Virologie Diagnostique

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Questions and Answers

Quel type de génome n'est pas présent parmi les six types mentionnés ?

  • ADN simple brin (correct)
  • ARN simple brin positif
  • ADN circulaire double brin
  • ARN double brin

Quel critère n'est pas utilisé pour classifier les virus ?

  • Type de capside
  • Mode de multiplication
  • Type de génome
  • Taille des particules (correct)

Quelle méthode n'est pas une forme de détection directe des virus ?

  • Détection de protéines virales
  • Dosage d'anticorps (correct)
  • Microscopie électronique
  • Culture cellulaire

Quel type de cellule n'est généralement pas utilisé pour la culture de virus ?

<p>Cellules en suspens non vivantes (A)</p> Signup and view all the answers

Quel rôle joue la transcriptase inverse dans le cycle des rétrovirus ?

<p>Elle convertit l'ARN en ADN (A)</p> Signup and view all the answers

Quel des échantillons suivants est le moins couramment utilisé pour le diagnostic virologique ?

<p>Crachats (B)</p> Signup and view all the answers

Qu'est-ce qu'une cellule permissive ?

<p>Celle qui possède des récepteurs pour le virus (B)</p> Signup and view all the answers

Quel type de virus se multiplie uniquement dans des cellules vivantes ?

<p>Virus (A)</p> Signup and view all the answers

Quelle méthode est utilisée pour quantifier les génomes ARN?

<p>RT-qPCR (B)</p> Signup and view all the answers

Comment la fluorescence est-elle mesurée dans un processus de qPCR?

<p>À chaque cycle de PCR en temps réel (D)</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle de SybrGreen dans la quantification de l'ADN?

<p>Il s'intercale dans l'ADN double brin pour fluorescer. (D)</p> Signup and view all the answers

Qu'est-ce qu'un titre en PFU/mL représente?

<p>Le titre des particules infectieuses (D)</p> Signup and view all the answers

Quel est un des effets cytopathogènes typiques du virus VZV?

<p>Création de trous dans les cellules (B)</p> Signup and view all the answers

Quelle température est généralement utilisée pour l'assemblage des amorces durant la PCR?

<p>60°C (B)</p> Signup and view all the answers

Comment se fait l'identification des virus isolés par modifications morphologiques?

<p>Par évaluation des effets cytopathogènes (A)</p> Signup and view all the answers

Quel processus indique qu'une sonde s'est fixée efficacement lors d'une PCR?

<p>La séparation du fluorochrome et du quencher (A)</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle principal des oncogènes viraux comme les protéines LT du SV40 et E6-E7 du HPV ?

<p>Ils activent l'activité télomérase de la cellule. (D)</p> Signup and view all the answers

Dans quel contexte un promoteur viral est-il essentiel ?

<p>Pour le contrôle de l'expression des gènes d'intérêt. (B)</p> Signup and view all the answers

Quel est le principe fondamental de la technique ELISA ?

<p>Identification du virus par des anticorps spécifiques. (B)</p> Signup and view all the answers

Quels anticorps sont utilisés dans l'ELISA en sandwich ?

<p>Anticorps de détection conjugués à une enzyme. (C)</p> Signup and view all the answers

Quelle méthode est utilisée pour détecter la protéine virale par immunofluorescence ?

<p>Reconnaissance par anticorps fluorescents spécifiques. (D)</p> Signup and view all the answers

Quelle technique est principalement utilisée pour détecter le génome viral ?

<p>PCR et RT-PCR. (C)</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle du témoin négatif lors de la migration des produits PCR ?

<p>Assurer qu'aucun autre signal n'est présent. (D)</p> Signup and view all the answers

Que signifie le terme 'provirus' dans le contexte viral ?

<p>Le génome viral intégré au génome de la cellule. (B)</p> Signup and view all the answers

Quel est le titre en FFU/mL utilisé pour déterminer?

<p>Le nombre de particules infectieuses (D)</p> Signup and view all the answers

Quel est le but de l'hémagglutination dans le titrage des virus?

<p>Évaluer la dilution à laquelle un virus hémagglutine les globules rouges (B)</p> Signup and view all the answers

Qu'est-ce que le titre PRNT50 mesure?

<p>La présence d'anticorps neutralisants (C)</p> Signup and view all the answers

Pourquoi le ratio nombre de particules physiques / nombre de particules infectieuses est-il élevé pour la plupart des virus?

<p>À cause de la présence de particules défectives (B)</p> Signup and view all the answers

Quelle méthode est utilisée pour détecter la présence d'anticorps dans le sérum?

<p>Test de neutralisation PRNT (C)</p> Signup and view all the answers

Quel facteur est lié à la dose infectieuse 50% (ECP)?

<p>Effet cytopathologique observé dans 50% des cas (A)</p> Signup and view all the answers

Quelle est l'utilisation d'un anticorps secondaire dans le titrage du virus?

<p>Il sert à détecter le virus en liaison avec un fluorophore (D)</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle de l'acide sialique dans l'hémagglutination des globules rouges?

<p>Il est reconnu par l'hémagglutinine (A)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Transcriptase inverse

Une enzyme qui synthétise l'ADN à partir d'un modèle d'ARN.

Virus à ARN

Un virus dont le génome est composé d'ARN.

Virus à ADN

Un virus dont le génome est composé d'ADN.

Diagnostic virologique direct

Un type de test permettant de détecter directement le virus ou ses composants.

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Diagnostic virologique indirect

Un type de test permettant de détecter les effets du virus sur l'hôte.

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Isolement des virus

Une technique utilisant des cellules vivantes pour cultiver des virus.

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Sérologie

Une technique utilisant des anticorps pour détecter la présence d'un virus dans un échantillon.

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Microscopie électronique

Une technique de microscopie permettant d'observer les virus à haute résolution.

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Transformation induite par des oncogènes viraux

Transformation cellulaire induite par des agents viraux, comme les protéines LT du SV40 ou E6-E7 du HPV. Ces protéines perturbent le cycle cellulaire et peuvent conduire à une croissance cellulaire incontrôlée.

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Modification de cellules pour l'expression de gènes d'intérêt

Processus par lequel une cellule normale est modifiée pour exprimer un gène d'intérêt. Cela permet de la rendre sensible à un virus ou de détecter la présence d'un virus.

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Promoteur viral

Un gène qui nécessite la présence d'un virus pour être transcrit. Ce gène est activé par les éléments régulateurs du virus.

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ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)

Un test immunologique pour détecter la présence d'anticorps ou d'antigènes spécifiques. Il fonctionne grâce à une réaction immunitaire spécifique entre l'anticorps et l'antigène.

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ELISA en sandwich

Méthode d'ELISA utilisant deux anticorps spécifiques pour la détection d'un antigène. La réaction est détectable grâce à une enzyme conjuguée à un anticorps.

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ELISA direct

Méthode d'ELISA utilisant un seul anticorps conjugué à une enzyme pour détecter un antigène.

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Immunofluorescence (IF)

Technique utilisant des anticorps fluorescents pour visualiser et localiser les protéines virales au sein d'une cellule.

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Sonde nucléotidique marquée

Une son de nucléotides marquée qui s'apparie de manière spécifique au génome viral afin de le détecter dans une cellule.

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RT-qPCR

Technique de PCR qui utilise une sonde fluorescente pour détecter l'amplification d'ADN. La sonde s'hybride sur la séquence d'intérêt et émet de la fluorescence uniquement lors de l'extension de l'ADN, permettant de quantifier le nombre de copies d'ADN.

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qPCR

Technique de PCR qui utilise un intercalant fluorescent pour détecter l'amplification d'ADN. L'intercalant se fixe à l'ADN double brin et émet de la fluorescence, permettant de quantifier le nombre de copies d'ADN.

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Effet cytopathogène (ECP)

Modification de la morphologie cellulaire observable lors d'une infection virale. Les cellules infectées présentent des changements caractéristiques du virus ou de la famille de virus.

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Plaques de lyse

Méthode de titrage viral basée sur la formation de plages de lyse dans une culture cellulaire. Les plaques de lyse correspondent aux zones où les cellules ont été lysées par le virus, permettant de quantifier le nombre de particules infectieuses.

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PFU (Plaque Forming Unit)

Unité de mesure du nombre de particules infectieuses dans un échantillon.

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Ct (Cycle threshold) ou Cq

Unité de quantification utilisée pour l'analyse RT-qPCR. Elle correspond au nombre de cycles PCR nécessaires pour détecter un signal fluorescent significatif.

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Courbe standard

Ensemble de tubes contenant des concentrations connues d'ADN ou ARN utilisés pour établir une courbe standard lors de l'analyse RT-qPCR. La courbe standard permet de quantifier les échantillons inconnus par comparaison.

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Dilutions en série

Dilutions successives d'un échantillon viral pour estimer sa concentration. Chaque dilution correspond à un facteur de dilution précis et est soumise à la PCR pour déterminer la quantité de virus.

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Titrage viral par fluorescence

Méthode de titrage viral utilisant des cellules infectées avec des dilutions en série du virus. La détection se fait par fluorescence après incubation avec des anticorps primaires et secondaires couplés à un fluorophore.

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Titre en FFU/mL

Mesure de la concentration du virus en unités formant des foyers fluorescents (FFU) par millilitre. Un FFU représente un foyer d'infection visible sous fluorescence.

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Titrage viral par hémagglutination

Méthode de titrage viral qui exploite la capacité de certains virus à agglutiner les globules rouges. Plus la concentration du virus est élevée, plus le degré d'hémagglutination est important.

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Titre en HA/mL

Mesure de la concentration du virus en unités hémagglutinantes (HA) par millilitre. Une unité HA correspond à la dilution minimale du virus qui agglutine les globules rouges.

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Ratio particules physiques / particules infectieuses

Le ratio entre le nombre de particules physiques et le nombre de particules infectieuses du virus.

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Dose infectieuse 50% (DI50)

Dose de virus permettant d'induire un effet cytopathologique (ECP) dans 50% des cellules infectées.

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Titre PRNT50

Titre du sérum qui neutralise 50% de l'activité du virus dans un test de réduction de la neutralisation des plaques (PRNT).

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Study Notes

Virologie Diagnostique

  • Rappels CM1:

    • Types de capsides : 2
    • Types de génomes : 6
    • Classes de Baltimore : 7
    • Critères de classification des virus : 4
  • Transcriptase inverse:

    • ADN polymérase ARN dépendante
    • ARN+ : Génome infectieux, cycle commence par la traduction de l'ARN viral.
    • ARN- : Incorporant leur polymérase dans la particule virale.
  • Cycle intracellulaire:

    • Commence par la transcription d'un ARNm
    • Rétrovirus : Incorporant leurs polymérases dans la particule virale, phase ADN dans leur cycle viral.
  • Détection directe:

    • Détection du virus ou de ses composants
    • Virus
    • Protéines virales
    • Génome viral
  • Détection indirecte:

    • Effet sur l'hôte
    • Activité enzymatique
    • Effet cytopathogène
    • Réponse de l'hôte (anticorps)
  • Échantillons utilisés:

    • Sang
    • Prélèvements par écouvillons (nasopharyngé, buccale)
    • Tissus
    • Urines
    • Liquide amniotique
    • Selles
  • Détection directe en microscopie:

    • Microscopie électronique (forte concentration de virus, chronophage, coûts élevés)
  • Isolement des virus:

    • Culture cellulaire (les virus ne peuvent se multiplier que dans les cellules vivantes : cellules en culture, animaux de laboratoire, œufs de poule embryonnés)

Virologie - Page 2

  • Choix des cellules:

    • Dépend du virus recherché (animales, végétales, bactéries).
    • Doivent être susceptibles et permissives au virus.
  • Propagation des virus:

    • Découverte de nouveaux virus
    • Développement de vaccins (poliomyélite, rubéole)
  • Titration des virus:

    • Déterminer la quantité de particules virales dans un volume donné.
    • Cellules sensibles (possèdent le récepteur)
    • Cellules permises (permettent l'adsorption du virus)
    • Cellules primaires (issues de tissus normaux, arrêt de la division cellulaire, pourcentage de surface couverte : confluences)
    • Lignées cellulaires (immortalisées/transformées, ex: cellules HeLa)

Virologie - Page 3

  • Détection du génome viral:
    • Hybridation in situ (sonde marquée qui s'apparie avec la séquence complémentaire)
    • PCR/RT-PCR (amorces spécifiques d'une séquence virale)
    • PCR quantitative (qPCR) ou RT-qPCR (quantification de génomes ADN ou ARN)

Virologie - Page 4

  • Identification des virus isolés:
    • Effets cytopathogènes (ECP): modifications morphologiques des cellules infectées.
    • Modifications typiques d'un virus ou d'une famille de virus.
    • Titrage des virus (Plaques de lyse, unités formant des plaques (PFU), foyers fluorescents (FFU), hémagglutination).

Virologie - Page 5

  • Diagnostic indirect:
    • Détection des anticorps sériques (anticorps anti-Fc couplés à une enzyme, anticorps spécifiques du virus).
    • Titre en anticorps neutralisant (PRNT50).
    • Étapes du titre en anticorps neutralisant (dilutions de sérum, dilution ajout de virus, incubation, inoculation des cellules, incubation, révélation au crystal violet)

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