Laboratorio de Microbiología para Ciencias de la Salud - Presentacion 1 Agosto 2024 - PDF

HESC 207L: Laboratorio de Microbiología para Ciencias de la Salud PROF. ARMANDO ALBINO PRESENTACION 1 AGOSTO, 2024 Introducción a la Microbiología Temas de hoy: ▪ Normas y conducta en el laboratorio...

HESC 207L: Laboratorio de Microbiología para Ciencias de la Salud PROF. ARMANDO ALBINO PRESENTACION 1 AGOSTO, 2024 Introducción a la Microbiología Temas de hoy: ▪ Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología ▪ Vestimenta ▪ Seguridad ▪ Uso del equipo de laboratorio ▪ Limpieza del laboratorio ▪ Conducta en el laboratorio ▪ Microscopia ▪ Información general ▪ Partes del microscopio ▪ Tipos de microscopios ▪ Uso del microscopio Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología Vestimenta Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Vestimenta  Es compulsorio el uso de bata de laboratorio limpia, gafas o espejuelos de seguridad y zapatos cerrados.  La bata debe mantenerse abotonada en todo momento dentro del laboratorio.  Se usarán gafas de seguridad, mascarillas y guantes cuando sean requeridos.  No se recomienda el uso de pantalones cortos y/o faldas cortas.  El pelo largo debe mantenerse recogido siempre. No se permite el uso de gorras.  Debe notificar si va a salir del laboratorio una vez haya comenzado el mismo. Si lo hace, remuévase la bata antes de salir del laboratorio. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología Seguridad Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Seguridad  No comer ni ingerir bebidas (incluyendo agua) dentro del laboratorio.  En el laboratorio de microbiología, todo cultivo será manejado como patógenos potenciales, entiéndase, organismos causantes de enfermedades.   Deberá rotular e identificar debidamente todos los materiales y/o cultivos que utilice en los laboratorios.  Cultivos líquidos, deben ser colocados en gradillas.  Si se derrama algún cultivo líquido o se rompe un tubo inoculado con cualquier microorganismo, se deberá cubrir el área con papel toalla y desinfectante por lo menos por 15 min. Luego, deberá remover y descartar éste según las instrucciones del instructor. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Seguridad  Si un cultivo liquido se derrama sobre la mesa de laboratorio o el piso, proceda de la siguiente manera:  Notifique al profesor y los presentes en el laboratorio.  Coloque papel absorbente sobre el derrame y añada desinfectante directamente por 5 minutos.  Usando guantes, remueva el papel absorbente y descarte en un contenedor para material biopeligroso.  Añada más desinfectante en la mesa o piso, seque con mas papel absorbente hasta que este seco y limpio. Descarte en un contenedor para material biopeligroso.  Si el derrame es sobre su bata, remuévala inmediatamente y notifíquele a al profesor para las acciones necesarias. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Seguridad  En todo momento se debe evitar accidentes. En caso de que estos ocurran, infórmelo inmediatamente al profesor encargado del laboratorio  En caso de romperse cristalería, ésta no deberá ser removida por el estudiante. Informe al profesor y evite que alguien entre en contacto con los vidrios.  Al colocar las pipetas en los pipeteadores, recuerde no forzarlas para evitar que se rompan.  Si usa micropipeteadores, al terminar de usarlos, ajuste los micropipeteadores en el volumen máximo.  Deberá conocer la ubicación de los equipos de seguridad, tales como la manta, los extinguidores y el botiquín de primeros auxilios. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Seguridad  Deberá conocer la ubicación de las salidas de emergencia y rutas de desalojos.  De surgir alguna emergencia (fuego, escape de gas, terremoto, etc.) deberá abandonar el laboratorio en orden a la mayor brevedad posible siguiendo las debidas instrucciones.  No se permite ningún estudiante trabajando sin supervisión en el laboratorio, ni fuera de horas laborables. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología Uso de equipo de laboratorio Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Uso de equipo de laboratorio  Nunca deberá pipetear con la boca.  Abra los tanques de gas, vacío o de agua apropiadamente, tomando las debidas precauciones y solamente si va a hacer uso de las mismas.  Sobre el uso del microscopio:  Al usarlo, cárguelo apropiadamente tomándolo por el brazo y por la base.  Antes de guardarlo en el anaquel, el estudiante revisará que esté colocado con la platina en la posición más baja, con el objetivo de menor magnificación (en algunos es 4X y en otros, 10X) y sin residuos de aceite de inmersión.  Deberán reportar cualquier anomalía en el microscopio al encargado del grupo antes de abandonar el laboratorio. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Uso de equipo de laboratorio  Se prohíbe la manipulación de equipo (autoclaves, gabinetes de flujo laminar, microscopio, etc.) sin la debida autorización y supervisión.  Las hojas de seguridad (“Safety Data Sheet”) estarán ubicadas en un lugar visible y accesible en el laboratorio. Debe asegurarse de conocer su localización. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología Limpieza del laboratorio Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Limpieza del laboratorio  No vierta químicos ni materiales biológicos por el fregadero.  Utilice el envase que haya sido provisto por el profesor para descarte biológico y de materiales.  Mantenga despejadas las mesas de trabajo y pasillos entre las mesas.  Al terminar el laboratorio deberá limpiar su área de trabajo con desinfectante, si ha trabajado con algún microorganismo.  Deberá lavarse las manos con agua y jabón antes de comenzar y después de terminar el laboratorio. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Limpieza del laboratorio  Debe lavarse las manos con agua y jabón antes de comenzar el laboratorio y después de terminar el mismo.  Una vez terminada su tarea, remueva todo el material utilizado, devuelva todo el equipo a su lugar, recoja toda la basura o desperdicios y deposítelos donde se le indique o corresponda. Recuerde colocar las sillas o banquetas debajo de las mesas.  Todo desperdicio sólido o líquido (materiales insolubles, trozos de vidrio, etc.) deberán desecharse en los envases apropiados. El instructor le indicará qué se considera material “biohazard” y cómo se descartará. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología Conducta en el laboratorio Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Conducta en el laboratorio  El uso de celulares está prohibido dentro del laboratorio. Se sugiere que se coloquen en modo de vibrar, silencioso o lo apague antes de entrar al laboratorio.  Los estudiantes deben observar un comportamiento que no interrumpa las actividades del laboratorio.  El uso de lenguaje inapropiado o irrespetuoso está totalmente prohibido.  Se ofrecerán pruebas cortas que evaluarán los objetivos de laboratorios previos. Aquel estudiante que por algún motivo haya faltado a una de las pruebas cortas, solo podrá reponerlo con excusa justificada. Normas y conducta en el laboratorio de Microbiología  Conducta en el laboratorio  El plagio está considerado como una grave infracción del comportamiento académico. En los casos más serios, el Decano de la Escuela adoptará las medidas apropiadas (Manual de Normas Académicas y Administrativas de Programas Sub-graduados de la UAGM, Recinto de Carolina).  Aquellos estudiantes que necesiten acomodos razonables debido a situaciones físicas, médicas o de aprendizajes extraordinarios y evidenciados, así como por sus creencias religiosas, deben comunicar su necesidad al profesor para proceder con las autorizaciones correspondientes. http://www.suagm.edu/une/srtk/pdf/Reglamento_Estudiantil.pdf Microscopia Microscopia Información General Microscopia  El Microscopio  Del griego μικρός micrós, 'pequeño', y σκοπέω scopéo, 'mirar’.  El microscopio es un instrumento óptico que combina un sistema de lentes de gran aumento para observar objetos que no se ven a simple.  Tipos de Microscopios  Microscopio de luz  Microscopios de Fluorescencia  Microscopio Electrónico  Otros Microscopia  Fundadores de la microscopia  Zaccharias y Hans Janssen  Fueron un equipo de padre e hijo holandeses manufactureros de espejuelos alrededor de 1590.  Descubrieron que las imágenes se pueden agrandar usando diferentes lentes.  Su primer microscopio fue un microscopio compuesto que consistía de un tubo simple con lentes en cada extremo. Microscopia  Fundadores de la microscopia  Antony van Leeuwenhoek (1632-1723)  Holandés considerado el padre del microscopio y el primer observador de bacterias y protozoos por lo que se le conoce como el padre de la microbiología.  El microscopio que uso contenía solo un lente convexo por lo que se le conoce como microscopio simple.  Fue capaz de observar lo que llamo “animálculos”.  Publicó sus observaciones en 1678 en una carta dirigida a la Sociedad Real de Londres. Microscopia  Fundadores de la microscopia  Robert Hooke (1635-1703)  Científico ingles con increíbles capacidades en ingeniería y gran interés por las ciencias.  Mejoró el diseño del microscopio compuesto.  Publico sus observaciones con magníficos dibujos en su libro Micrographia.  Le fue solicitado por la Real Sociedad de Londres el confirmar loa hallazgos de Antony van Leeuwenhoek sobre los “animálculos”, lo cual logro exitosamente. Microscopia Partes del microscopio Microscopia  Partes del Microscopio  Oculares  Elemento óptico que proporciona la segunda etapa de aumento de imagen.  Tubo  Pieza unida al brazo que conecta el ocular con los objetivos  Brazo  Pieza intermedia que conecta todas las partes  Revolver  Pieza giratoria que sostiene los objetivos Microscopia  Partes del Microscopio  Objetivos  Conjunto de lentes mas cercano a la muestra que proveen la primera etapa de aumento  Platina  Pieza donde se coloca la muestra a observar. Tiene las pinzas que sujetan la laminilla.  Condensador  Se encarga de concentrar los rayos de luz  Diafragma  Permite regular la cantidad de luz Microscopia  Partes del Microscopio  Fuente de Luz  Genera haz de luz dirigido a la muestra  Tornillo Macrométrico  Tornillo de ajuste vertical para el enfoque primario  Tornillo Micrométrico  Tornillo de ajuste preciso o fino  Pie o base  Parte inferior que sirve de soporte del instrumento Microscopia Tipos de microscopio Microscopia  Tipos de microscopios  Con el avance de la tecnología, el desarrollo de microscopios para diferentes usos fue posible.  Microscopios de luz  Utilizan luz visible para iluminar y lentes ópticos para agrandar y observar las imágenes de los especímenes.  Se clasifican como simples o compuestos  Simple: tienen un solo lente magnificador y una fuente de luz visible; tiene un poder de magnificación de 226X.  Compuesto: tiene múltiples lentes para magnificar; usa luz visible de una fuente eléctrica Microscopia  Tipos de microscopios  Microscopio de campo brillante (Bright-field)  Es un microscopio compuesto que se usa para observar especímenes y algunos de sus detalles.  Provee un fondo mas brillante que el espécimen y es dependiente de la alteración del paso de luz solamente (refracción).  La mayoría de los especímenes requieren tinción para mejor estudio.  Se utilizan mayormente para observar secciones de tejido teñido, órganos y microorganismos. Microscopia  Tipos de microscopios  Microscopio de campo oscuro (Dark-field)  Especímenes no fijados y no teñidos, como organismo vivos, se pueden observar en este microscopio.  La luz se detiene en el condensador previniendo pasar directamente por el espécimen. Sin embargo, la luz que pasa por los márgenes del condensador chocan con el espécimen en un ángulo resultando en un fondo oscuro y márgenes del espécimen iluminados.  Bacterias difíciles de teñir como las espiroquetas, bacterias con capsulas y microorganismos motiles se observan mejor en este microscopio. Microscopia  Tipos de microscopios  Microscopio de contraste de fase (Phase-contrast)  Es un instrumento que utiliza un óptica que optimiza el contraste.  El principio de quela luz se “dobla” de maneras diferentes según pasa a través de diferentes densidades es la base del contraste de fases.  La diferencia entre la luz y las áreas oscuras produce el contraste.  Provee imágenes de alto contraste de especímenes transparentes y cortes de tejidos.  Este microscopio es ideal para la observación de flujo citoplásmico, motilidad y los estados dinámicos de organelos (división celular y fagocitosis). Microscopia  Tipos de microscopios  Microscopio de fluorescencia (Fluorescens)  Microscopios de fluorescencia son utilizado para observar especímenes que contienen substancias naturales fluorescentes (clorofila) o aquellos teñidos con tintes fluorescentes (fluorescina, auramina o rodamina B).  Es muy utilizado en el diagnostico de enfermedades infecciosas y en el estudio de ecología microbiana.  Técnicas de fluorescencia se aplican a anticuerpos específicos en respuesta a antígenos. Al marcar estos anticuerpos con el tinte fluorescente, estos pueden ser visualizados, monitoreados y estudiados. Microscopia  Tipos de microscopios  Microscopio confocal  Tienen la ventaja de crear imágenes mas definidas de especímenes que se verían borrosos en los microscopios compuestos convencionales.  Un punto de luz individual se fija sobre enfocan secuencialmente a través del espécimen evitando la luz dispersa que usualmente obscurece la imagen cuando el espécimen es iluminado completamente a la vez.  La imagen se construye mediante la visualización en diferentes planos de las capas del espécimen al subir y bajar la platina del microscopio. Microscopia  Tipos de microscopios  Microscopio electrónico  Son microscopios sofisticados que utilizan un rayo de electrones en sustitución a la luz. y campos magnéticos por lentes para enfocar el rayo de electrones permitiendo una mejor resolución de la imagen.  Estudios con microscopia electrónica requieren una preparación extensiva del espécimen, equipos costosos, y personal especialmente capacitado.  Detalles de las estructura bacterianas o su forma de adherencia a su huésped es mejor observado con microscopio electrónico al igual que viruses.  Existen 2 tipos de microscopios electrónicos:  Transmisión (TEM): el rayo de electrones viaja a través de una sección ultrafina del espécimen (100nm) y provee una imagen bidimensional. Su magnificación va de 500,000X a 1,000,000X.  Barrido (SEM): Provee imágenes de alta resolución sin necesidad de un cortes ultrafinos del espécimen. Provee imágenes tridimensionales de una magnificación de 10X a 100,000X. Microscopia Uso del microscopio Microscopia  Uso del microscopio  Al transportar el microscopio del área de almacenaje hacia la mesa de trabajo y viceversa, sosténgalo con una mano por la base y la otra por el brazo.  Remueva la funda.  Conéctelo a la toma de electricidad.  Inspecciónelo para asegurarse que esta completo y funcional.  Rote el revolver para localizar el objetivo de menor aumento, comúnmente 4x.  Encienda la fuente de luz.  Coloque la laminilla a observar en la platina y asegúrela con las pinzas.  Use el tornillo macrométrico para acercar la platina al objetivo evitando tocarlo.  Observando por el ocular, ajuste el nivel de luz usando el condensador y el diafragma.  Nuevamente ajuste la imagen con el tornillo macroscópico hasta que logre enfocarla. Microscopia  Uso del microscopio  Usando ahora el tornillo micrométrico ajuste la imagen hasta que se vea lo mas nítida posible.  Una vez enfocada la imagen, mueva la laminilla para observar los puntos de interés. En microscopios con platina móvil, utilice los tornillos provistos para moverla de Norte a Sur y de Este a Oeste.  Puede mejorarla calidad de la imagen, ajustando la cantidad de luz con el condensador o el diafragma.  Para observar la imagen en mayor aumento, seleccione el siguiente objetivo utilizando el revolver. Es posible que tenga que enfocar nuevamente la imagen con el tornillo micrométrico.  Al llegar al objetivo de inmersión en aceite, mueva el revolver en una posición intermedia para colocar la gota de aceite sobre la laminilla.  Precaución: Asegúrese de mover el revolver hacia el objetivo de inmersión para evitar dañar el siguiente objetivo. Microscopia  Uso del microscopio  Una vez termine de usar el microscopio:  Remueva la laminilla.  Apague la fuente de luz.  Usando el tornillo macrométrico, distancie la platina del revolver.  Limpie con papel dedicado el objetivo de inmersión de aceite.  Limpie la platina si se derramo aceite en ella.  Rote el revolver hasta seleccionar el objetivo de menor aumento.  Coloque la funda sobre el microscopio y devuélvalo al lugar de almacenaje. Referencias  Manual de Normas Académicas y Administrativas de Programas Sub-graduados de la UAGM, Recinto de Carolina  http://www.suagm.edu/une/srtk/pdf/Reglamento_Estudiantil.pdf