50 Questions
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio común utilizada para:
Facer moitas copias dunha rexión particular de ADN
Qué es un primer:
Oligonucleótidos que actúan como cebadores para a ADN polimerasa
Taq polimerasa, cebadores, ADN molde y nucleótidos, son los ingredientes principales de la reacción PCR pero ¿se requiere algo más?:
los cofactores que necesite la enzima
En la etapa de desnaturalización que Tª se debe alcanzar:
94 ºC
En la etapa de extensión que Tª en º C se debe alcanzar:
72
. Los cebadores para PCR son pedazos cortos de ADN de cadena sencilla, generalmente de unos … nucleótidos de longitud:
20 nucleótidos
La Taq polimerasa realmente es:
Una enzima ADN polimerasa
Qué cinetica sigue la PCR:
Forma de S exponencial
En la fase de anillado o annealing …:
La Tª disminuye para que los oligos cebadores se unan a la región blanco
La Taq polimerasa se aisla de:
La bacteria termófila Thermus aquaticus
Qué componente incluyen los tampones de reacción en PCR:
MgCl2
Una característica buscada en un cebador es que:
Tenga un extremo 3’ con G o C que aporta un enlace de H adicional a A y T y aporta más estabilidad
El equipo empleado para la técnica es:
Termociclador con un bloque de metal calentado o enfriado rápidamente mediante sistema peltier
Qué material no se emplea para visualizar en electroforesis los productos de PCR:
Gel de sílice
La RT-PCR emplea…:
Como molde ARN en vez de ADN y transcriptasa inversa
El objetivo de la anterior técnica es:
Síntesis de un ARNc complementario al ADN
Se realiza sobre preparaciones fijadas de tejidos en un porta:
PCR in situ
Se trabaja con 4 cebadores aumentando la sensibilidad:
PCR nested
Se trabaja con 2 ó más pares de cebadores en:
PCR multiplex
El objetivo de la anterior es:
Amplificar diferentes fragmentos de ADN
Un gen muy empleado como diana molecular en identificación de bacterias es:
rpoB o subunidad beta de la ARN polimerasa
Una forma de incrementar la especificidad en la técnica de PCR es mediante:
Un aumento en la temperatura de alineamiento
Entre las características técnicas más importantes de las polimerasas de alta fidelidad no se encuentran:
Mayores producciones de producto con cantidades mínimas de enzimas (0,5-1 mg/50 µL de reacción)
Las curvas de desnaturalización pueden utilizarse cuando ...:
Se emplean agentes intercalantes y sondas de hibridación
La síntesis de ADN termina cuando se añade ...:
Cuando se añade un ddNTP
En medicina forense, se puede amplificar un ADN desde:
Todas ellas
La amplificación con arranque en caliente ...:
Consiste en comenzar la reacción cuando y sólo cuando la temperatura de la mezcla es suficientemente alta, de forma que no se produzcan hibridaciones, y por consiguiente amplificaciones, inespecíficas.
En qué consiste la técnica de amplificación denominada Touch down ...:
Se basa en comenzar la reacción de PCR a Tª alta evitando amplificaciones inespecíficas y luego ir reduciendo la Tª progresivamente una vez copiadas las primeras secuencias diana
En qué consiste la técnica de amplificación denominada amplificación asimétrica ...: (p6 paper)
Utilizar un sólo cebador mediante amplificación lineal y no logarítmica exponencial
"La PCR clásica amplifica una secuencia de DNA cuyos extremos (donde se unen los cebadores) son conocidos. No obstante, actualmente ya es posible amplificar en otras circunstancias menos favorables. Por ejemplo ... : d (p8 paper)
Todos ellos
Una forma de incrementar la especificidad en la técnica de PCR, es ...:
Mediante un aumento en la temperatura de alineamiento
Las técnicas actuales empleadas en la PCR permiten realizar la amplificación a partir de . ......................... ng de ADN genómico, y de menos cantidad en el caso de ADNc o ADN proveniente de genes clonados en vectores:
300
. Los desoxinucleótidos trifosfatados deben adicionarse en una concentración óptima de entre ............................. µM:
50 y 200 µM
Señale la correcta ...:
La ADN polimerasa inicia la polimerización en dirección 5’-3’
En la RT-PCR es recomendable ...:
La formación previa de cADN
Existen muchos métodos para calcular la Tm de los iniciadores, pero todos toman en consideración el contenido de nucleótidos, ...:
Sobre todo G y C, la longitud del primer y la concentración de Na+ en el tubo de la PCR
Señale la falsa ...:
Cuantas más bandas se observan en la electroforesis, más concentración de producto de amplificación
Esto es, primero se realiza una PCR con un par de iniciadores externos para amplificar una región de ADN extensa, que contiene el segmento diana que se desea amplificar. Después, este producto de amplificación sirve de molde para una segunda PCR con otro par de iniciadores internos (primers anidados) para amplificar una región más pequeña (interna) corresponde a PCR...:
Anidada
. Se realiza en una muestra de tejido embebida en parafina (laminilla) o congelada y cortada en criostato. No requiere extracción del ADN del tejido. En la laminilla se añaden los reactivos necesarios para la PCR y se colocan en un termociclador especial, ya que en lugar de tener orificios para colocar tubos contiene ranuras para colocar las laminillas, corresponde a PCR ...:
PCR in situ
Para la PCR ................................. se diseñan primers capaces de hibridar solamente en secuencias con presencia de una mutación, por lo que, en caso de estar ausente, no se produce un producto de PCR. Como control se produce una PCR con primers diseñados para la amplificación de la forma silvestre del gen, cuyos resultados deben coincidir con los obtenidos con los primers que amplifican la mutación...:
PCR selectiva
Es aquella en la que el producto de PCR se analiza después de 25 a 35 ciclos en el punto previo a la saturación de la reacción, mediante un gel de electroforesis ...:
PCR de punto final
Esta modalidad de PCR permite detectar la presencia o ausencia de un fragmento de ADN determinado. Es decir, sólo reporta si una muestra es positiva o negativa ante la presencia de un determinado ADN. Se emplea para el diagnóstico de enfermedades infecciosas y sólo permite confirmar la presencia o ausencia de un determinado agente patógeno, esto es, si una persona está o no infectada...:
Cualitativa
Los sistemas de detección por fluorescencia empleados en la PCR en tiempo real pueden ser ...:
Todos ellos
El uso de SYBERGreen implica un diseño muy cuidadoso de los primers con el fin de evitar la formación de dímeros, se emplea en...:
PCR en tiempo real
Las sondas TaqMan se basan en el método...:
FRET
Señale la incorrecta acerca de PCR en tiempo real con primers LUX ...:
Al contrario que con la tecnología TaqMan, la mezcla de reacción no contiene la UNG
. Señale la incorrecta acerca de PCR Semicuantificación en tiempo real con el método DDCt ...:
La cuantificación relativa puede utilizarse para determinar la expresión de los niveles de ADN de un grupo de células o tejidos respecto a una referencia (control o condición experimental). Para la cuantificación relativa debe tenerse en cuenta que todas las muestras provienen de individuos similares; por tanto, debe realizarse un procedimiento conocido como normalización, con un gen control endógeno (constitutivo), para eliminar la variabilidad entre muestra y muestra
Una PCR de 15 ciclos, partiendo de 12 copias de ADN molde, producirá la cantidad de P ...:
1,5.10^54
Señale la falsa ...:
Mediante el uso de la PCR, una secuencia de ARN se puede amplificar millones o miles de millones de veces y producirá suficientes copias de ARN para que se analicen mediante otras técnicas. Por ejemplo, el ARN se puede visualizar por electroforesis en gel, enviar a secuenciar o digerir con enzimas de restricción y clonar en un plásmido
Señale la falsa...:
El control y el manejo correcto de cada uno de estos factores influirán en la calidad de la PCR. Esta sensibilidad es su principal característica y carece de desventajas
Study Notes
PCR Technique
- PCR (Polymerase Chain Reaction) is a common laboratory technique used to amplify specific DNA sequences.
- The main components of PCR include Taq polymerase, primers, DNA template, and nucleotides.
Primers
- Primers are short, single-stranded DNA fragments (usually 15-30 nucleotides long) used to initiate PCR amplification.
Taq Polymerase
- Taq polymerase is an enzyme isolated from the thermophilic bacterium Thermus aquaticus, used in PCR to amplify DNA sequences.
PCR Process
- Denaturation occurs at high temperatures (around 94°C) to separate the DNA strands.
- Annealing occurs at a specific temperature (around 50-65°C) for primer binding.
- Extension occurs at a temperature optimal for Taq polymerase activity (around 72°C).
PCR Variations
- RT-PCR (Reverse Transcription PCR) is used to amplify RNA sequences.
- Touchdown PCR involves gradually decreasing the annealing temperature to increase specificity.
- Asymmetric PCR involves using unequal primer concentrations to amplify one strand of DNA.
- Nested PCR involves a second PCR amplification using internal primers to increase specificity.
PCR Optimization
- Increasing specificity in PCR can be achieved by optimizing primer design, annealing temperature, and Mg²⁺ concentration.
PCR Applications
- PCR can be used in forensic medicine to amplify DNA from small samples.
- PCR can be used for in situ PCR, where the PCR reaction is performed on fixed tissue samples.
- Real-time PCR allows for simultaneous amplification and quantification of DNA sequences.
Real-Time PCR
- Real-time PCR detects the amplification process in real-time, allowing for quantitative analysis.
- SYBR Green is a fluorescent dye used in real-time PCR to detect amplified DNA.
- TaqMan probes are used in real-time PCR to detect specific DNA sequences.
Proba os teus coñecementos sobre a reacción en cadea da polimerase (PCR) e os primers utilizados nesta técnica de laboratorio común.
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