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Questions and Answers
El Western Blot es una técnica analítica usada:
El Western Blot es una técnica analítica usada:
- para detectar una proteína no especifica en un extracto crudo, mediante el uso de anticuerpos
- para detectar una proteína especifica en un extracto crudo, mediante el uso de anticuerpos (correct)
- para detectar varias proteínas especificas en un extracto crudo, mediante el uso de antígenos
- para detectar antígenos, mediante el uso de anticuerpos
Previamente al Western Blot:
Previamente al Western Blot:
- Se corre una Electroforesis SDS-PAGE (correct)
- Se realiza una cromatografía de afinidad
- Se realiza una PCR
- Ninguna
Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de
un agente entrecruzador ('cross-linking'), la bis-acrilamida en presencia de un iniciador y un
catalizador. Como iniciador se suele utilizar ...:
Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecruzador ('cross-linking'), la bis-acrilamida en presencia de un iniciador y un catalizador. Como iniciador se suele utilizar ...:
- Comassie Blue
- PEG
- TEMED
- ión persulfato (correct)
El sodio-dodecilsulfato o SDS es:
El sodio-dodecilsulfato o SDS es:
Las proteínas deben transferirse por Western Blot del gel de proteínas a una membrana
adecuada normalmente:
Las proteínas deben transferirse por Western Blot del gel de proteínas a una membrana adecuada normalmente:
La anterior también emplea:
La anterior también emplea:
Se pueden utilizar varias técnicas para la transferencia Western Blot pero con mucho el
más común debido a su velocidad y eficiencia es:
Se pueden utilizar varias técnicas para la transferencia Western Blot pero con mucho el más común debido a su velocidad y eficiencia es:
La eficiencia de la transferencia se puede evaluar antes de la sonda utilizando un tinte
removible como:
La eficiencia de la transferencia se puede evaluar antes de la sonda utilizando un tinte removible como:
En la técnica Western Blot se emplea comunmente la detección indirecta que involucra:
En la técnica Western Blot se emplea comunmente la detección indirecta que involucra:
Qué soluciones de bloqueo de membrana se emplean en Western Blot:
Qué soluciones de bloqueo de membrana se emplean en Western Blot:
Qué sistema de revelado se emplea mayormente en Western Blot:
Qué sistema de revelado se emplea mayormente en Western Blot:
Una de las siguientes operaciones no se necesita en el proceso completo de Western Blot:
Una de las siguientes operaciones no se necesita en el proceso completo de Western Blot:
Indique los pasos generales en Western Blot:
Indique los pasos generales en Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nuclear en el proceso de
Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nuclear en el proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática soluble en el
proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática soluble en el proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática unida a
citoesqueleto en el proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática unida a citoesqueleto en el proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nativa no desnaturalizada
en el proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nativa no desnaturalizada en el proceso de Western Blot:
El beta-mercaptoetanol y el DTT son ....:
El beta-mercaptoetanol y el DTT son ....:
Realmente por qué es necesario el paso de electrotransferencia a la membrana en Western
Blot:
Realmente por qué es necesario el paso de electrotransferencia a la membrana en Western Blot:
Qué inconveniente presenta la membrana de PVDF en Western Blot:
Qué inconveniente presenta la membrana de PVDF en Western Blot:
Qué sentido lleva la transferencia en Western Blot:
Qué sentido lleva la transferencia en Western Blot:
El primer paso en el procedimiento de inmunotinción es bloquear el espacio vacío en la membrana con una proteína neutral. Las proteínas en la leche o el BSA se unen a la membrana para cubrir los espacios libres, para que el anticuerpo libre no se adhiera a estas áreas más adelante de manera inespecífica. La membrana debe colocarse:
El primer paso en el procedimiento de inmunotinción es bloquear el espacio vacío en la membrana con una proteína neutral. Las proteínas en la leche o el BSA se unen a la membrana para cubrir los espacios libres, para que el anticuerpo libre no se adhiera a estas áreas más adelante de manera inespecífica. La membrana debe colocarse:
Los métodos de detección de quimioluminiscencia utilizan comúnmente anticuerpos secundarios conjugados con ...:
Los métodos de detección de quimioluminiscencia utilizan comúnmente anticuerpos secundarios conjugados con ...:
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Study Notes
Overview del Western Blot
- Técnica analítica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra.
Formación de geles de poliacrilamida
- Los geles se forman mediante la polimerización de acrilamida con un agente entrecruzador, como bis-acrilamida.
- Un iniciador y un catalizador son necesarios para este proceso.
Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)
- Utilizado comúnmente en el Western Blot para desnaturalizar proteínas y darles carga negativa, facilitando su separación en el gel.
Transferencia de proteínas
- Las proteínas se transfieren del gel a una membrana adecuada, típicamente nitrocelulosa o PVDF.
- La eficiencia de la transferencia se verifica con un tinte removible como Ponceau S.
Técnicas de transferencia
- Se utilizan múltiples métodos para la transferencia, siendo el más común el electrotransferencia por su velocidad y eficiencia.
Detección indirecta
- Esta metodología implica el uso de un anticuerpo primario seguido de un anticuerpo secundario conjugado para mejorar la señal.
Soluciones de bloqueo
- Se utilizan soluciones como leche en polvo o BSA (Bovine Serum Albumin) para bloquear sitios no específicos en la membrana y prevenir uniones inespecíficas del anticuerpo.
Sistema de revelado
- El sistema de quimioluminiscencia es ampliamente utilizado en Western Blot para detectar interacciones entre anticuerpos y proteínas.
Pasos en el Western Blot
- Preparación de la muestra y gel, corrida del gel, transferencia a la membrana, bloqueo, prueba con anticuerpos, y revelado de la señal.
Detergentes en la extracción de proteínas
- Para proteínas nucleares: se requiere un detergente como NP-40.
- Para proteínas citoplasmáticas solubles: se utiliza Triton X-100.
- Para proteínas unidas al citoesqueleto: se hace uso de detergentes como SDS o celldepot.
- Para proteínas nativas no desnaturalizadas: se emplea un detergente suave como IGEPAL.
Importancia de la electrotransferencia
- La electrotransferencia es esencial para mover las proteínas del gel a la membrana, permitiendo su posterior detección.
Inconvenientes de la membrana PVDF
- Puede ser más difícil de utilizar en comparación con otras membranas, requiriendo un tratamiento especial o activación previa.
Direccione de la transferencia
- La transferencia en Western Blot se realiza de la parte superior a la inferior del gel hacia la membrana.
Bloqueo de la membrana
- Se bloquean los espacios vacíos en la membrana para que el anticuerpo no se adhiera de manera inespecífica, utilizando proteínas similares a las de la muestra.
Anticuerpos secundarios
- Comúnmente conjugados con moléculas enzimáticas o quimioluminiscentes para facilitar la detección de la proteína diana.
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