‬‭non‬‭s terili‬‭c he‬‭devono‬‭essere‬‭trattati‬‭prima‬‭dell’analisi.‬ ‭Sono‬‭i‬‭tamponi‬‭(orofaringeo,‬‭anale‬‭iseriti‬‭poi‬‭in‬‭una‬‭provetta‬‭nel‬‭quale‬‭s ono‬‭presenti‬ ‭dei‬‭liquidi‬‭di‬‭trasporto‬‭s pecifici‬‭per‬‭i‬‭m icrorganismi‬‭da‬‭ricercare.‬‭Normalmente‬‭s ono‬ ‭presenti‬‭anche‬‭antibiotici‬‭e‬‭antimicotici),‬‭urine‬‭e‬‭feci‬‭(soprattutto‬‭le‬‭feci‬‭devono‬ ‭essere‬‭diluite‬‭e‬‭s eminate‬‭nel‬‭pellet),‬‭broncolavaggio‬‭e‬‭biopsie‬‭(prima‬‭omogeneizzate‬ ‭e‬‭poi‬‭analizzate).‬ ‭10‬ I‭solamento‬‭ed‬‭identificazione‬‭dei‬‭batteri‬ ‭Prendendo‬‭in‬‭esame‬‭il‬‭c ampione‬‭in‬‭s tudio:‬ ‭-‬ ‭la‬‭prima‬‭azione‬‭da‬‭fare‬‭è‬‭la‬‭s celta‬‭e‬‭l’inoculazione‬‭dei‬‭terreni‬‭c ulturali‬‭basandosi‬‭s ulle‬ ‭esigenze‬‭nutrizionali‬‭del‬‭batterio.‬ ‭-‬ ‭Successivamente‬‭di‬‭passa‬‭all’incubazione‬‭(aerobiosi,‬‭anaerobiosi‬‭o‬‭m icroaerofilia).‬ ‭-‬ ‭Si‬‭effettua‬‭poi‬‭uno‬‭s tudio‬‭m orfologico‬‭delle‬‭c olonie‬‭e‬‭delle‬‭c ellule‬‭batteriche‬‭c on‬ ‭l’ausilio‬‭della‬‭c olorazione‬‭di‬‭G ram‬‭per‬‭poter‬‭avere‬‭un‬‭primo‬‭riscontro.‬ ‭-‬ ‭Si‬‭può‬‭quindi‬‭individuare‬‭il‬‭patogeno‬‭ed‬‭eseguire‬‭l’antibiogramma.‬ ‭-‬ ‭Si‬‭effettuano‬‭prove‬‭di‬‭c atalasi,‬‭ossidasi‬‭e‬‭l’inoculazione‬‭dei‬‭terreni‬‭differenziali‬‭per‬ ‭delle‬‭prove‬‭biochimiche.‬ ‭-‬ ‭Prima‬‭dell’identificazione‬‭finale,‬‭s e‬‭è‬‭necessario‬‭s i‬‭possono‬‭effettuare‬‭delle‬‭prove‬ ‭s ierologiche.‬ ‭ avanti‬‭ad‬‭un’infezione‬‭batterica‬‭s i‬‭può‬‭decidere‬‭di‬‭eseguire‬‭tecniche‬‭dirette‬‭o‬‭indirette‬ D ‭finalizzate‬‭all’identificazione‬‭del‬‭v irus:‬ ‭-‬ ‭Tecniche‬‭dirette‬‭(definire‬‭il‬‭patogeno):‬‭v engono‬‭eseguite‬‭s u‬‭una‬‭s erie‬‭di‬‭c ampioni‬ ‭(tamponi,‬‭feci,‬‭aspirati,‬‭urine,‬‭plasma...)‬‭e‬‭v anno‬‭ad‬‭analizzare‬‭la‬‭presenza‬ ‭dell’antigene‬‭e/o‬‭dell’agente‬‭v irale‬‭all’interno‬‭di‬‭questi.‬‭Si‬‭effettua‬‭tramite‬‭c olture‬‭in‬ ‭terreni‬‭non‬‭s elettivi‬‭e‬‭discriminatori‬‭c on‬‭lunghi‬‭tempi.‬‭La‬‭c ultura‬‭poi‬‭s osterrà‬ ‭l’identificazione‬‭e‬‭l’antibiogramma,‬‭nel‬‭m entre‬‭s i‬‭effettua‬‭una‬‭diagnosi‬‭rapida‬‭.‬ ‭Alcune‬‭di‬‭queste‬‭s ono‬‭l’analisi‬‭degli‬‭acidi‬‭nucleici‬‭v irali,‬‭l’analisi‬‭ottica‬‭di‬‭particelle‬ ‭v irali‬‭attraverso‬‭m icroscopio‬‭elettronico,‬‭l’analisi‬‭di‬‭antigeni‬‭v irus-specifici‬‭attraverso‬ ‭immunofluorescenza,‬‭l’isolamento‬‭del‬‭v irus‬‭in‬‭c olture‬‭c ellulari‬‭ed‬‭il‬‭m onitoraggio‬ ‭attraverso‬‭PCR.‬‭Esistono‬‭diversi‬‭tipi‬‭di‬‭PCR:‬‭m ultiplex‬‭PCR‬‭(i‬‭test‬‭s indromici‬ ‭permettono‬‭di‬‭analizzare‬‭s u‬‭uno‬‭s tesso‬‭c ampione‬‭più‬‭agenti‬‭patogeni),‬‭nested‬‭PCR‬ ‭(per‬‭c ercare‬‭un‬‭frammento‬‭interno).‬ ‭-‬ ‭ ecniche‬‭indirette‬‭(definire‬‭l’infezione‬‭tramite‬‭anticorpi):‬‭è‬‭un‬‭esame‬‭immunologico‬‭in‬ T ‭quanto‬‭v engono‬‭eseguite‬‭s ul‬‭s iero‬‭e‬‭può‬‭essere‬‭eseguito‬‭m ediante‬‭test‬ ‭immunoenzimatico‬‭o‬‭immunofluorescenza.‬‭Si‬‭v a‬‭quindi‬‭ad‬‭analizzare‬‭la‬‭risposta‬ ‭immunitaria‬‭anticorpale‬‭v erso‬‭l’agente‬‭patogeno.‬ ‭ ’esame‬‭c olturale‬‭rapido‬‭prevede‬‭gli‬‭s tessi‬‭principi‬‭di‬‭quanto‬‭v isto‬‭finora‬‭c on‬‭la‬‭differenza‬ L ‭c he‬‭v iene‬‭eseguito‬‭in‬‭un‬‭c ampione‬‭più‬‭piccolo.‬‭Q uesto‬‭esame‬‭v iene‬‭utilizzato‬‭s oprattutto‬‭per‬ ‭l’analisi‬‭di‬‭antigeni‬‭v irali‬‭presenti‬‭nelle‬‭c ellule‬‭s eminate‬‭s ul‬‭v etrino‬‭e‬‭riconosciuti‬‭dagli‬ ‭anticorpi.‬‭È‬‭quindi‬‭possibile‬‭affermare‬‭c he‬‭in‬‭m isura‬‭m inore‬‭e‬‭in‬‭breve‬‭tempo‬‭s i‬‭possono‬ ‭eseguire‬‭gli‬‭s tessi‬‭test‬‭effettuati‬‭s u‬‭una‬‭c oltura‬‭c ellulare‬‭più‬‭estesa.‬ ‭ oltivazione‬‭batterica‬ C ‭La‬‭divisione‬‭batterica‬‭avviene‬‭in‬‭un‬‭tempo‬‭preciso‬‭a‬‭s econda‬‭del‬‭tipo‬‭di‬‭m icrorganismo.‬ ‭Inserendo‬‭un‬‭batterio‬‭in‬‭un‬‭terreno‬‭fresco‬‭e‬‭pieno‬‭di‬‭fattori‬‭di‬‭c rescita‬‭s i‬‭possono‬‭osservare‬ ‭alcune‬‭fasi‬‭c aratteristiche‬‭c he‬‭s i‬‭s usseguono:‬ ‭-‬ ‭Fase‬‭di‬‭latenza‬‭=‬‭il‬‭batterio‬‭s i‬‭adatta‬‭alle‬‭c ondizioni‬‭del‬‭m icroambiente‬‭e‬‭ai‬‭nutrienti‬ ‭presenti‬‭nel‬‭terreno.‬‭Inoltre,‬‭non‬‭avviene‬‭nessun‬‭tipo‬‭di‬‭c rescita‬‭della‬‭progenie‬‭(non‬ ‭avviene‬‭divisione),‬‭m a‬‭s olo‬‭accrescimento‬‭c ellulare;‬‭il‬‭numero‬‭di‬‭batteri‬‭rimane‬ ‭quindi‬‭uguale.‬ ‭11‬  ‭-‬ ‭ sponenziale‬‭=‬‭avviene‬‭una‬‭rapida‬‭duplicazione‬‭del‬‭batterio‬‭ed‬‭un‬‭c ostante‬ E ‭incremento‬‭della‬‭popolazione‬‭batterica.‬‭Tale‬‭rapidità‬‭dipende‬‭dalle‬‭c ondizioni‬‭del‬ ‭m icroambiente‬‭ovvero‬‭dal‬‭fatto‬‭c he‬‭s i‬‭tratti‬‭di‬‭un‬‭terreno‬‭ricco‬‭o‬‭di‬‭un‬‭terreno‬‭m inimo,‬ ‭dal‬‭pH,‬‭dalla‬‭temperatura‬‭o‬‭dall’agitazione‬‭del‬‭s istema;‬‭possiamo‬‭quindi‬‭affermare‬ ‭c he‬‭s ono‬‭tanti‬‭i‬‭fattori‬‭c he‬‭influenzano‬‭la‬‭c rescita.‬ ‭-‬ ‭Stazionaria‬‭=‬‭fase‬‭in‬‭c ui‬‭s i‬‭v erifica‬‭un‬‭equilibrio‬‭tra‬‭i‬‭batteri‬‭c he‬‭c rescono‬‭e‬‭quelli‬‭c he‬ ‭m uoiono‬‭e‬‭tra‬‭le‬‭s ostanze‬‭nutritive‬‭e‬‭quelle‬‭di‬‭s carto‬‭(metaboliti‬‭tossici).‬‭In‬‭questa‬ ‭fase‬‭la‬‭m oltiplicazione‬‭rallenta‬‭ed‬‭il‬‭numero‬‭di‬‭batteri‬‭rimane‬‭quindi‬‭c ostante‬‭nel‬ ‭tempo.‬ ‭-‬ ‭M orte‬‭=‬‭in‬‭s eguito‬‭ad‬‭un‬‭c onsumo‬‭estremo‬‭di‬‭nutrienti,‬‭alla‬‭riduzione‬‭pH‬‭e‬ ‭all’aumento‬‭di‬‭m etaboliti‬‭nocivi,‬‭i‬‭batteri‬‭m uoiono‬‭s econdo‬‭una‬‭c inetica‬‭esponenziale.‬ ‭ i‬‭possono‬‭eseguire‬‭anche‬‭delle‬‭c olture‬‭c ontinue‬‭dove‬‭le‬‭c ellule‬‭s ono‬‭m antenute‬ S ‭c ostantemente‬‭in‬‭fase‬‭esponenziale‬‭tramite‬‭una‬‭giara‬‭dove‬‭avviene‬‭la‬‭c rescita.‬‭La‬‭giara‬‭è‬ ‭c ollegata‬‭nella‬‭parte‬‭alta‬‭ad‬‭un‬‭recipiente‬‭c on‬‭terreno‬‭fresco,‬‭m entre‬‭nella‬‭parte‬‭bassa‬‭s i‬‭ha‬ ‭un‬‭recipiente‬‭di‬‭raccolta‬‭dello‬‭s carto.‬‭Sulla‬‭giara‬‭di‬‭c rescita‬‭s i‬‭hanno‬‭dei‬‭rubinetti‬‭per‬‭l’aria.‬ ‭Il‬‭recipiente‬‭di‬‭c oltura‬‭s arà‬‭s ottoposto‬‭a‬‭c ontinua‬‭agitazione‬‭c osì‬‭c he‬‭i‬‭batteri‬‭rimangano‬ ‭s empre‬‭in‬‭m ovimento‬‭e‬‭non‬‭s i‬‭v adano‬‭a‬‭depositare‬‭s ul‬‭terreno,‬‭c osì‬‭una‬‭v olta‬‭c he‬‭v iene‬ ‭fatto‬‭fuoriuscire‬‭il‬‭terreno‬‭c onsumato‬‭non‬‭s i‬‭avrà‬‭la‬‭perdita‬‭di‬‭batteri.‬‭Q uesti‬‭tipi‬‭di‬‭c olture‬ ‭s ono‬‭m olto‬‭utilizzate‬‭in‬‭ambito‬‭industriale.‬ ‭ attori‬‭di‬‭c rescita‬ F ‭Temperatura‬ ‭Si‬‭possono‬‭distinguere‬‭diversi‬‭m icrorganismi‬‭a‬‭s econda‬‭della‬‭temperatura‬‭ottimale‬‭in‬‭c ui‬‭la‬ ‭loro‬‭c rescita‬‭è‬‭permessa.‬ ‭Se‬‭la‬‭temperatura‬‭è‬‭troppo‬‭bassa‬‭il‬‭c itoplasma‬‭non‬‭avrà‬‭la‬‭c onsistenza‬‭c orretta‬‭e‬‭andrà‬ ‭incontro‬‭a‬‭m orte‬‭perché‬‭tutte‬‭le‬‭s trutture‬‭interne‬‭non‬‭funzioneranno‬‭nella‬‭m aniera‬‭ottimale,‬ ‭s e‬‭invece‬‭la‬‭temperatura‬‭è‬‭troppo‬‭elevata‬‭le‬‭proteine‬‭s i‬‭denaturano.‬ ‭Nello‬‭s pecifico,‬‭distinguiamo:‬ ‭-‬ ‭Psicrofili‬‭=‬‭tra‬‭-5°‬‭e‬‭18°‬‭(ottimus‬‭15°)‬ ‭-‬ ‭Psicrotrofi‬‭=‬‭tra‬‭0°‬‭e‬‭35°‬‭(ottimus‬‭22°-23°)‬ ‭-‬ ‭M esofili‬‭=‬‭tra‬‭14°‬‭e‬‭42°‬‭(ottimus‬‭37°)‬ ‭-‬ ‭Termofili‬‭=‬‭tra‬‭40°‬‭e‬‭80°‬‭(ottimus‬‭65°)‬ ‭-‬ ‭Estremi‬‭termofili‬‭=‬‭tra‬‭68°‬‭e‬‭105°‬‭(ottimus‬‭97°)‬ ‭12‬ ‭ ssigeno‬ O ‭In‬‭base‬‭alla‬‭presenza‬‭di‬‭alcuni‬‭enzimi,‬‭c ome‬‭la‬‭s uperossido‬‭dismutasi‬‭(SOD)‬‭e‬‭la‬‭c atalasi,‬‭i‬ ‭m icrorganismi‬‭s ono‬‭c apaci‬‭o‬‭m eno‬‭di‬‭c rescere‬‭in‬‭presenza‬‭o‬‭in‬‭assenza‬‭di‬‭ossigeno;‬‭s ulla‬ ‭base‬‭di‬‭questo,‬‭s i‬‭distinguono‬‭diversi‬‭tipi‬‭di‬‭batteri:‬ ‭-‬ ‭aerobi‬‭obbligati‬‭(a)‬‭=‬‭necessitano‬‭della‬‭presenza‬‭di‬‭ossigeno‬‭per‬‭replicarsi‬‭e‬‭hanno‬ ‭entrambi‬‭gli‬‭enzimi.‬ ‭-‬ ‭aerobi‬‭facoltativi‬‭(b)‬‭=‬‭oltre‬‭a‬‭poter‬‭s fruttare‬‭l’ossigeno,‬‭possono‬‭s cegliere‬‭s e‬ ‭utilizzarlo,‬‭ammesso‬‭c he‬‭le‬‭altre‬‭c ondizioni‬‭di‬‭c rescita‬‭s iano‬‭idonee.‬‭Possiedono‬ ‭entrambi‬‭gli‬‭enzimi.‬ ‭-‬ ‭anaerobi‬‭aerotolleranti‬‭(d)‬‭=‬‭ignorano‬‭la‬‭presenza‬‭di‬‭ossigeno,‬‭hanno‬‭la‬ ‭s uperossidodismutasi‬‭m a‬‭non‬‭la‬‭c atalasi.‬ ‭-‬ ‭m icroaerofili‬‭(e)‬‭=‬‭s ono‬‭c apaci‬‭di‬‭c rescere‬‭in‬‭piccole‬‭quantità‬‭di‬‭ossigeno,‬‭in‬‭quanto‬ ‭hanno‬‭un‬‭s istema‬‭di‬‭c atalasi‬‭poco‬‭attivo.‬ ‭-‬ ‭anaerobi‬‭s tretti‬‭(c)‬‭=‬‭non‬‭hanno‬‭nessuno‬‭dei‬‭due‬‭enzimi,‬‭quindi‬‭m uoiono‬‭in‬‭presenza‬ ‭di‬‭ossigeno.‬ ‭ n‬‭esempio‬‭di‬‭anaerobi‬‭s tretti‬‭s ono‬‭i‬‭m icobatteri‬‭c he‬‭necessitano‬‭di‬‭c ondizioni‬‭di‬‭c oltura‬ U ‭particolari.‬‭Per‬‭la‬‭totale‬‭assenza‬‭di‬‭ossigeno,‬‭v engono‬‭utilizzate‬‭delle‬‭s peciali‬‭c appe,‬ ‭l’operatore‬‭v a‬‭a‬‭m anipolare‬‭il‬‭c ampione‬‭direttamente‬‭dall’interno‬‭della‬‭c appa‬‭grazie‬‭all’ausilio‬ ‭di‬‭guanti‬‭attaccati‬‭alla‬‭c appa.‬‭Le‬‭c olonie‬‭s i‬‭c oltivano‬‭in‬‭giarette‬‭a‬‭c hiusura‬‭ermetica‬‭all’interno‬ ‭della‬‭quale‬‭v i‬‭s ono‬‭degli‬‭agenti‬‭riducenti‬‭c he‬‭v anno‬‭a‬‭ridurre‬‭l’ossigeno‬‭ad‬‭acqua‬‭e‬‭una‬‭busta‬ ‭c he‬‭c ontiene‬‭plasmidi‬‭c he‬‭v anno‬‭a‬‭generare‬‭idrogeno.‬‭All’interno‬‭è‬‭presente‬‭anche‬‭un‬ ‭c atalizzatore‬‭c he‬‭permette‬‭di‬‭c atalizzare‬‭la‬‭formazione‬‭di‬‭acqua‬‭dall’idrogeno‬‭e‬ ‭dall’ossigeno,‬‭c osì‬‭tutto‬‭l’ossigeno‬‭v iene‬‭eliminato‬‭(Gaspak).‬ ‭ h‬ P ‭Per‬‭una‬‭c rescita‬‭ottimale‬‭dei‬‭batteri‬‭è‬‭necessario‬‭anche‬‭un‬‭pH‬‭adeguato,‬‭c he‬‭v errà‬ ‭c ontrollato‬‭m ediante‬‭phmetro‬‭ed‬‭eventualmente‬‭aggiustato‬‭grazie‬‭all’aggiunta‬‭di‬‭NaOH‬‭o‬ ‭HCl‬‭diluiti‬‭al‬‭terreno‬‭di‬‭c oltura,‬‭dove‬‭v i‬‭s aranno‬‭anche‬‭dei‬‭rivelatori‬‭di‬‭pH‬‭c he‬‭permetteranno‬ ‭di‬‭c omprendere‬‭le‬‭m inime‬‭v ariazioni‬‭di‬‭pH‬‭(rosso‬‭di‬‭etilene,‬‭rosso‬‭fenolo).‬ ‭In‬‭base‬‭al‬‭pH‬‭s i‬‭possono‬‭s uddividere‬‭i‬‭batteri‬‭in:‬ ‭-‬ ‭Acidofili‬‭=‬‭c rescono‬‭c on‬‭pH‬‭m inore‬‭o‬‭uguale‬‭a‬‭2.‬ ‭-‬ ‭Neutrofili‬‭=‬‭c rescono‬‭c on‬‭pH‬‭intorno‬‭a‬‭7.‬ ‭-‬ ‭Basofili‬‭=‬‭c rescono‬‭c on‬‭pH‬‭m aggiore‬‭o‬‭uguale‬‭10.‬ ‭13‬ ‭ midità‬ U ‭Il‬‭grado‬‭di‬‭umidità‬‭indica‬‭la‬‭quantità‬‭di‬‭acqua‬‭non‬‭legata‬‭al‬‭terreno‬‭e‬‭quindi‬‭disponibile‬‭per‬‭i‬ ‭m icrorganismi‬‭e‬‭di‬‭s oluti‬‭c ome‬‭i‬‭s ali.‬‭In‬‭particolare,‬‭una‬‭c ellula‬‭batterica‬‭è‬‭c ostituita‬ ‭s oprattutto‬‭da‬‭acqua‬‭(80-90%);‬‭è‬‭quindi‬‭possibile‬‭affermare‬‭c he‬‭l’acqua‬‭è‬‭una‬‭c omponente‬ ‭fondamentale‬‭per‬‭la‬‭c rescita‬‭del‬‭batterio.‬‭Proprio‬‭in‬‭relazione‬‭a‬‭questo,‬‭è‬ ‭possibile‬‭distinguere‬‭diversi‬‭tipi‬‭di‬‭m icrorganismi:‬ ‭-‬ ‭non‬‭alofili:‬‭non‬‭c rescono‬‭in‬‭presenza‬‭di‬‭s ali.‬ ‭-‬ ‭alotolleranti:‬‭tollerano‬‭piccole‬‭quantità‬‭di‬‭s ali.‬ ‭-‬ ‭alofili‬‭ed‬‭estremamente‬‭alofili:‬‭c rescono‬‭in‬‭elevate‬‭quantità‬‭di‬‭s ali.‬ ‭Inoltre,‬‭è‬‭bene‬‭s apere‬‭c he‬‭il‬‭grado‬‭di‬‭umidità‬‭s erve‬‭per‬‭s fruttare‬‭dei‬ ‭terreni‬‭allo‬‭s copo‬‭di‬‭identificare‬‭alcune‬‭s pecie‬‭batteriche‬‭rispetto‬‭ad‬‭altre.‬ ‭ erreni‬‭di‬‭c oltura‬ T ‭Per‬‭terreno‬‭di‬‭c oltura‬‭s i‬‭intende‬‭un‬‭ambiente‬‭artificiale‬‭in‬‭c ui‬‭s i‬‭c erca‬‭di‬‭ottenere‬‭la‬ ‭riproduzione‬‭dei‬‭m icrorganismi‬‭fornendo‬‭loro‬‭le‬‭s ostanze‬‭nutritizie‬‭necessarie‬‭e‬‭adatte‬ ‭c ondizioni‬‭ambientali‬‭(fattori‬‭di‬‭c rescita).‬ ‭I‬‭terreni‬‭possono‬‭essere‬‭c lassificati‬‭in‬‭base‬‭allo‬‭s tato‬‭fisico,‬‭alla‬‭c omposizione‬‭fisica‬‭e‬‭alla‬ ‭funzione.‬ ‭Classificazione‬‭in‬‭base‬‭allo‬‭stato‬‭fisico‬ ‭-‬ ‭Liquidi‬‭:‬‭il‬‭più‬‭diffuso‬‭è‬‭il‬‭brodo‬‭di‬‭c arne.‬‭Sono‬‭di‬‭uso‬‭c omune‬‭poiché‬‭c onsentono‬‭lo‬ ‭s viluppo‬‭di‬‭quasi‬‭tutti‬‭i‬‭batteri.‬‭La‬‭loro‬‭c omposizione‬‭è‬‭v ariabile‬‭in‬‭ogni‬‭preparazione.‬ ‭O ggigiorno‬‭s ono‬‭s tati‬‭s ostituiti‬‭dai‬‭brodi‬‭nutritivi‬‭c ommerciali‬‭a‬‭formulazione‬‭nota.‬ ‭-‬ ‭Solidi‬‭:‬‭i‬‭più‬‭antichi‬‭erano‬‭il‬‭s iero‬‭di‬‭s angue‬‭c oagulato‬‭e‬‭la‬‭patata.‬‭O ggigiorno‬‭s i‬‭ricorre‬ ‭all’aggiunta‬‭di‬‭AGAR,‬‭un‬‭polisaccaride‬‭di‬‭alga‬‭rossa‬‭c aratteristico‬‭per‬‭la‬‭c apacità,‬‭a‬ ‭determinate‬‭temperature,‬‭intorno‬‭ai‬‭50°,‬‭di‬‭s olidificare‬‭un‬‭terreno‬‭c he‬‭non‬‭tornerà‬‭più‬ ‭in‬‭fase‬‭liquida‬‭anche‬‭s e‬‭esposto‬‭a‬‭temperature‬‭m aggiori.‬‭I‬‭terreni‬‭s olidi‬‭s ono‬ ‭indispensabili‬‭per‬‭l’isolamento‬‭di‬‭c olture‬‭batteriche‬‭pure.‬ ‭Classificazione‬‭in‬‭base‬‭alla‬‭composizione‬‭chimica‬ ‭-‬ ‭M inimi‬‭=‬‭s ono‬‭a‬‭c omposizione‬‭nota,‬‭m a‬‭c ontengono‬‭s olamente‬‭le‬‭s ostanze‬‭base‬ ‭indispensabili‬‭ovvero‬‭s ali‬‭inorganici‬‭per‬‭la‬‭c rescita‬‭di‬‭un‬‭batterio.‬ ‭-‬ ‭Sintetici‬‭=‬‭s ono‬‭a‬‭c omposizione‬‭nota.‬ ‭-‬ ‭Complessi‬‭=‬‭s ono‬‭estremamente‬‭ricchi,‬‭m a‬‭la‬‭c omposizione‬‭non‬‭è‬‭nota‬‭in‬‭quanto‬ ‭s pesso‬‭possono‬‭originarsi‬‭da‬‭estratti‬‭di‬‭c ellule‬‭animali‬‭v egetali‬‭o‬‭m icrobiche‬‭e‬‭quindi‬ ‭non‬‭s ono‬‭s tandardizzabili.‬ ‭ na‬‭v olta‬‭i‬‭terreni‬‭di‬‭c oltura‬‭v enivano‬‭fatti‬‭c ompletamente‬‭c on‬‭s ostanze‬‭naturali,‬‭quindi‬‭non‬ U ‭potevano‬‭essere‬‭s tandardizzati.‬‭O ggigiorno‬‭v engono‬‭prodotti‬‭in‬‭larga‬‭s cala‬‭e‬‭s ono‬ ‭s tandardizzati‬‭garantendo‬‭c osì‬‭la‬‭riproducibilità‬‭dell'esperimento.‬‭Al‬‭loro‬‭interno‬‭s ono‬ ‭presenti‬‭m icronutrienti‬‭e‬‭m acronutrienti‬‭indispensabili‬‭per‬‭la‬‭c rescita‬‭c ellulare.‬ ‭-‬ ‭fonti‬‭di‬‭c arbonio‬‭prelevati‬‭da‬‭c arboidrati‬‭s emplici‬‭(glucosio),‬‭polisaccaridi‬‭(amido,‬ ‭pectina),‬‭acidi‬‭organici‬‭e‬‭alcoli‬‭(acido‬‭c itrico,‬‭glicerolo),‬‭proteine‬‭e‬‭peptoni‬‭(forniscono‬ ‭c ontemporaneamente‬‭C‬‭e‬‭N).‬ ‭-‬ ‭fonti‬‭di‬‭azoto‬‭e‬‭fosforo‬‭prelevati‬‭da‬‭s ali‬‭m inerali‬‭(ammonio,‬‭nitrato),‬‭proteine‬‭(caseina,‬ ‭emoglobina),‬‭peptoni‬‭(idrolizzati‬‭acidi‬‭o‬‭enzimatici‬‭di‬‭proteine‬‭della‬‭c arne,‬‭del‬‭latte,‬ ‭della‬‭s oia)‬‭e‬‭infusi‬‭ed‬‭estratti‬‭di‬‭c arne.‬ ‭Il‬‭fosforo‬‭v iene‬‭in‬‭genere‬‭fornito‬‭s otto‬‭forma‬‭inorganica‬‭c ome‬‭fosfati‬‭di‬‭Na‬‭e‬‭K.‬ ‭14‬ ‭Sono‬‭presenti‬‭anche‬‭s ali‬‭m inerali‬‭e‬‭z olfo:‬ ‭-‬ ‭presenti‬‭in‬‭quantità‬‭s ufficienti‬‭negli‬‭ingredienti‬‭organici.‬‭Per‬‭alcuni‬‭m icrorganismi‬‭è‬ ‭necessaria‬‭l'aggiunta‬‭di‬‭s olfati,‬‭s ali‬‭di‬‭potassio,‬‭di‬‭m agnesio,‬‭di‬‭m anganese‬‭e‬‭di‬‭ferro.‬ ‭-‬ ‭s olubili‬‭(es.‬‭fosfati,‬‭c itrati,‬‭acetati)‬ ‭-‬ ‭insolubili‬‭(es.‬‭c arbonato‬‭di‬‭c alcio)‬ ‭-‬ ‭altri‬‭m icroelementi‬‭(‬‭Zn,‬‭Cu,‬‭etc)‬‭s ono‬‭in‬‭genere‬‭presenti‬‭c ome‬‭c ontaminanti‬‭di‬‭altri‬ ‭ingredienti.‬ ‭ ono‬‭presenti‬‭degli‬‭indicatori‬‭di:PH‬‭(ossido‬‭fenolo,‬‭butipromotinolo),‬‭ossidoriduzione‬‭e‬ S ‭idrogeno‬‭s olforato.‬ ‭ gnuna‬‭di‬‭queste‬‭s ostanze‬‭c i‬‭andrà‬‭ad‬‭indicare‬‭delle‬‭reazioni‬‭c he‬‭avvengono‬‭s olo‬‭in‬ O ‭presenza‬‭di‬‭particolari‬‭agenti‬‭patogeni‬‭(es.‬‭idrogeno‬‭s olforato‬‭s erve‬‭per‬‭individuare‬‭le‬ ‭s almonelle‬‭e‬‭le‬‭s higelle‬‭c on‬‭una‬‭precipitazione‬‭delle‬‭c olonie‬‭di‬‭c olorazione‬‭nerastra).‬ ‭Aggiungere‬‭nei‬‭terreni‬‭degli‬‭antibiotici‬‭o‬‭quantità‬‭di‬‭s ali‬‭particolari‬‭permetterà‬‭di‬‭discriminare‬ ‭alcune‬‭s pecie‬‭di‬‭batteri.‬ ‭ lassificazione‬‭in‬‭base‬‭alla‬‭funzione‬ C ‭Terreni‬‭di‬‭trasporto‬‭:‬‭permettono‬‭di‬‭trasportare‬‭e‬‭c onservare‬‭i‬‭batteri‬‭di‬‭un‬‭c ampione‬‭dal‬ ‭m omento‬‭del‬‭prelievo‬‭fino‬‭all'analisi,‬‭garantendo‬‭di‬‭m antenere‬‭i‬‭m icrorganismi‬‭v ivi‬‭e‬‭nelle‬ ‭m igliori‬‭c ondizioni‬‭per‬‭poi‬‭permetterne‬‭l’isolamento.‬ ‭ erreni‬‭di‬‭arricchimento‬‭:‬‭s fruttano‬‭s ostanze‬‭antibiotiche‬‭per‬‭favorire‬‭la‬‭c rescita‬‭di‬‭alcuni‬ T ‭m icrorganismi‬‭a‬‭s vantaggio‬‭di‬‭altri.‬‭Sono‬‭fondamentali‬‭nel‬‭c aso‬‭di‬‭m icrorganismi‬‭c he‬ ‭c rescono‬‭m olto‬‭lentamente‬‭e‬‭c he‬‭v engono‬‭generalmente‬‭isolati‬‭in‬‭distretti‬‭s terili.‬‭Inoltre,‬ ‭questi‬‭terreni‬‭s ono‬‭anche‬‭m olto‬‭utili‬‭quando‬‭v i‬‭è‬‭la‬‭necessità‬‭di‬‭andare‬‭a‬‭decontaminare‬‭il‬ ‭terreno‬‭c on‬‭particolari‬‭s ostanze‬‭e‬‭quando‬‭la‬‭c arica‬‭batterica‬‭in‬‭un‬‭c ampione‬‭è‬‭m olto‬‭bassa.‬ ‭-‬ ‭Agar‬‭s angue‬‭=‬ ‭isolamento‬‭della‬‭m aggior‬‭parte‬‭dei‬‭batteri‬‭di‬‭interesse‬‭m edico.‬ ‭-‬ ‭Agar‬‭c ioccolato‬‭=‬‭c ostituito‬‭da‬‭s angue‬‭c otto,‬‭ancora‬‭più‬‭ricco‬‭del‬‭precedente‬‭c he‬ ‭s erve‬‭per‬‭m ettere‬‭in‬‭evidenza‬‭particolari‬‭batteri.‬ ‭-‬ ‭Brodo‬‭s elenite‬‭=‬‭m antiene‬‭la‬‭c rescita‬‭m icrobica‬‭resiliente‬‭in‬‭una‬‭fase‬‭s tazionaria‬‭e‬ ‭favorisce‬‭la‬‭c rescita‬‭dei‬‭patogeni.‬‭Usato‬‭nell’isolamento‬‭della‬‭s almonella‬‭nelle‬‭feci.‬ ‭ erreni‬‭s elettivi‬‭:‬‭permettono‬‭di‬‭isolare‬‭una‬‭s ingola‬‭s pecie‬‭da‬‭un‬‭c ampione‬‭biologico‬‭c he‬‭ne‬ T ‭c ontiene‬‭diversi‬‭tipi.‬‭Esempi:‬ ‭-‬ ‭Chapman:‬‭c rescono‬‭s olo‬‭gli‬‭s tafilococchi‬‭alofili‬‭perché‬‭c ontiene‬‭7,5%‬‭NaCl.‬ ‭-‬ ‭M acConkey:‬‭possiede‬‭s ali‬‭biliari‬‭c he‬‭inibiscono‬‭i‬‭gram‬‭pos‬‭(per‬‭gli‬‭enterobatteri).‬ ‭-‬ ‭Thayer-Martin:‬‭terreno‬‭per‬‭s elezionare‬‭la‬‭Neisseria‬‭(gonorrhoeae‬‭e‬‭m eningite),‬‭ed‬‭è‬ ‭c aratterizzato‬‭da‬‭agar‬‭c ioccolato‬‭ricco‬‭di‬‭antibiotici.‬ ‭-‬ ‭SS‬‭agar‬‭(Salmonella‬‭Shigella‬‭agar):‬‭s ali‬‭biliari‬‭c he‬‭favoriscono‬‭la‬‭c rescita‬‭di‬ ‭s almonella‬‭e‬‭inibisce‬‭la‬‭c rescita‬‭di‬‭altri‬‭agenti‬‭m icrobici,‬‭c ontiene‬‭un‬‭indicatore‬‭di‬ ‭idrogeno‬‭s olforato‬‭c he‬‭identifica‬‭le‬‭c olonie‬‭c olorandole‬‭di‬‭nero.‬‭Inoltre‬‭in‬‭base‬‭alla‬ ‭c apacità‬‭dei‬‭batteri‬‭di‬‭fermentare‬‭il‬‭lattosio‬‭presente‬‭nella‬‭c ultura‬‭s e‬‭assume‬‭un‬ ‭c olore‬‭rosso‬‭neutro‬‭il‬‭pH‬‭s arà‬‭acido,‬‭s e‬‭incolore‬‭il‬‭pH‬‭s arà‬‭basico.‬ ‭-‬ ‭TCBS‬‭c holera‬‭m edium:‬‭permette‬‭l’inibizione‬‭dei‬‭gram‬‭pos‬‭e‬‭la‬‭m aggior‬‭parte‬‭delle‬ ‭enterobacteriaceae‬‭fecali.‬‭M olto‬‭s pesso‬‭s arà‬‭necessario‬‭fare‬‭un‬‭arricchimento‬‭di‬ ‭idrogeno‬‭s erenite.‬‭Le‬‭s ostanze‬‭presenti‬‭s ul‬‭terreno‬‭permettono‬‭le‬‭m igliori‬‭c ondizioni‬ ‭per‬‭il‬‭batterio‬‭per‬‭c rescere,‬‭m a‬‭anche‬‭di‬‭s elezionarlo‬‭in‬‭base‬‭alla‬‭resistenza.‬ ‭15‬  ‭-‬ ‭ abouraud‬‭agar:‬‭s elettivo‬‭per‬‭la‬‭c rescita‬‭delle‬‭c andide.‬‭È‬‭un‬‭terreno‬‭base,‬‭c on‬ S ‭l'aggiunta‬‭di‬‭antibiotici‬‭c ome‬‭gentamicina.‬ ‭-‬ ‭XLD‬‭(xilosio-lisina-desossicolato)‬‭=‬‭inibizione‬‭dei‬‭gram‬‭pos‬ ‭grazie‬‭al‬‭desossicolato,‬ ‭le‬‭c olonie‬‭s ono‬‭nere‬‭perché‬‭in‬‭questi‬‭batteri‬‭è‬‭presente‬‭l’idrogeno‬‭s olforato.‬ ‭ erreni‬‭differenziali/‬‭discriminativi‬‭:‬‭c onsentono‬‭di‬‭identificare‬‭e‬‭distinguere‬‭un‬‭batterio‬ T ‭attraverso‬‭le‬‭s ue‬‭proprietà‬‭biochimiche.‬‭M olti‬‭terreni‬‭s elettivi‬‭s ono‬‭anche‬‭differenziali.‬ ‭Q uesto‬‭tipo‬‭di‬‭terreno‬‭permette‬‭di‬‭identificare‬‭i‬‭gram‬‭negativi‬‭lattosio‬‭negativi‬‭(che‬‭rimangono‬ ‭bianchi)‬‭oppure‬‭i‬‭gram‬‭negativi‬‭lattosio‬‭positivi‬‭(diventano‬‭rosa).‬ ‭ iscriminativi‬‭=‬‭c ontengono‬‭alcune‬‭s ostanze‬‭c he‬‭permettono‬‭di‬‭evidenziare‬‭una‬‭proprietà‬ D ‭m etabolica:‬ ‭-‬ ‭Chapman‬‭=‬‭grazie‬‭a‬‭indicatori‬‭di‬‭pH‬‭s i‬‭può‬‭v edere‬‭il‬‭v iraggio‬‭di‬‭c olore‬‭dovuti‬‭al‬ ‭c onsumo‬‭di‬‭m annitolo‬‭e‬‭distinguere‬‭gli‬‭s tafilococchi‬‭aurei‬‭(colorazione‬‭gialla)‬‭da‬‭quelli‬ ‭non‬‭aurei‬‭(colorazione‬‭rossa).‬ ‭-‬ ‭CLED‬‭=‬‭permette‬‭di‬‭far‬‭c rescere‬‭tutti‬‭i‬‭batteri‬‭c he‬‭fermentano‬‭il‬‭lattosio,‬‭la‬‭v ariazione‬ ‭di‬‭c olore‬‭s arà‬‭dall’azzurro‬‭al‬‭v erde-giallino.‬ ‭-‬ ‭M cConkey‬‭=‬‭grazie‬‭alla‬‭presenza‬‭di‬‭lattosio‬‭s i‬‭possono‬‭andare‬‭a‬‭discriminare‬‭i‬ ‭batteri‬‭tra‬‭quelli‬‭c he‬‭s ono‬‭lattosio‬‭positivi‬‭o‬‭negativi‬‭in‬‭base‬‭al‬‭v iraggio.‬ ‭ romogeni‬‭=‬‭permettono‬‭in‬‭base‬‭al‬‭v iraggio‬‭del‬‭c olore‬‭del‬‭terreno‬‭di‬‭identificare‬‭c he‬‭tipo‬‭di‬ C ‭batterio‬‭s i‬‭s tia‬‭analizzando:‬ ‭-‬ ‭CHROMagar‬‭O rientation‬‭=‬‭permette‬‭di‬‭andare‬‭ad‬‭isolare‬‭ed‬‭identificare‬‭diversi‬‭batteri‬ ‭c he‬‭possono‬‭c olonizzare‬‭il‬‭tratto‬‭urinario,‬‭in‬‭base‬‭al‬‭c olore‬‭s arà‬‭c resciuto‬‭un‬ ‭determinato‬‭batterio.‬ ‭-‬ ‭CHROMager‬‭O 157‬‭=‬‭identificazione‬‭in‬‭base‬‭al‬‭v iraggio‬‭s i‬‭identifica‬‭l’‬‭E.Coli‬‭c on‬ ‭l’antigene‬‭O 157‬‭in‬‭quanto‬‭enteroemorragico.‬ ‭-‬ ‭CHROMager‬‭M RSA‬‭=‬‭grazie‬‭al‬‭c olore‬‭della‬‭c olonia‬‭permette‬‭di‬‭distinguere‬‭lo‬ ‭s tafilococco‬‭m eticillino‬‭s ensibili‬‭(azzurro)‬‭dal‬‭m eticillino‬‭resistenti‬‭(rosso).‬ ‭ eminazione‬ S ‭La‬‭prima‬‭c osa‬‭da‬‭fare‬‭è‬‭prelevare‬‭una‬‭quantità‬‭di‬‭c ampione,‬‭depositarla‬‭s u‬‭un‬‭lato‬‭della‬ ‭piastra‬‭c on‬‭un'ansa‬‭s terile,‬‭lasciare‬‭in‬‭incubazione‬‭e‬‭osservare‬‭la‬‭c rescita‬‭delle‬‭c olonie.‬ ‭La‬‭s emina‬‭s u‬‭terreni‬‭s olidi‬‭può‬‭essere‬‭eseguita‬‭s eguendo‬‭due‬‭diverse‬‭m etodologie:‬ ‭-‬ ‭Con‬‭dei‬‭m ovimenti‬‭dall'alto‬‭v erso‬‭il‬‭basso‬‭andando‬‭da‬‭s x‬‭a‬‭dx‬‭fino‬‭a‬‭c irca‬ ‭m età‬‭piastra.‬‭Successivamente‬‭s i‬‭gira‬‭la‬‭piastra‬‭e‬‭s i‬‭s emina‬‭nello‬‭s tesso‬ ‭m odo.‬‭Si‬‭effettua‬‭un’ultima‬‭rotazione‬‭e‬‭s emina.‬ -‭ ‬ ‭Se‬‭s i‬‭effettua‬‭una‬‭s emina‬‭per‬‭inclusione,‬‭v iene‬‭prima‬‭inserito‬‭il‬ ‭c ampione‬‭e‬‭s uccessivamente‬‭s i‬‭v ersa‬‭il‬‭terreno‬‭preparato.‬‭Q uando‬ ‭quest’ultimo‬‭s olidificherà,‬‭il‬‭c ampione‬‭darà‬‭incluso‬‭nelle‬‭m aglie‬ ‭dell’agar.‬ ‭-‬ ‭ ei‬‭terreni‬‭liquidi‬‭s i‬‭effettua‬‭il‬‭prelievo‬‭e‬‭dopo‬‭aver‬‭s terilizzato‬‭l’ansa‬‭e‬ N ‭l’apertura‬‭della‬‭provetta‬‭s u‬‭una‬‭fiamma,‬‭s i‬‭immerge‬‭l’ansa‬‭c on‬‭il‬‭c ampione‬ ‭nel‬‭brodo.‬‭Si‬‭s terilizza‬‭nuovamente‬‭e‬‭s i‬‭richiude.‬ ‭16‬ ‭ etodi‬‭di‬‭c onta‬ M ‭La‬‭c onta‬‭dei‬‭batteri‬‭può‬‭essere‬‭fatta‬‭s ia‬‭direttamente‬‭c he‬‭indirettamente.‬‭A‬‭v olte‬‭v engono‬ ‭fatte‬‭delle‬‭diluizioni‬‭nel‬‭c aso‬‭in‬‭c ui‬‭la‬‭c oltura‬‭risulta‬‭essere‬‭troppo‬‭c oncentrata.‬ ‭-‬ ‭In‬‭m odo‬‭diretto‬‭s i‬‭può‬‭c ontare‬‭il‬‭numero‬‭di‬‭c ellule‬‭totali,‬‭s ia‬‭v ive‬‭c he‬‭m orte,‬‭grazie‬ ‭all’ausilio‬‭della‬‭c amera‬‭di‬‭petroff-hausser‬‭v iste‬‭al‬‭m icroscopio‬‭oppure‬‭c on‬‭c ontatori‬ ‭automatici.‬ ‭-‬ ‭O ppure‬‭s i‬‭può‬‭effettuare‬‭una‬‭c onta‬‭v itale‬‭s olamente‬‭delle‬‭c ellule‬‭in‬‭grado‬‭di‬‭dividersi.‬ ‭-‬ ‭In‬‭m odo‬‭indiretto‬‭s i‬‭m isura‬‭la‬‭torbidità‬‭del‬‭terreno‬‭liquido‬‭attraverso‬‭lo‬ ‭s pettrofotometro‬‭c he‬‭permette‬‭di‬‭v alutare‬‭l’indice‬‭di‬‭c rescita‬‭della‬‭c oltura.‬‭La‬‭luce‬ ‭c olpisce‬‭un‬‭prisma‬‭c he‬‭dà‬‭origine‬‭ad‬‭una‬‭luce‬‭incidente‬‭c he‬‭attraverserà‬‭il‬‭c ampione‬ ‭dando‬‭origine‬‭ad‬‭un‬‭altro‬‭fascio‬‭di‬‭luce‬‭c he‬‭a‬‭s ua‬‭v olta‬‭ha‬‭una‬‭s ua‬‭lunghezza‬‭d’onda.‬ ‭Q uesto‬‭fascio‬‭v errà‬‭c aptato‬‭da‬‭una‬‭fotocellula‬‭e‬‭raccolto‬‭in‬‭un‬‭registratore.‬‭Il‬‭risultato‬ ‭ottenuto‬‭v errà‬‭definito‬‭densità‬‭ottica.‬ ‭ terilizzazione‬ S ‭Q uando‬‭s i‬‭lavora‬‭c on‬‭batteri‬‭bisogna‬‭s tare‬‭attenti‬‭a‬‭non‬‭infettarsi‬‭e‬‭a‬‭non‬‭disperderli‬ ‭nell’ambiente;‬‭è‬‭quindi‬‭importante‬‭pensare‬‭ai‬‭m eccanismi‬‭di‬‭s terilizzazione.‬‭A‬‭s econda‬‭della‬ ‭natura‬‭dell’oggetto‬‭v i‬‭s ono‬‭diverse‬‭m odalità‬‭per‬‭farlo.‬‭Esistono‬‭due‬‭tipi‬‭di‬‭m etodi:‬ ‭I‬‭metodi‬‭fisici‬‭s fruttano‬‭la‬‭radiazione,‬‭la‬‭filtrazione‬‭ed‬‭il‬‭c alore‬‭s ecco‬‭o‬‭umido.‬ ‭-‬ ‭Diretta‬‭alla‬‭fiamma‬‭=‬‭s u‬‭anse‬‭e‬‭imboccature‬‭delle‬‭provette.‬ ‭-‬ ‭Stufe‬‭a‬‭s ecco‬‭(180°/1h)‬‭=‬‭utilizzata‬‭per‬‭m ateriali‬‭di‬‭m etallo‬‭o‬‭v etreria.‬ ‭-‬ ‭Incenerimento‬‭=‬‭quando‬‭s i‬‭ha‬‭un‬‭m ateriale‬‭particolarmente‬‭c ontaminante.‬ ‭-‬ ‭Calore‬‭umido‬‭o‬‭ebollizione‬‭(100°/‬‭10‬‭m in)‬‭=‬‭elimina‬‭i‬‭batteri,‬‭m a‬‭non‬‭le‬‭s pore.‬ ‭-‬ ‭Vapore‬‭s otto‬‭pressione‬‭(autoclave)‬‭(121°/‬‭15‬‭m in)‬‭=‬‭l’autoclave‬‭funziona‬‭esattamente‬ ‭c ome‬‭una‬‭pentola‬‭a‬‭pressione,‬‭s i‬‭c hiude‬‭il‬‭tappo‬‭in‬‭m odo‬‭ermetico‬‭e‬‭tramite‬‭una‬ ‭v alvola‬‭fuoriesce‬‭l’aria‬‭presente‬‭all’interno‬‭della‬‭pentola.‬‭Chiudendo‬‭la‬‭v alvola‬‭s i‬ ‭c reerà‬‭il‬‭v apore,‬‭c he‬‭penetrando‬‭permetterà‬‭la‬‭s terilizzazione.‬‭Sterilizza‬‭quasi‬‭ogni‬ ‭c osa,‬‭tranne‬‭le‬‭s ostanze‬‭termolabili‬‭c he‬‭v engono‬‭denaturate‬‭o‬‭distrutte‬‭a‬‭queste‬ ‭temperature.‬ ‭-‬ ‭Calore‬‭s ecco‬‭in‬‭forno‬‭ad‬‭aria‬‭c alda‬‭(160°/‬‭2h‬‭o‬‭170°/‬‭1h)‬‭=‬‭usato‬‭per‬‭v etreria,‬‭m etallo‬ ‭e‬‭oggetti‬‭c he‬‭non‬‭fondono.‬ ‭-‬ ‭Pastorizzazione‬‭(62,8°/‬‭30‬‭m in‬‭o‬‭75°/‬‭20‬‭s ec)‬‭=‬‭utilizzato‬‭per‬‭determinate‬‭bevande‬ ‭(latte,‬‭birra,‬‭v ino).‬‭Non‬‭è‬‭un‬‭v ero‬‭e‬‭proprio‬‭m etodo‬‭di‬‭s terilizzazione‬‭in‬‭quanto‬‭v iene‬ ‭applicata‬‭per‬‭ridurre‬‭la‬‭c arica‬‭batterica.‬‭Consente‬‭di‬‭uccidere‬‭i‬‭c omuni‬‭patogeni‬‭c ome‬ ‭i‬‭batteri‬‭della‬‭tubercolosi,‬‭s almonelle‬‭e‬‭s treptococchi.‬ ‭-‬ ‭Raggi‬‭UV‬‭=‬‭usati‬‭per‬‭s terilizzare‬‭l’aria‬‭e‬‭le‬‭s uperfici‬‭non‬‭porose‬‭delle‬‭s ale‬‭operatorie‬ ‭o‬‭nei‬‭locali‬‭dell’industria‬‭farmaceutica‬‭e‬‭alimentare.‬ ‭-‬ ‭Filtrazione‬‭=‬‭usata‬‭per‬‭rendere‬‭s terili‬‭delle‬‭s oluzioni‬‭liquide‬‭c ontenenti‬‭delle‬‭s ostanze‬ ‭labili.‬‭Non‬‭è‬‭in‬‭grado‬‭di‬‭assicurare‬‭la‬‭s terilizzazione‬‭c ompleta‬‭in‬‭quanto‬‭v irus‬‭e‬ ‭m icoplasmi‬‭possono‬‭attraversare‬‭i‬‭filtri.‬ I‭‬‭metodi‬‭chimici‬‭riguardano‬‭invece‬‭l’utilizzo‬‭di‬‭disinfettanti‬‭s u‬‭oggetti‬‭inanimati,‬‭in‬‭quanto‬ ‭distruggono‬‭m icrorganismi‬‭e‬‭antisettici‬‭s u‬‭tessuti‬‭biologici‬‭animali‬‭e‬‭umani‬‭(es.‬‭acqua‬ ‭ossigenata).‬ ‭17‬ ‭ ntibiogramma‬ A ‭L’antibiogramma‬‭s erve‬‭a‬‭s tabilire‬‭s e‬‭il‬‭batterio‬‭è‬‭s ensibile‬‭ai‬‭farmaci.‬‭Q uesto‬‭approccio‬‭è‬ ‭fondamentale‬‭per‬‭trattare‬‭in‬‭m odo‬‭m irato‬‭le‬‭infezioni‬‭batteriche,‬‭evitando‬‭l’uso‬‭eccessivo‬‭o‬ ‭inutile‬‭di‬‭antibiotici‬‭e‬‭prevenendo‬‭lo‬‭s viluppo‬‭di‬‭resistenze‬‭batteriche.‬ ‭La‬‭M IC‬‭è‬‭la‬‭c oncentrazione‬‭m inima‬‭di‬‭un‬‭antibiotico‬‭c he‬‭inibisce‬‭la‬‭c rescita‬‭v isibile‬‭del‬ ‭batterio.‬‭Q uesto‬‭v alore‬‭permette‬‭di‬‭c lassificare‬‭il‬‭batterio‬‭c ome‬‭s ensibile,‬‭intermedio‬‭o‬ ‭resistente‬‭a‬‭un‬‭determinato‬‭antibiotico.‬‭LA‬‭M IC‬‭v iene‬‭m isurata‬‭tramite‬‭diversi‬‭m etodi:‬ ‭ -test‬‭=‬‭v iene‬‭posizionata‬‭una‬‭s triscia‬‭di‬‭plastica‬‭impregnata‬‭da‬‭un‬‭gradiente‬‭c alibrato‬‭di‬ E ‭antibiotico‬‭s ulla‬‭piastra‬‭s eminata,‬‭lo‬‭s i‬‭m ette‬‭ad‬‭incubare‬‭e‬‭quello‬‭c he‬‭andrò‬‭ad‬‭osservare‬‭è‬ ‭un‬‭alone.‬‭Il‬‭punto‬‭in‬‭c ui‬‭la‬‭c rescita‬‭del‬‭batterio‬‭v iene‬‭c ompletamente‬‭inibita‬‭lungo‬‭la‬‭s triscia‬ ‭indica‬‭la‬‭M IC.‬‭L’alone‬‭di‬‭resistenza‬‭di‬‭grandezza‬‭c rescente‬‭s i‬‭forma‬‭m an‬‭m ano‬‭c he‬‭la‬ ‭c oncentrazione‬‭dell’antibiotico‬‭aumenta.‬‭Se‬‭il‬‭batterio‬‭è‬‭resistente,‬‭l’alone‬‭s arà‬‭più‬‭piccolo‬‭o‬ ‭assente.‬ ‭ irby-Bauer‬‭=‬‭posiziono‬‭s ulla‬‭piastra‬‭c oltivata‬‭dei‬‭dischetti‬‭di‬‭c arta‬‭impregnati‬‭di‬‭antibiotici‬ K ‭differenti.‬‭Si‬‭procede‬‭incubando‬‭per‬‭una‬‭notte‬‭a‬‭37°C‬‭e‬‭il‬‭giorno‬‭dopo‬‭s i‬‭può‬‭osservare‬‭c he‬‭il‬ ‭batterio‬‭c resce‬‭ovunque,‬‭tranne‬‭attorno‬‭ai‬‭dischetti‬‭c ontenenti‬‭antibiotici‬‭ai‬‭quali‬‭è‬‭s ensibile,‬ ‭formando‬‭un‬‭alone‬‭di‬‭inibizione.‬‭L'ampiezza‬‭dell'alone‬‭indica‬‭la‬‭s ensibilità‬‭del‬‭batterio.‬‭Un‬ ‭batterio‬‭m ultiresistente‬‭m ostrerà‬‭aloni‬‭di‬‭inibizione‬‭s olo‬‭attorno‬‭a‬‭pochi‬‭antibiotici‬‭o‬‭nessuno.‬ ‭Esso‬‭non‬‭fornisce‬‭però‬‭la‬‭M IC,‬‭m a‬‭c onsidera‬‭s olamente‬‭la‬‭s ensibilità.‬ ‭ itek‬‭=‬‭il‬‭c ampione‬‭batterico‬‭v iene‬‭inserito‬‭in‬‭piccole‬‭s chede‬‭di‬‭plastica‬‭c ontenenti‬ V ‭v ari‬‭terreni‬‭di‬‭c rescita.‬‭Un‬‭fotometro‬‭m isura‬‭i‬‭c ambiamenti‬‭di‬‭c olore‬‭nei‬‭pozzetti,‬ ‭derivanti‬‭dall’attività‬‭m etabolica‬‭del‬‭batterio‬‭in‬‭risposta‬‭ai‬‭diversi‬‭antibiotici.‬‭I‬‭dati‬ ‭ottenuti‬‭v engono‬‭analizzati‬‭in‬‭un‬‭database‬‭c omputerizzato‬‭in‬‭m odo‬‭rapido.‬ ‭ aldi-tof‬‭=‬‭prelevo‬‭la‬‭c olonia‬‭di‬‭interesse‬‭e‬‭la‬‭m etto‬‭nel‬‭pozzetto‬‭aggiungendo‬‭una‬‭m atrice.‬ M ‭Irradio‬‭i‬‭pozzetti‬‭e‬‭la‬‭m atrice‬‭in‬‭m odo‬‭c he‬‭il‬‭c ampione‬‭ionizzato‬‭passa‬‭in‬‭un‬‭tubo‬‭e‬‭v iene‬ ‭identificato‬‭m eccanicamente‬‭in‬‭base‬‭al‬‭tempo‬‭di‬‭v olo‬‭e‬‭alla‬‭grandezza.‬‭Viene‬‭infine‬‭dato‬ ‭c ome‬‭risultato‬‭uno‬‭s pettro‬‭di‬‭assorbimento,‬‭c he‬‭v errà‬‭c onfrontato‬‭in‬‭un‬‭database‬‭c ontenente‬ ‭quello‬‭di‬‭s pecie‬‭già‬‭note‬‭ed‬‭identificate.‬ ‭ etodi‬‭diagnostici‬ M ‭La‬‭s celta‬‭del‬‭m etodo‬‭diagnostico‬‭dipende‬‭da:‬ ‭-‬ ‭fasi‬‭della‬‭m alattia:‬‭l’infezione‬‭può‬‭trovarsi‬‭in‬‭una‬‭fase‬‭acuta‬‭o‬‭c ronica;‬ ‭-‬ ‭c aratteristiche‬‭del‬‭batterio:‬‭alcuni‬‭batteri‬‭richiedono‬‭test‬‭s pecifici‬‭per‬‭essere‬ ‭identificati;‬ ‭-‬ ‭v alore‬‭diagnostico‬‭del‬‭titolo‬‭anticorpale:‬‭s i‬‭m isurano‬‭gli‬‭anticorpi‬‭prodotti‬‭dal‬‭paziente;‬ ‭-‬ ‭tipo‬‭di‬‭test:‬‭s i‬‭può‬‭s cegliere‬‭tra‬‭test‬‭diretti‬‭(ricerca‬‭del‬‭patogeno)‬‭o‬‭indiretti‬ ‭(misurazione‬‭della‬‭risposta‬‭immunitaria‬‭del‬‭paziente).‬ ‭Immunofluorescenza‬‭=‬‭permette‬‭di‬‭v isualizzare‬‭direttamente‬‭il‬‭batterio‬ ‭-‬ ‭diretta:‬‭s i‬‭usano‬‭anticorpi‬‭s pecifici‬‭m arcati‬‭c on‬‭un‬‭fluorocromo‬‭c he‬‭s i‬‭legano‬ ‭direttamente‬‭agli‬‭antigeni‬‭batterici.‬ ‭-‬ ‭indiretta:‬‭un‬‭anticorpo‬‭primario‬‭s i‬‭lega‬‭all'antigene,‬‭s eguito‬‭da‬‭un‬‭anticorpo‬‭s econdario‬ ‭m arcato‬‭c he‬‭s i‬‭lega‬‭al‬‭primo,‬‭amplificando‬‭il‬‭s egnale.‬ ‭18‬ ‭ lisa‬‭=‬‭è‬‭una‬‭tecnica‬‭per‬‭identificare‬‭la‬‭presenza‬‭di‬‭un‬‭patogeno‬‭o‬‭di‬‭anticorpi.‬ E ‭Il‬‭c ampione‬‭v iene‬‭inserito‬‭in‬‭dei‬‭pozzetti‬‭c ontenenti‬‭anticorpi‬‭di‬‭c attura‬ ‭s pecifici.‬‭Un‬‭s econdo‬‭anticorpo‬‭m arcato‬‭c on‬‭un‬‭enzima‬‭(perossidasi)‬‭v iene‬ ‭aggiunto‬‭per‬‭legarsi‬‭al‬‭patogeno.‬‭Viene‬‭aggiunto‬‭un‬‭s ubstrato‬‭c he,‬‭ossidato‬ ‭dall'enzima,‬‭produce‬‭una‬‭reazione‬‭c olorimetrica‬‭v erso‬‭il‬‭c olore‬‭azzurro.‬ ‭La‬‭reazione‬‭v iene‬‭bloccata‬‭tramite‬‭acido‬‭s olforico‬‭e‬‭il‬‭risultato‬‭v iene‬‭letto‬ ‭tramite‬‭un‬‭lettore‬‭di‬‭piastra.‬ ‭ LISA‬‭indiretto‬‭è‬‭una‬‭v ariante‬‭c he‬‭s i‬‭utilizza‬‭principalmente‬‭per‬‭rilevare‬‭la‬‭presenza‬‭di‬ E ‭anticorpi‬‭s pecifici‬‭in‬‭un‬‭c ampione,‬‭c ome‬‭nel‬‭s iero.‬‭L'ELISA‬‭indiretto‬‭s i‬‭c oncentra‬‭s ulla‬ ‭rilevazione‬‭della‬‭risposta‬‭immunitaria‬‭dell'organismo‬‭c ontro‬‭un‬‭determinato‬‭antigene.‬ I‭‬‭pozzetti‬‭di‬‭una‬‭piastra‬‭di‬‭ELISA‬‭v engono‬‭rivestiti‬‭c on‬‭l'antigene‬‭di‬‭interesse‬‭(‬‭proteina‬‭o‬ ‭patogeno‬‭c ontro‬‭c ui‬‭s i‬‭v uole‬‭v erificare‬‭la‬‭presenza‬‭di‬‭anticorpi‬‭nel‬‭c ampione).‬‭Il‬‭c ampione‬ ‭v iene‬‭aggiunto‬‭ai‬‭pozzetti.‬‭Se‬‭c ontiene‬‭anticorpi‬‭s pecifici‬‭per‬‭l'antigene‬‭legato,‬‭questi‬‭s i‬ ‭legheranno‬‭all'antigene‬‭s ul‬‭fondo‬‭del‬‭pozzetto.‬‭Viene‬‭effettuato‬‭un‬‭lavaggio‬‭per‬‭rimuovere‬ ‭anticorpi‬‭o‬‭altre‬‭proteine‬‭non‬‭legate‬‭e‬‭v iene‬‭introdotto‬‭un‬‭anticorpo‬‭s econdario‬‭s pecifico‬‭per‬ ‭gli‬‭anticorpi‬‭del‬‭c ampione.‬‭Q uesto‬‭anticorpo‬‭s econdario‬‭è‬‭c oniugato‬‭c on‬‭un‬‭enzima‬‭(come‬‭la‬ ‭perossidasi‬‭o‬‭l'enzyme‬‭alcalino).‬ ‭ i‬‭effettua‬‭una‬‭reazione‬‭enzimatica‬‭aggiungendo‬‭un‬‭s ubstrato‬‭c he‬‭l'enzima‬‭legato‬ S ‭all'anticorpo‬‭s econdario‬‭può‬‭c onvertire‬‭in‬‭un‬‭prodotto‬‭c olorato.‬‭L'intensità‬‭del‬‭c olore‬ ‭s viluppato,‬‭proporzionale‬‭alla‬‭quantità‬‭di‬‭anticorpi‬‭presenti‬‭nel‬‭c ampione,‬‭v iene‬‭m isurata‬‭c on‬ ‭un‬‭lettore‬‭di‬‭piastre‬‭ELISA.‬‭Più‬‭anticorpi‬‭s pecifici‬‭s ono‬‭presenti,‬‭più‬‭forte‬‭s arà‬‭il‬‭s egnale‬‭di‬ ‭c olore.‬ ‭ estern‬‭blot‬‭=‬‭permette‬‭di‬‭rilevare‬‭la‬‭presenza‬‭di‬‭anticorpi‬‭nel‬‭s iero‬‭e‬‭c onfermare‬‭un‬‭primo‬ W ‭test‬‭ELISA‬‭(come‬‭nell'HIV)‬‭perché‬‭c onsente‬‭la‬‭v isualizzazione‬‭dei‬‭s ingoli‬‭antigeni‬‭c ontro‬‭c ui‬ ‭è‬‭rivolta‬‭la‬‭risposta‬‭anticorpale.‬ ‭Viene‬‭effettuata‬‭un‬‭elettroforesi‬‭dove‬‭le‬‭proteine‬‭v engono‬‭s eparate‬‭in‬‭base‬‭alle‬‭dimensioni.‬ ‭Vengono‬‭poi‬‭trasferite‬‭s u‬‭una‬‭m embrana‬‭di‬‭blotting‬‭in‬‭nitrocellulosa‬‭s aggiata‬‭c on‬‭un‬ ‭anticorpo‬‭primario‬‭s pecifico.‬‭Si‬‭blocca‬‭c on‬‭l’ausilio‬‭di‬‭un‬‭tampone‬‭per‬‭impedire‬‭il‬‭legame‬ ‭anticorpo-membrana.‬‭La‬‭m embrana‬‭v iene‬‭incubata‬‭c on‬‭anticorpi‬‭s pecifici‬‭per‬‭rilevare‬‭la‬ ‭presenza‬‭di‬‭proteine‬‭patogene,‬‭v isualizzate‬‭usando‬‭un‬‭s istema‬‭di‬‭c olorazione‬‭o‬‭di‬ ‭c hemiluminescenza.‬ ‭ gglutinazione‬‭=‬‭è‬‭un‬‭m etodo‬‭rapido‬‭per‬‭rilevare‬‭la‬‭presenza‬‭di‬‭un‬‭patogeno‬‭o‬‭di‬‭anticorpi.‬ A ‭Si‬‭utilizzano‬‭particelle‬‭di‬‭lattice‬‭rivestite‬‭di‬‭anticorpi‬‭s pecifici.‬‭Se‬‭il‬‭c ampione‬‭c ontiene‬‭il‬ ‭patogeno,‬‭s i‬‭osserva‬‭la‬‭formazione‬‭di‬‭agglomerati‬‭v isibili‬‭(o‬‭flocculi).‬ ‭Esempi‬‭di‬‭test‬‭s ono‬‭la‬‭reazione‬‭di‬‭Widal‬‭per‬‭diagnosticare‬‭infezioni‬‭da‬‭Salmonella‬‭e‬‭la‬ ‭reazione‬‭di‬‭Wasserman‬‭per‬‭la‬‭s ifilide.‬ ‭ eazione‬‭di‬‭Neufeld‬‭=‬‭è‬‭utilizzata‬‭per‬‭evidenziare‬‭la‬‭c apsula‬‭dei‬‭batteri,‬‭c ome‬‭lo‬ R ‭pneumococco‬‭(streptococcus‬‭pneumoniae).‬?