Diaporama CRS 2024 PDF - Matériels et Méthodes d'Étude en Anatomie et Cytologie Pathologiques

MATERIELS ET METHODES D’ETUDE EN ANATOMIE ET CYTOLOGIE PATHOLOGIQUES  Ressources humaines Ø Les médecins pathologistes macroscopie, microscopie, autopsie Ø Les techniciens de laboratoire -partie technique ( réception des prélèvements à la remise des lames au médecin)...

MATERIELS ET METHODES D’ETUDE EN ANATOMIE ET CYTOLOGIE PATHOLOGIQUES  Ressources humaines Ø Les médecins pathologistes macroscopie, microscopie, autopsie Ø Les techniciens de laboratoire -partie technique ( réception des prélèvements à la remise des lames au médecin) -inventaire, entretien matériel et archivage -Une salle de réception des prélèvements -Une salle de macroscopie -Un local technique pour les différentes étapes de la prise en charge des prélèvements -Une salle de Tumorothèque et de congélation -Une salle d’archivage pour le stockage des réserves pour les blocs et les lames;  Matériels d’étude Les prélèvements: Deux types de prélèvements sont étudiés: les prélèvements cellulaires CYTOPATHOLOGIE (cellules isolées ou petits amas cellulaires) les prélèvements tissulaires HISTOPATHOLOGIE  Prélèvements cellulaires Liquide spontanément émis: urine, expectoration, fistule Raclage, brossage, écouvillonnage, aspiration de cellules desquamant spontanément : col utérin, bulle cutanéomuqueuse, bronches, voies biliaires, aspiration après lavage broncho-alvéolaire Ponction à l’aiguille d’un liquide: épanchement de séreuse ou articulaire, LCR, kyste, collection Ponction à l’aiguille d’un organe ou d’une tumeur : ganglion, nodule thyroïdien ou mammaire Apposition d’un organe : pièce opératoire ou biopsie.  Prélèvements tissulaires 3 Modalités Ø BIOPSIES Ø PIECES OPERATOIRES Ø PRELEVEMENTS AUTOPSIQUES OU NECROPSIQUES  La biopsie « La biopsie consiste à prélever un fragment de tissu sur un être vivant en vue d'un examen anatomo-pathologique. Par extension, ce terme peut désigner le fragment tissulaire. » La biopsie peut être effectuée selon des modalités variables  La biopsie Ø Par ponction à l'aide d'une aiguille coupante ou d'un trocart (foie, rein, os...): on obtient des cylindres de tissu de quelques mm à quelques cm de long. -A l'aveugle" : atteinte de l’ensemble de l’organe -Sous repérage (échographie, scanner) : une lésion focale visible en imagerie. Ø Par biopsie chirurgicale après anesthésie locale ou générale et sous contrôle de la vue : biopsie partielle, ou biopsie exérèse enlevant la totalité de la lésion. Ø Sous endoscopie (une pince est montée sur l'endoscope) : fragments biopsiques de 0,5 mm à 2 mm.  Valeur d’une biopsie Øla taille Øle nombre Øle choix de la zone à biopsier : éviter zones nécrotiques ou hémorragiques, éviter prélèvements trop superficiels Øla bonne préservation des tissus : ne pas étirer ou écraser les fragments, éviter le bistouri électrique "grillant" les tissus Øle repérage topographique pour biopsies multiples (flacons différents répertoriés)  Les pièces opératoires « Ce sont des organes ou des segments d’organes enlevés en monobloc ou séparément lors d’une intervention chirurgicale dans un but thérapeutique. » +++La résection d’une pièce chirurgicale doit toujours être suivie d’un examen anatomo-pathologique destiné au bilan des lésions.+++ Le but de l’examen anatomopathologique sera : 1.de confirmer le diagnostic déjà posé ayant motivé l’acte opératoire (parfois complète ce diagnostic). 2.de faire un bilan topographique des lésions. 3.de préciser l’état des limites chirurgicales.  Les pièce de nécrospsie « Une autopsie est l’examen anatomo-pathologique d’un cadavre. L'autopsie (« voir par soi-même »), est aussi appelée nécropsie (« voir après la mort »). Deux types d’autopsie : -L'autopsie judiciaire (ou médico-légale) -L'autopsie scientifique (ou médico-scientifique)  Techniques d’étude morphologique de base des prélèvements cellulaires et tissulaires « La qualité des prélèvements conditionne la qualité de l'étude anatomopathologique. » ++++Objectifs essentiels ++++ - garder intact les structures cellulaires ou tissulaires après l’ischémie post biopsique, post opératoire ou post mortem -permettre de bien visualiser. L’enregistrement des prélèvements ++ son importance est capitale concentration et application ATTENTION AUX ERREURS!!!!!!!!!!! Confusion des prélèvements et des numéros Techniques d’études du matériel tissulaire La technique de base comporte 5 temps : ++++ 1. La fixation dès la réception du prélèvement. 2. L’étude macroscopique et l’échantillonnage. 3. La déshydratation, l’imprégnation et l’inclusion et en paraffine 4. La confection de coupes. 5. La coloration.  Fixation et coloration en cytologie ü MGG (May-Grunwald-Giemsa) : séchage à l'air ü Papanicolaou :immersion dans l'alcool-éther ou par application d'un aérosol de laque fixante pour coloration ü Hématoxyline-éosine de Harris-Schorr  La conservation des prélèvements tissulaires Ø Fixateurs à base de formaldéhyde Formol Neutre à 10% +++++ Formol NaCl L’AFA (alcool-formol- acétique) Le liquide de Bouin aqueux = prohiber Ø les fixateurs à bases de Chlorure de zinc Ces fixateurs permettent à la fois une bonne morphologie et une meilleure qualité d’immunohistochimie. Non usuels.  Règles générales de fixation : ++++ -En dehors des micro-biopsies, il est indispensable, avant toute fixation, de mesurer, de peser et de photographier toutes les pièces. -Le volume du fixateur doit représenter environ 10 fois le volume de la pièce. -Le récipient doit être de taille suffisamment grande pour prévenir les déformations des pièces opératoires volumineuses. -Avant fixation, les organes creux (tube digestif, vésicule biliaire, utérus) doivent être ouverts et si nécessaire lavés de leur contenu afin de prévenir l'autolyse des muqueuses.  Règles générales de fixation : ++++ -les organes pleins volumineux (foie, rate) doivent être coupés en tranches pour faciliter la pénétration rapide et homogène du fixateur. -les poumons peuvent être fixés par insufflation d’une solution de formol dans les bronches ou coupés en tranches. -Seuls les cerveaux de nécropsies seront plongés dans une solution de formol sans être tranchés en raison de la fragilité de la substance cérébrale.  Règles générales de fixation : ++++ -La durée de la fixation dépend de la taille du prélèvement : au minimum 2 à 5 heures pour une biopsie et 48 heures pour une pièce opératoire. -Les prélèvements calcifiés (os, certaines tumeurs) doivent être sciés, puis fixés, puis plongés dans une solution décalcifiante (acide) avant d'être inclus dans la paraffine, ce qui rallonge la durée de la technique. L’étude macroscopique et l’échantillonnage C’est l’examen à l’œil nu d’une pièce fraîche ou fixée Ø observer Ø peser Ø mesurer Ø palper Ø disséquer Ø faire des prélèvements pour l’histologie (échantillonnage) Le traitement tissulaire Ø La déshydratation Ø l’imprégnation Ø l’inclusion en paraffine  La confection des coupes La confection des coupes nécessite un microtome muni d’un rasoir. les coupes de 3 à 5 microns d'épaisseur sont ensuite étalées sur des lames.  La coloration Les colorations permettent de bien individualiser les différents éléments tissulaires afin de mieux les examiner. La coloration usuelle est l’HES (hématoxyline éosine, safran: un colorant basique nucléaire (hématéine,) qui colore les noyaux en bleu un colorant acide cytoplasmique (érythrosine, ou phloxine) qui colore le cytoplasme en rose le safran qui se fixe sur le collagène Techniques d’études morphologiques particulières  L’examen extemporané « C’est une consultation anatomo-pathologique rapide pratiquée pendant une intervention chirurgicale et dont les résultats immédiats permettent d’orienter les suites de cette intervention. » Le fragment tissulaire non fixé est coupé en congélation grâce à un microtome à congélation le CRYOSTAT. La coloration utilisée est le Bleu de Toluidine Phéniqué : -le stroma des cancers devient pourpre métachromatique -les cellules tumorales bleues. L’examen extemporané doit toujours être compléter par une étude histologique complémentaire+++  L’immunohistochimie ++++ « Elle consiste à mettre en évidence divers antigènes (Ag) cellulaires ou extra-cellulaires grâce à des anticorps (Ac) spécifiquement dirigés contre eux, sur des préparations, sur des coupes de tissus congelés ou fixés et inclus en paraffine. » Les Ag recherchés peuvent être des Ag membranaires, cytoplasmiques, nucléaires ou des protéines de la matrice extra- cellulaire. Immunofluorescence directe: Utilisée pour mettre en évidence les dépôts tissulaires d'immunoglobulines et de complément dans les biopsies cutanées et dans les biopsies rénales congelées, observées grâce à un microscope à fluorescence. Méthodes immunoenzymatiques indirectes : l'Ac spécifique primaire est déposé sur le tissu, puis il est révélé par un 2ème Ac couplé à une enzyme à laquelle on fournit son substrat. Le produit coloré de la réaction enzymatique apparaît au niveau du site des complexes Ag-Ac.  Techniques de biologie moléculaire in situ Mise en évidence sur des coupes tissulaires (en congélation ou après inclusion dans la paraffine) ou sur des étalements cellulaires (cytologie), de séquences d'ARN ou d'ADN grâce à des sondes d'acides nucléiques complémentaires et couplées à un traceur radioactif (sondes chaudes) ou à une enzyme (sondes froides) ou un fluorochrome (sondes fluorescentes). Mise en évidence des acides nucléiques viraux (HPV, EBV) ou des ARN de chaînes légères d'immunoglobulines. Techniques d’études en recherche moderne Ø Microscope électronique Ø L'hybridation in situ fluorescente (FISH/CISH) Ø La PCR in situ Ø Cytométrie en flux Ø Les lames virtuelles Ø Histomorphométrie Ø La microdissection Ø Le bloc de « tissue microarrays » Ø Microscopie confocale à balayage laser  CONCLUSION Prélèvements: cytologie biopsie pièce opératoire Plusieurs types de biopsie: chirurgicale aiguille ou endoscopique Fixation : cytologie alcool-ether ou séchage à l’air libre Histologie: formol tamponné à 10% Coloration : standard HE Techniques particulières: examen extemporané immunohistochimique  OBJECTIFS 1. Expliquer le principe de l’analyse anatomie pathologique. 2. Expliquer la notion de lésion et d’agents pathogènes. 3. Enumérer les différents types de prélèvements soumis à un examen cytologique et histologique. 4. Enumérer les techniques pour obtenir ces prélèvements. 5. Savoir expliquer les étapes de prise en charge des prélèvements cellulaires et tissulaires selon les techniques de base d'un laboratoire d'anatomie pathologique. 6. Connaître le principe et les indications des techniques particulières réalisables sur les cellules et tissus (colorations spéciales, immuno histochimie et examen extemporané). FIN DU DIAPORAMA