Técnicas de detección de bacterias recombinantes
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Questions and Answers

¿Cuál es el propósito principal de agregar IPTG junto con X-gal en el cribado azul-blanco?

  • Actuar como sustrato para la β-galactosidasa
  • Bloquear la expresión del gen lacZ
  • Inducir la expresión del gen lacZ (correct)
  • Activar la hidrólisis de la lactosa

    • ¿Qué es el resultado de la hidrólisis de X-gal por la β-galactosidasa?

  • Un pigmento azul insoluble (correct)
  • Un compuesto incoloro
  • Un sustrato para la β-galactosidasa
  • Un pigmento rojo soluble

    • ¿Cuál es el propósito de los cebadores en la PCR de colonias?

  • Bloquear la expresión del gen lacZ
  • Inducir la expresión del gen lacZ
  • Verificar la presencia del inserto (correct)
  • Amplificar la construcción genética

    • ¿Cuál es el papel de la β-galactosidasa en el cribado azul-blanco?

    <p>Hidrolizar el X-gal</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué es el resultado de la expresión del gen lacZ en E. coli?

    <p>La producción de β-galactosidasa</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el objetivo principal de la electroforesis de proteínas SDS-PAGE?

    <p>Separar proteínas en función de su tamaño molecular</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué es el resultado del proceso de polimerización de la acrilamida?

    <p>Una estructura reticulada no tóxica</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el papel del gel concentrador en la electroforesis de proteínas SDS-PAGE?

    <p>Evitar que las proteínas se dispersen en el gel</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué componentes se utilizan en el tampón para la conducción eléctrica y la separación de proteínas?

    <p>Glicina y TRIS-HCl</p> Signup and view all the answers

    ¿Por qué la banda de glicina se mueve lentamente en el gel concentrador?

    <p>Porque la glicina se encuentra en estado neutro</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Genes reporteros atreves del cribado o detección azul/blanco

    • Técnica rápida y eficaz para la identificación de bacterias recombinantes basada en el operón lac de E. coli.
    • La presencia de lactosa en el entorno activa el gen lacZ, produciendo la enzima β-galactosidasa que metaboliza la lactosa.
    • La técnica utiliza el sustrato cromogénico X-gal y el inductor IPTG para seleccionar clones que contienen ADN recombinante.

    Funcionamiento del cribado azul/blanco

    • X-gal se hidroliza en presencia de β-galactosidasa, produciendo un pigmento azul insoluble.
    • Las colonias formadas por células no recombinantes aparecen de color azul, mientras que las recombinantes aparecen de color blanco.
    • Las colonias recombinantes deseadas se pueden recoger y cultivar fácilmente.

    Características de los primers o cebadores

    • Especificidad del inserto: cebadores que se hibridan con secuencias específicas en el inserto.
    • Diseño de cebadores en secuencia de vectores: cebadores diseñados en las regiones flanqueadas del inserto.
    • Orientación de los cebadores: orientación de los cebadores para localizar el fragmento.

    PCR de colonias

    • Método para seleccionar rápidamente colonias de levaduras o bacterias que han crecido en medios selectivos después de un paso de transformación.
    • Verifica que la construcción genética deseada esté presente o amplifica una parte de la construcción.

    Electroforesis de proteínas SDS-PAGE

    • Basado en la migración de moléculas a través de un sistema de mallas generadas por matrices químicas (poliacrilamida).
    • Permite separar proteínas en función de su tamaño molecular cuando se someten a una corriente eléctrica.
    • Puede observar las proteínas en dos tipos de condiciones: nativas o desnaturalizadas.

    Poliacrilamida

    • Homopolímero de acrilamida soluble en agua.
    • No es un compuesto con gran toxicidad aguda, pero es cancerígeno, teratogénico y neurotóxico en exposición continua.
    • La polimerización reduce el efecto tóxico en un 95% al perdurar los grupos vinilo altamente reactivos.

    Gel de electroforesis

    • Se requieren dos fases dentro de un mismo gel: gel concentrador y gel separador.
    • El gel concentrador evita la dispersión de proteínas y las alinea en una banda delgada.
    • Se utiliza un tampón que contiene glicina y TRIS-HCl para la conducción eléctrica y la separación de proteínas.

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    Description

    Aprende sobre la técnica de genes reporteros atrevidos del cribado o detección azul/blanco, una herramienta rápida y eficaz para identificar bacterias recombinantes. Descubre cómo funciona y sus aplicaciones.

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