Trasgenesi nei topi: Iniezione di DNA

Questions and Answers

Quale meccanismo consente a Cre ricombinasi di entrare nel nucleo?

Inibizione da parte di un repressore

Traslocazione per microiniezione

Legame con l'ormone estrogeno (correct)

Attivazione da parte della tetraciclina

Quale tra i seguenti elementi non è necessario per la costruzione di un transgene?

Ribosoma (correct)

Promotore

Segnale di Poliadenilazione

Fattori di Trascrizione

Perché il sistema degli estrogeni è meno utilizzato per accendere e spegnere l'espressione genica?

È un promotore altamente specifico per il topo

Potrebbe essere riconosciuto e innescare trascrizione non desiderata (correct)

Richiede una grande quantità di tetraciclina

Non è efficace nel nucleo

Dove potrebbe finire generalmente il DNA inserito durante la creazione di un transgene?

Ovunque nel genoma Signup and view all the answers

Quale tecnica ha dimostrato di avere efficienza maggiore rispetto a microiniezione in oociti bovini o ovini?

ICSI Signup and view all the answers

Quale funzione ha l'IRES nel contesto di un transgene?

Simulare un CAP per il legame del ribosoma Signup and view all the answers

Cosa comporta il legame della tetraciclina nel sistema rtTA?

Attiva l'espressione genica Signup and view all the answers

Quale componente non è associato al complesso Polycomb 2?

PHO-RC Signup and view all the answers

Cosa si intende per 'topa pseudogravida' nel contesto dell'implementazione di un transgene?

Una topa trattata con ormoni per simulare la gravidanza Signup and view all the answers

Quale sequenza è utilizzata nel transgene per garantire la corretta espressione genetica?

Segnale di Poliadenilazione Signup and view all the answers

Qual è il principale effetto della metilazione della Lys 27 nell'istone?

Chiusura della cromatina Signup and view all the answers

Quale dei seguenti non è un fattore che influisce sulla traslocazione di Cre ricombinasi?

Utilizzo di tetraciclina Signup and view all the answers

Qual è l'importanza della morula nel processo di creazione di topi transgenici?

È il primo stadio dello sviluppo embrionale Signup and view all the answers

Qual è la funzione principale di un cromo-dominio nel contesto dell'eterocromatina?

Reclutare proteine metilanti Signup and view all the answers

Qual è la funzione principale degli enzimi di ricombinazione come Cre?

Controllo della espressione genica Signup and view all the answers

Qual è la ruolo della proteina EZH2 nel complesso Polycomb 2?

Metila Lys 27 Signup and view all the answers

Quale metodo consente di indirizzare il transgene in posizioni specifiche del genoma?

Utilizzare linee di topi con sequenze specifiche Signup and view all the answers

Quale affermazione riguardo alla metilazione è errata?

Avviene solo su Lys 9 Signup and view all the answers

Qual è l'effetuo principale dell'azione dei complessi Polycomb sulla cromatina?

Stabilizzare la struttura della cromatina Signup and view all the answers

In quale fase viene reclutato il complesso Polycomb 2 rispetto agli altri elementi del sistema?

Dopo il reclutamento del repressore PHO-RC Signup and view all the answers

Se un istone è metilato su Lys 9, quale tipo di cromatina è probabile che si formi?

Eterocromatina Signup and view all the answers

Qual è la funzione principale della DNMT1 nel contesto della metilazione del DNA?

Mantiene le modificazioni della cromatina nelle cellule figlie Signup and view all the answers

Che ruolo giocano le modificazioni degli istoni nella trasmissione dell'informazione genetica?

Possono essere ereditate dalle cellule figlie Signup and view all the answers

Quale affermazione riguardo agli istoni è corretta?

Il nucleosoma è composto sia da istoni vecchi che nuovi Signup and view all the answers

Cosa avviene con la metilazione del DNA in seguito alla divisione cellulare?

Viene mantenuta attraverso l'azione di metilasi Signup and view all the answers

Quale affermazione è falsa riguardo alle modificazioni epigenetiche?

Richiedono sempre cambiamenti nel sequenziamento del DNA Signup and view all the answers

In che modo le metilasi di mantenimento agiscono durante la divisione cellulare?

Mantengono specifiche modificazioni in alcuni loci Signup and view all the answers

Cosa serve per attivare e spegnere i geni secondo il concetto di epigenetica?

Modificazioni del DNA e delle proteine istoniche Signup and view all the answers

Quale affermazione descrive correttamente la metilazione genetica nei nuovi filamenti di DNA?

Solo un filamento è metilato mentre l'altro rimane non metilato Signup and view all the answers

Qual è il ruolo dell'emimetilazione del DNA nella espressione degli alleli?

Può portare a un allele completamente spento Signup and view all the answers

Perché è importante avere un dosaggio medio degli alleli in alcuni geni?

Riduce l'eccesso di espressione legato a malattie Signup and view all the answers

Qual è la causa principale della Sindrome di Beckwith-Wiedemann?

Mancato controllo dell'imprinting di IGF2 Signup and view all the answers

Cosa accade al sito di legame per CTCF nel cromosoma paterno?

È metilato, permettendo l'attivazione di IGF2 Signup and view all the answers

Qual è il significato della metilazione delle citosine nel contesto dell'espressione genica?

Inibisce il legame di CTCF Signup and view all the answers

Quale fattore è responsabile della reclutamento delle coesine nel cromosoma materno?

CTCF Signup and view all the answers

Cosa comporta la mancata espressione di H19 in un contesto di sovraespressione di IGF2?

Rischio di sviluppo di tumori Signup and view all the answers

Study Notes

Iniezione di DNA e trasgenesi nei topi

Il DNA è linearizzato e tagliato con enzimi di restrizione per rimuovere le sequenze non necessarie.
Si effettuano accoppiamenti tra topi e si lava l’utero della topa per mantenere gli ovociti.
Iniezioni vengono eseguite nell'utero, seguite da coltura fino allo stadio di morula e impianto in una topa pseudogravida trattata ormonalmente.
Si ottengono topi modificati geneticamente che vengono analizzati.

Costruzione di un transgene

Il DNA inserito può integrarsi dappertutto nel genoma, a meno di specifiche linee di topi con sequenze di integrasi.
Necessità di componenti specifici per il transgene: promotore, fattori di trascrizione, cDNA, segnale di poliadenilazione (anche virale o dal ormone della crescita bovino), IRES.
Il sistema di traslocazione nel nucleo è attivato da legame con ormoni, come l'estrogeno, per la proteina Cre ricombinasi.

Controllo dell'espressione genica

Sistemi di trascrizione controllati da tetraciclina (Tet) e altre tecniche, come quelli eucariotici, risultano versatili per modificare genomi.
Il sistema estrogenico è meno comune per il controllo dell'espressione a causa della sua riconoscibilità e reattività.

Efficienza in altre specie

Altre specie hanno un’efficienza inferiore rispetto ai topi nella trasgenesi:
- 1% di efficienza con microiniezione in oociti ovini o bovini.
- 8% di efficienza con retrovirus iniettati in uova già deposte.
- Solo 1 su 224 oociti iniettati ha generato una scimmia transgenica.

Tecniche avanzate

L'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) migliora l'efficienza nella produzione di organismi geneticamente modificati.

Meccanismi di regolazione epigenetica

Proteina HP1 legata a cromo-domini agisce sulla metilazione degli istoni, influenzando espressione genica.
Complessi Polycomb, come PHO-RC e PRC2, reclutano enzimi per metilare istoni, alterando la conformazione della cromatina e regolando l'espressione genica.

Informazioni sulla metilazione

Epigenetica si occupa del mantenimento delle modificazioni della cromatina attraverso le divisioni cellulari.
La metilazione delle citosine nel DNA è guidata da DNMT1 e può influenzare il dosaggio allelico nei geni.

Caso specifico: gene IGF2 e H19

Differente espressione degli alleli di IGF2 e H19 dipende dall'origine parentale; il padre esprime IGF2, mentre la madre non esprime H19.
Un difetto di imprinting in questo locus (11p15.5) può causare la Sindrome di Beckwith-Wiedemann, correlata a sovraespressione di IGF2 e sviluppo di tumori.
Il sito di legame per CTCF è metilato nel paterno, attivando l'espressione di IGF2, mentre il sito materno mantiene l’inattivazione di IGF2.

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Description

Questo quiz esplora i processi di iniezione di DNA e trasgenesi nei topi. I partecipanti impareranno le tecniche di manipolazione genetica, inclusa la costruzione di transgene e il controllo dell'espressione genica. Scoprirai come si ottengono topi geneticamente modificati tramite queste procedure avanzate.