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Questions and Answers
¿Cuál es la característica principal del relleno utilizado en las columnas de HPLC Merck?
¿Cuál es la característica principal del relleno utilizado en las columnas de HPLC Merck?
En el procedimiento de restauración de una columna RP-18 para muestras no solubles en agua, ¿cuál de los siguientes solventes se utiliza primero?
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¿Qué tipo de partículas presenta la columna Lichrospher?
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¿Cuál es el diámetro interno de las columnas en HPLC mencionadas?
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En la filtración de soluciones acuosas, ¿qué tipo de filtro se recomienda usar?
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¿Cuál es la función principal de una precolumna en HPLC?
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¿Cuál de los siguientes compuestos tiene una polaridad alta?
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Qué tipo de solvente se debe utilizar en HPLC para evitar interferencias en detectores de fluorescencia?
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¿Cuál de los siguientes NO es un método de desgasificación de solventes en HPLC?
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¿Cuál de las siguientes afirmaciones es cierta para la filtración de solventes en HPLC?
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Study Notes
HPLC: Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia
- Es una técnica analítica que separa componentes de una mezcla líquida.
- Se basa en la diferencia de velocidad de migración de los componentes entre las fases estacionaria y móvil.
- La fase estacionaria puede ser un sólido adsorbente, una fase ligada líquida, resina cambiadora de iones o un ligando de afinidad.
- La fase móvil es un líquido que transporta la muestra a través de la fase estacionaria.
- Las interacciones entre los componentes y las fases determinan la separación.
Tipos de HPLC
- Fase normal: La fase estacionaria es polar y la fase móvil es menos polar.
- Fase reversa: La fase estacionaria es apolar y la fase móvil es polar.
Componentes de un equipo de HPLC
- Reservorios de disolventes (fase móvil): Almacenan los disolventes.
- Bomba de presión: Impulsa el disolvente a presión constante.
- Sistema de inyección de muestra: Introduce la muestra en el sistema.
- Precolumna: Anterior a la columna principal, ayuda a eliminar impurezas.
- Columna: Contiene la fase estacionaria.
- Detector: Detecta y mide los componentes separados.
- Ordenador y software: Registra y procesa los datos del análisis, incluyendo cromatogramas.
Fases Químicamente Ligadas
- Son fases estacionarias donde las moléculas orgánicas se unen químicamente al soporte.
- Un ejemplo común son las columnas C18 (octadecilsililo), C8 (octasil), C4, etc.
- Las diferentes cadenas laterales (grupos funcionales) determinan las interacciones con el soluto.
Métodos de filtración y desgasificación
- La filtración elimina partículas sólidas grandes.
- La desgasificación elimina burbujas de gases en el disolvente, mejorando la precisión.
Precolumnas
- Son pequeños empaques colocados antes de la columna principal.
- Sirven para filtrar la muestra y el disolvente, protegiendo la columna principal.
Columnas
- Son tubos rellenos con una fase estacionaria.
- Se determinan por su diseño, longitud y diámetro; tamaño de la partícula de la fase estacionaria; y el tamaño de los poros de la misma.
- Las columnas deben lavarse y regenerarse para asegurar la calidad de los análisis.
Detectores en HPLC
- Índice de refracción: Detecta cambios en el índice de refracción del eluyente.
- UV/Vis (Fotodiodo de matriz): Detecta compuestos absorbiendo UV/Vis.
- Fluorescencia: Mide la fluorescencia de los componentes.
- Conductividad: Mide la conductividad eléctrica del eluyente.
- Espectrometría de masas (LC/MS): Combina la separación cromatográfica con técnicas de espectrometría de masas para identificar moléculas más detalladamente.
- Dispersión de luz evaporativa: Detecta la cantidad de luz dispersada.
Derivatización
- Es un proceso donde un analito se transforma en un derivado con mejores propiedades para el análisis cromatográfico.
- Se utiliza para mejorar la volatilidad, la estabilidad térmica o la detectabilidad.
- Ejemplo: mejoramiento de la detección usando fluorescencia.
Cálculos en Cromatografía
- Recta de calibrado normal: Se grafican las concentraciones de los patrones en función de la respuesta del detector.
- Patrón interno: Un estándar específico se agrega a las muestras y patrones.
- Factor de respuesta (FR): Refiere a la proporción de respuesta del detector para un analito en relación con el patrón.
Aplicaciones de HPLC
- Análisis de alimentos (azúcares, colorantes, vitaminas)
- Productos farmacéuticos
- Bioquímica
- Medio ambiente (contaminantes)
- Química forense
- Control de calidad
- Determinación de diferentes compuestos en una variedad de matrices.
Problemas comunes en HPLC
- Presión alta
- Pérdida de resolución
- Picos hendidos
- Variación en los tiempos de retención
- Línea base con ruido
Recomendaciones para la adquisición de un sistema HPLC
- Número de muestras y tipos de ensayos
- Facilidad de reemplazo de sellos
- Exactitud y precisión del sistema de bombas
- Sistema de gradiente con suavidad y reproducibilidad de la mezcla
- Tipo de servicio de la casa proveedora
- Suministro de software y compatibilidades.
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Description
Este cuestionario evalúa tus conocimientos sobre técnicas de HPLC y sus componentes esenciales, como el relleno de las columnas, tipos de solventes y métodos de filtración. Responde preguntas específicas que te ayudarán a profundizar en tu comprensión de la cromatografía líquida de alta resolución.
