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Questions and Answers
El Western Blot es una técnica analítica usada:
El Western Blot es una técnica analítica usada:
Previamente al Western Blot:
Previamente al Western Blot:
Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de
un agente entrecruzador ('cross-linking'), la bis-acrilamida en presencia de un iniciador y un
catalizador. Como iniciador se suele utilizar ...:
Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecruzador ('cross-linking'), la bis-acrilamida en presencia de un iniciador y un catalizador. Como iniciador se suele utilizar ...:
El sodio-dodecilsulfato o SDS es:
El sodio-dodecilsulfato o SDS es:
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Las proteínas deben transferirse por Western Blot del gel de proteínas a una membrana
adecuada normalmente:
Las proteínas deben transferirse por Western Blot del gel de proteínas a una membrana adecuada normalmente:
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La anterior también emplea:
La anterior también emplea:
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Se pueden utilizar varias técnicas para la transferencia Western Blot pero con mucho el
más común debido a su velocidad y eficiencia es:
Se pueden utilizar varias técnicas para la transferencia Western Blot pero con mucho el más común debido a su velocidad y eficiencia es:
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La eficiencia de la transferencia se puede evaluar antes de la sonda utilizando un tinte
removible como:
La eficiencia de la transferencia se puede evaluar antes de la sonda utilizando un tinte removible como:
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En la técnica Western Blot se emplea comunmente la detección indirecta que involucra:
En la técnica Western Blot se emplea comunmente la detección indirecta que involucra:
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Qué soluciones de bloqueo de membrana se emplean en Western Blot:
Qué soluciones de bloqueo de membrana se emplean en Western Blot:
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Qué sistema de revelado se emplea mayormente en Western Blot:
Qué sistema de revelado se emplea mayormente en Western Blot:
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Una de las siguientes operaciones no se necesita en el proceso completo de Western Blot:
Una de las siguientes operaciones no se necesita en el proceso completo de Western Blot:
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Indique los pasos generales en Western Blot:
Indique los pasos generales en Western Blot:
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Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nuclear en el proceso de
Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nuclear en el proceso de Western Blot:
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Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática soluble en el
proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática soluble en el proceso de Western Blot:
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Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática unida a
citoesqueleto en el proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína citoplasmática unida a citoesqueleto en el proceso de Western Blot:
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Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nativa no desnaturalizada
en el proceso de Western Blot:
Qué sistema detergente se requiere para extraer una proteína nativa no desnaturalizada en el proceso de Western Blot:
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El beta-mercaptoetanol y el DTT son ....:
El beta-mercaptoetanol y el DTT son ....:
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Realmente por qué es necesario el paso de electrotransferencia a la membrana en Western
Blot:
Realmente por qué es necesario el paso de electrotransferencia a la membrana en Western Blot:
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Qué inconveniente presenta la membrana de PVDF en Western Blot:
Qué inconveniente presenta la membrana de PVDF en Western Blot:
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Qué sentido lleva la transferencia en Western Blot:
Qué sentido lleva la transferencia en Western Blot:
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El primer paso en el procedimiento de inmunotinción es bloquear el espacio vacío en la membrana con una proteína neutral. Las proteínas en la leche o el BSA se unen a la membrana para cubrir los espacios libres, para que el anticuerpo libre no se adhiera a estas áreas más adelante de manera inespecífica. La membrana debe colocarse:
El primer paso en el procedimiento de inmunotinción es bloquear el espacio vacío en la membrana con una proteína neutral. Las proteínas en la leche o el BSA se unen a la membrana para cubrir los espacios libres, para que el anticuerpo libre no se adhiera a estas áreas más adelante de manera inespecífica. La membrana debe colocarse:
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Los métodos de detección de quimioluminiscencia utilizan comúnmente anticuerpos secundarios conjugados con ...:
Los métodos de detección de quimioluminiscencia utilizan comúnmente anticuerpos secundarios conjugados con ...:
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Study Notes
Overview del Western Blot
- Técnica analítica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra.
Formación de geles de poliacrilamida
- Los geles se forman mediante la polimerización de acrilamida con un agente entrecruzador, como bis-acrilamida.
- Un iniciador y un catalizador son necesarios para este proceso.
Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)
- Utilizado comúnmente en el Western Blot para desnaturalizar proteínas y darles carga negativa, facilitando su separación en el gel.
Transferencia de proteínas
- Las proteínas se transfieren del gel a una membrana adecuada, típicamente nitrocelulosa o PVDF.
- La eficiencia de la transferencia se verifica con un tinte removible como Ponceau S.
Técnicas de transferencia
- Se utilizan múltiples métodos para la transferencia, siendo el más común el electrotransferencia por su velocidad y eficiencia.
Detección indirecta
- Esta metodología implica el uso de un anticuerpo primario seguido de un anticuerpo secundario conjugado para mejorar la señal.
Soluciones de bloqueo
- Se utilizan soluciones como leche en polvo o BSA (Bovine Serum Albumin) para bloquear sitios no específicos en la membrana y prevenir uniones inespecíficas del anticuerpo.
Sistema de revelado
- El sistema de quimioluminiscencia es ampliamente utilizado en Western Blot para detectar interacciones entre anticuerpos y proteínas.
Pasos en el Western Blot
- Preparación de la muestra y gel, corrida del gel, transferencia a la membrana, bloqueo, prueba con anticuerpos, y revelado de la señal.
Detergentes en la extracción de proteínas
- Para proteínas nucleares: se requiere un detergente como NP-40.
- Para proteínas citoplasmáticas solubles: se utiliza Triton X-100.
- Para proteínas unidas al citoesqueleto: se hace uso de detergentes como SDS o celldepot.
- Para proteínas nativas no desnaturalizadas: se emplea un detergente suave como IGEPAL.
Importancia de la electrotransferencia
- La electrotransferencia es esencial para mover las proteínas del gel a la membrana, permitiendo su posterior detección.
Inconvenientes de la membrana PVDF
- Puede ser más difícil de utilizar en comparación con otras membranas, requiriendo un tratamiento especial o activación previa.
Direccione de la transferencia
- La transferencia en Western Blot se realiza de la parte superior a la inferior del gel hacia la membrana.
Bloqueo de la membrana
- Se bloquean los espacios vacíos en la membrana para que el anticuerpo no se adhiera de manera inespecífica, utilizando proteínas similares a las de la muestra.
Anticuerpos secundarios
- Comúnmente conjugados con moléculas enzimáticas o quimioluminiscentes para facilitar la detección de la proteína diana.
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Description
Testa tu cognoscentia del tecnica analytic del Western Blot con iste questionario. El Western Blot es un metodo usate pro discoperir proteínas specific in extractos crudi per medio de anticorpores.
