Trasgenesi nei topi: Iniezione di DNA
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Questions and Answers

Quale meccanismo consente a Cre ricombinasi di entrare nel nucleo?

  • Inibizione da parte di un repressore
  • Traslocazione per microiniezione
  • Legame con l'ormone estrogeno (correct)
  • Attivazione da parte della tetraciclina

    • Quale tra i seguenti elementi non è necessario per la costruzione di un transgene?

  • Ribosoma (correct)
  • Promotore
  • Segnale di Poliadenilazione
  • Fattori di Trascrizione

    • Perché il sistema degli estrogeni è meno utilizzato per accendere e spegnere l'espressione genica?

  • È un promotore altamente specifico per il topo
  • Potrebbe essere riconosciuto e innescare trascrizione non desiderata (correct)
  • Richiede una grande quantità di tetraciclina
  • Non è efficace nel nucleo

    • Dove potrebbe finire generalmente il DNA inserito durante la creazione di un transgene?

    <p>Ovunque nel genoma</p> Signup and view all the answers

    Quale tecnica ha dimostrato di avere efficienza maggiore rispetto a microiniezione in oociti bovini o ovini?

    <p>ICSI</p> Signup and view all the answers

    Quale funzione ha l'IRES nel contesto di un transgene?

    <p>Simulare un CAP per il legame del ribosoma</p> Signup and view all the answers

    Cosa comporta il legame della tetraciclina nel sistema rtTA?

    <p>Attiva l'espressione genica</p> Signup and view all the answers

    Quale componente non è associato al complesso Polycomb 2?

    <p>PHO-RC</p> Signup and view all the answers

    Cosa si intende per 'topa pseudogravida' nel contesto dell'implementazione di un transgene?

    <p>Una topa trattata con ormoni per simulare la gravidanza</p> Signup and view all the answers

    Quale sequenza è utilizzata nel transgene per garantire la corretta espressione genetica?

    <p>Segnale di Poliadenilazione</p> Signup and view all the answers

    Qual è il principale effetto della metilazione della Lys 27 nell'istone?

    <p>Chiusura della cromatina</p> Signup and view all the answers

    Quale dei seguenti non è un fattore che influisce sulla traslocazione di Cre ricombinasi?

    <p>Utilizzo di tetraciclina</p> Signup and view all the answers

    Qual è l'importanza della morula nel processo di creazione di topi transgenici?

    <p>È il primo stadio dello sviluppo embrionale</p> Signup and view all the answers

    Qual è la funzione principale di un cromo-dominio nel contesto dell'eterocromatina?

    <p>Reclutare proteine metilanti</p> Signup and view all the answers

    Qual è la funzione principale degli enzimi di ricombinazione come Cre?

    <p>Controllo della espressione genica</p> Signup and view all the answers

    Qual è la ruolo della proteina EZH2 nel complesso Polycomb 2?

    <p>Metila Lys 27</p> Signup and view all the answers

    Quale metodo consente di indirizzare il transgene in posizioni specifiche del genoma?

    <p>Utilizzare linee di topi con sequenze specifiche</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione riguardo alla metilazione è errata?

    <p>Avviene solo su Lys 9</p> Signup and view all the answers

    Qual è l'effetuo principale dell'azione dei complessi Polycomb sulla cromatina?

    <p>Stabilizzare la struttura della cromatina</p> Signup and view all the answers

    In quale fase viene reclutato il complesso Polycomb 2 rispetto agli altri elementi del sistema?

    <p>Dopo il reclutamento del repressore PHO-RC</p> Signup and view all the answers

    Se un istone è metilato su Lys 9, quale tipo di cromatina è probabile che si formi?

    <p>Eterocromatina</p> Signup and view all the answers

    Qual è la funzione principale della DNMT1 nel contesto della metilazione del DNA?

    <p>Mantiene le modificazioni della cromatina nelle cellule figlie</p> Signup and view all the answers

    Che ruolo giocano le modificazioni degli istoni nella trasmissione dell'informazione genetica?

    <p>Possono essere ereditate dalle cellule figlie</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione riguardo agli istoni è corretta?

    <p>Il nucleosoma è composto sia da istoni vecchi che nuovi</p> Signup and view all the answers

    Cosa avviene con la metilazione del DNA in seguito alla divisione cellulare?

    <p>Viene mantenuta attraverso l'azione di metilasi</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione è falsa riguardo alle modificazioni epigenetiche?

    <p>Richiedono sempre cambiamenti nel sequenziamento del DNA</p> Signup and view all the answers

    In che modo le metilasi di mantenimento agiscono durante la divisione cellulare?

    <p>Mantengono specifiche modificazioni in alcuni loci</p> Signup and view all the answers

    Cosa serve per attivare e spegnere i geni secondo il concetto di epigenetica?

    <p>Modificazioni del DNA e delle proteine istoniche</p> Signup and view all the answers

    Quale affermazione descrive correttamente la metilazione genetica nei nuovi filamenti di DNA?

    <p>Solo un filamento è metilato mentre l'altro rimane non metilato</p> Signup and view all the answers

    Qual è il ruolo dell'emimetilazione del DNA nella espressione degli alleli?

    <p>Può portare a un allele completamente spento</p> Signup and view all the answers

    Perché è importante avere un dosaggio medio degli alleli in alcuni geni?

    <p>Riduce l'eccesso di espressione legato a malattie</p> Signup and view all the answers

    Qual è la causa principale della Sindrome di Beckwith-Wiedemann?

    <p>Mancato controllo dell'imprinting di IGF2</p> Signup and view all the answers

    Cosa accade al sito di legame per CTCF nel cromosoma paterno?

    <p>È metilato, permettendo l'attivazione di IGF2</p> Signup and view all the answers

    Qual è il significato della metilazione delle citosine nel contesto dell'espressione genica?

    <p>Inibisce il legame di CTCF</p> Signup and view all the answers

    Quale fattore è responsabile della reclutamento delle coesine nel cromosoma materno?

    <p>CTCF</p> Signup and view all the answers

    Cosa comporta la mancata espressione di H19 in un contesto di sovraespressione di IGF2?

    <p>Rischio di sviluppo di tumori</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Iniezione di DNA e trasgenesi nei topi

    • Il DNA è linearizzato e tagliato con enzimi di restrizione per rimuovere le sequenze non necessarie.
    • Si effettuano accoppiamenti tra topi e si lava l’utero della topa per mantenere gli ovociti.
    • Iniezioni vengono eseguite nell'utero, seguite da coltura fino allo stadio di morula e impianto in una topa pseudogravida trattata ormonalmente.
    • Si ottengono topi modificati geneticamente che vengono analizzati.

    Costruzione di un transgene

    • Il DNA inserito può integrarsi dappertutto nel genoma, a meno di specifiche linee di topi con sequenze di integrasi.
    • Necessità di componenti specifici per il transgene: promotore, fattori di trascrizione, cDNA, segnale di poliadenilazione (anche virale o dal ormone della crescita bovino), IRES.
    • Il sistema di traslocazione nel nucleo è attivato da legame con ormoni, come l'estrogeno, per la proteina Cre ricombinasi.

    Controllo dell'espressione genica

    • Sistemi di trascrizione controllati da tetraciclina (Tet) e altre tecniche, come quelli eucariotici, risultano versatili per modificare genomi.
    • Il sistema estrogenico è meno comune per il controllo dell'espressione a causa della sua riconoscibilità e reattività.

    Efficienza in altre specie

    • Altre specie hanno un’efficienza inferiore rispetto ai topi nella trasgenesi:
      • 1% di efficienza con microiniezione in oociti ovini o bovini.
      • 8% di efficienza con retrovirus iniettati in uova già deposte.
      • Solo 1 su 224 oociti iniettati ha generato una scimmia transgenica.

    Tecniche avanzate

    • L'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) migliora l'efficienza nella produzione di organismi geneticamente modificati.

    Meccanismi di regolazione epigenetica

    • Proteina HP1 legata a cromo-domini agisce sulla metilazione degli istoni, influenzando espressione genica.
    • Complessi Polycomb, come PHO-RC e PRC2, reclutano enzimi per metilare istoni, alterando la conformazione della cromatina e regolando l'espressione genica.

    Informazioni sulla metilazione

    • Epigenetica si occupa del mantenimento delle modificazioni della cromatina attraverso le divisioni cellulari.
    • La metilazione delle citosine nel DNA è guidata da DNMT1 e può influenzare il dosaggio allelico nei geni.

    Caso specifico: gene IGF2 e H19

    • Differente espressione degli alleli di IGF2 e H19 dipende dall'origine parentale; il padre esprime IGF2, mentre la madre non esprime H19.
    • Un difetto di imprinting in questo locus (11p15.5) può causare la Sindrome di Beckwith-Wiedemann, correlata a sovraespressione di IGF2 e sviluppo di tumori.
    • Il sito di legame per CTCF è metilato nel paterno, attivando l'espressione di IGF2, mentre il sito materno mantiene l’inattivazione di IGF2.

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    Description

    Questo quiz esplora i processi di iniezione di DNA e trasgenesi nei topi. I partecipanti impareranno le tecniche di manipolazione genetica, inclusa la costruzione di transgene e il controllo dell'espressione genica. Scoprirai come si ottengono topi geneticamente modificati tramite queste procedure avanzate.

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