23 Questions
El Western Blot es una técnica analítica usada:
para detectar una proteína especifica en un extracto crudo, mediante el uso de anticuerpos
Previamente al Western Blot:
Se corre una Electroforesis SDS-PAGE
Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecruzador ('cross-linking'), la bis-acrilamida en presencia de un iniciador y un catalizador. Como iniciador se suele utilizar ...:
ión persulfato
El sodio-dodecilsulfato o SDS es:
Agente desnaturalizante
Las proteínas deben transferirse por Western Blot del gel de proteínas a una membrana adecuada normalmente:
Nitrocelulosa
La anterior también emplea:
PVDF
Se pueden utilizar varias técnicas para la transferencia Western Blot pero con mucho el más común debido a su velocidad y eficiencia es:
Electrotransferencia
La eficiencia de la transferencia se puede evaluar antes de la sonda utilizando un tinte removible como:
Ponceau S
En la técnica Western Blot se emplea comunmente la detección indirecta que involucra:
1 Ab 1º que reconoce la proteína de interés y otro 2º marcado que reconoce al 1º
Qué soluciones de bloqueo de membrana se emplean en Western Blot:
Todas las anteriores
Qué sistema de revelado se emplea mayormente en Western Blot:
Enzimas colorimétricas
Una de las siguientes operaciones no se necesita en el proceso completo de Western Blot:
Centrifugación
Indique los pasos generales en Western Blot:
separación-transferencia-tinción-detección y visualización
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nuclear en el proceso de Western Blot:
NP-40 o Tritón X-100
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática soluble en el proceso de Western Blot:
Tris-HCl
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática unida a citoesqueleto en el proceso de Western Blot:
Tris-Tritón
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nativa no desnaturalizada en el proceso de Western Blot:
detergente suave no iónico
El beta-mercaptoetanol y el DTT son ....:
agentes reductores que rompen sus enlaces sulfuro, y también descomponen la proteína en una estructura lineal de aminoácidos primarios
Realmente por qué es necesario el paso de electrotransferencia a la membrana en Western Blot:
Los geles son un sustrato pobre para la inmunodetección y frágiles
Qué inconveniente presenta la membrana de PVDF en Western Blot:
Necesidad de pretratamiento con metanol y gran ruido de fondo
Qué sentido lleva la transferencia en Western Blot:
Cátodo (-) - gel - membrana - ánodo (+)
El primer paso en el procedimiento de inmunotinción es bloquear el espacio vacío en la membrana con una proteína neutral. Las proteínas en la leche o el BSA se unen a la membrana para cubrir los espacios libres, para que el anticuerpo libre no se adhiera a estas áreas más adelante de manera inespecífica. La membrana debe colocarse:
en un agitador durante toda la noche a 4 ° C
Los métodos de detección de quimioluminiscencia utilizan comúnmente anticuerpos secundarios conjugados con ...:
Peroxidasa
Testa tu cognoscentia del tecnica analytic del Western Blot con iste questionario. El Western Blot es un metodo usate pro discoperir proteínas specific in extractos crudi per medio de anticorpores.
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