Tecnología del ADN Recombinante PDF

TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Facilitadora: Aidamalia VARGAS LOWMAN Fundamentos de la Tecnología del ADN Recombinante La Tecnología del ADN Recombinante se basa en la capacidad de manipular el ADN A través de diversas técnicas, es posible modificar el ADN, aislar segmentos específicos y transfe...

TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Facilitadora: Aidamalia VARGAS LOWMAN Fundamentos de la Tecnología del ADN Recombinante La Tecnología del ADN Recombinante se basa en la capacidad de manipular el ADN A través de diversas técnicas, es posible modificar el ADN, aislar segmentos específicos y transferirlos de un organismo a otro, incluso entre especies diferentes La tecnología de ADN recombinante es la combinación de ADN de dos fuentes diferentes para crear nueva información genética Enzimas de restricción Estas enzimas reconocen secuencias de bases específicas y cortan las cadenas de ADN en puntos precisos, generando fragmentos que pueden ser manipulados y combinados con otros fragmentos Las enzimas de restricción se encuentran naturalmente en las bacterias y se utilizan como una defensa contra la infección viral Tipos de enzimas de restricción Hay muchos tipos de enzimas de restricción, y cada una tiene su propia secuencia de ADN diana, o secuencia de reconocimiento, que la enzima de restricción reconoce específicamente EcoRI EcoRI en acción… ¿Cómo nos beneficia a los humanos? Nos proporciona una forma de cortar cualquier tipo de ADN, cualquier ADN, no solo ADN viral, en regiones muy específicas que nos interesan. Tipos de cortes  Plantas Nicotiana tabacum brillan de forma autónoma por la inserción aleatoria de 4 genes del hongo bioluminicente Neonothopanus nambi Se utilizó la enzima de restricción BsaI para cortar en la secuencia AATG-GCTT Mitiouchkina, T., Mishin, A.S., Somermeyer, L.G. et al. Plants with genetically encoded autoluminescence. Nat Biotechnol 38, 944–946 (2020). https://doi.org/10.1038/s41587-020-0500-9 Actividad en clase Ingrese a la siguiente página: https://scienceprimer.com/restriction-enzymes Identifique el tipo de corte realizado por la enzima KpnI y anote la secuencia de reconocimiento o corte.  Clonación y vectores La clonación de ADN consiste en la introducción de un fragmento de ADN de interés en un vector de clonación, como un plásmido bacteriano. Este proceso implica la generación de moléculas recombinantes que contienen el ADN de interés y el vector, lo que permite la replicación del ADN dentro de las células hospedadoras, como bacterias. La clonación de ADN puede realizarse mediante diferentes técnicas, como la transformación bacteriana, la transfección en células eucariotas, entre otras.  Clonación ¿Qué se necesita? 1. Digestión con enzimas de digestión 2. Vector de clonación (plásmido) 3. Enzima ligasa para unir los extremos producidos por las enzimas de restricción 4. Transformación  inserción de los plásmidos dentro de la bacteria. https://view.genial.ly/64e6a817c700c50018c97ca0/interactive-image-vertical-interactive-image Aplicaciones de la Tecnología del ADN Recombinante Ingeniería genética: La tecnología permite la modificación de organismos vivos para obtener características deseadas Terapia génica: La terapia génica busca corregir enfermedades genéticas introduciendo genes funcionales en el organismo afectado. Producción de fármacos: La tecnología del ADN recombinante ha permitido la producción de medicamentos mediante la utilización de microorganismos modificados genéticamente. Agricultura: los investigadores han clonado genes de resistencia a plagas en los cultivos. Ética y consideraciones legales La Tecnología del ADN Recombinante plantea desafíos éticos y consideraciones legales importantes. El uso de organismos genéticamente modificados (OGM) ha generado debates sobre los posibles riesgos ambientales y para la salud humana. También se han establecido regulaciones y normativas para garantizar el uso responsable de esta tecnología.  ¿De qué microorganismos se obtienen más comúnmente las enzimas de restricción? A. Virus B. Protistas C. Algas D. Hongos E. Bacteria Pregunta de autoevaluación 1 Las enzimas de restricción son como tijeras moleculares que cortan el ADN en fragmentos. Originalmente se descubrieron en las bacterias como una forma de que las bacterias se defendieran contra los virus. Las enzimas de restricción pueden reconocer el ADN que flota libremente (como el ADN que un virus inyectaría en la célula bacteriana durante la infección) y cortar el ADN en trozos más pequeños para que pueda ser degradado. Esto impide que el virus continúe su ciclo de vida dentro de la bacteria. Respuesta 1: E Algunas enzimas de restricción reconocen una sección de ADN que es la misma secuencia leída 5′-3′ en una hebra como se lee 5′-3′ en la hebra complementaria. Un ejemplo de esto se muestra en el diagrama: ¿Qué término se da a este patrón? A. Palindrómica B. Alineado C. Complementarios D. Superenroscado E. Canónica Pregunta de autoevaluación 2 Las enzimas de restricción son como tijeras moleculares que cortan el ADN en fragmentos. Son capaces de reconocer secuencias específicas de ADN que se denominan secuencias de reconocimiento. Cada enzima de restricción tiene su propia secuencia de reconocimiento única. Muchas secuencias de reconocimiento son palindrómicas. Esto significa que la secuencia es la misma en ambas hebras cuando se lee en la dirección 5′ a 3′. Respuesta 2: A Se toman muestras de ADN de dos organismos y se mezclan con la enzima de restricción BamHI. La enzima de restricción corta el ADN del organismo A en tres secciones, pero corta el ADN del organismo B en sólo dos. ¿Qué sugiere esto sobre el ADN de los organismos? A. El organismo A tiene menos secuencias de reconocimiento BamHI en su ADN que el organismo B. B. El organismo A tiene más secuencias de reconocimiento BamHI en su ADN que el organismo B. C. El ADN del organismo B es más largo que el del organismo A. D. La muestra tomada del organismo B no se mezcla con suficientes enzimas de restricción. Pregunta de autoevaluación 3 BamHI es un ejemplo de una enzima de restricción. Las enzimas de restricción, o endonucleasas, son enzimas que cortan moléculas de ADN en sitios específicos de reconocimiento. Cada enzima de restricción tendrá una secuencia de reconocimiento diferente. Supongamos que el ADN de ambos organismos es lineal; no forma un círculo. Puesto que BamHI corta el ADN del organismo A en 3 fragmentos, esto sugiere que el ADN del organismo A tiene 2 secuencias de reconocimiento para BamHI. Y dado que cortar el ADN del organismo B con BamHI produjo 2 fragmentos, esto sugiere que el ADN del organismo B tiene solo 1 secuencia de reconocimiento. Por lo tanto, la respuesta correcta es la opción B, el organismo A tiene más secuencias de reconocimiento BamHI en su ADN que el organismo B. Respuesta 3: B Taller 3 Ingrese a: https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:1fb8b9d5:lx_simulation:1 https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:27659cee:lx_simulation:1 https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:5a9bd36e:lx_simulation:1 Interactivo https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:9efbb9d1:lx_simulation:1