Preparação de Tecidos e Coloração

Preparação de Tecidos

• A fixação é o primeiro passo após biópsia, essencial para preservar a estrutura tecidual.
• O fixador mais comum é formaldeído a 37%, que interrompe o metabolismo celular, previne autólise e mata microrganismos.
• Após a fixação, as peças são incluídas em parafina para formar um bloco que permite cortes finos (4 a 6 μm) com o micrótomo.
• A coloração dos cortes é fundamental para a análise precisa.

Coloração com Hematoxilina-Eosina

• O processo de coloração inicia-se com a hematoxilina, seguida pela desidratação e coloração com eosina.
• Estruturas teciduais basofílicas se coram em tons de roxo ou azul escuro devido à afinidade pela hematoxilina.
• Corantes básicos, como a hematoxilina, têm carga positiva e se ligam a ácidos nucleicos e polissacarídeos.
• Estruturas acidofílicas coram-se de vermelho ou rosado por atração aos corantes ácidos, que têm carga negativa.

Componentes e Perdas em Tecidos

• Após fixação e coloração, permanecem ácidos nucleicos, complexos proteicos e alguns fosfolipídios.
• Componentes perdidos incluem pequenos RNAs, proteínas menores, lipídios neutros (triglicerídios) e carboidratos de alto peso molecular (glicogênio).

Metacromasia

• Refere-se à mudança no espectro de absorção de corantes básicos que se ligam a polímeros poliânions.
• A coloração com azul de toluidina pode resultar em agregados que absorvem em comprimentos de onda inferiores, aparecendo como vermelhos.

Artefatos no Processamento

• Artefatos são erros que podem ocorrer em qualquer estágio do processamento de tecidos.
• A retração dos tecidos pode criar espaços artificiais, influenciada por fixação inadequada, etanol ou calor da parafina. Dessa forma, a inclusão em resina pode reduzir a retração.
• A perda de moléculas durante desidratação e clareamento pode gerar mais espaços artificiais.

Principais Tecidos Animais

• Os quatro principais tipos são: tecido epitelial, tecido conjuntivo, tecido muscular e tecido nervoso.
• A matriz citoplasmática é composta por um sol e gel aquoso, contendo íons e diversas moléculas orgânicas.
• O citoesqueleto, formado por microfilamentos, filamentos intermediários e microtúbulos, desempenha papéis críticos na estrutura e função celular.

Proteínas do Citoesqueleto

• Microfilamentos de Actina: compostos por actina, importantes para a estrutura da célula, adesão intercelular e contração celular.
• Proteínas como filamina e espectrina associam-se aos filamentos de actina, formando um córtex celular flexível adjacente à membrana plasmática.

Filamentos Intermediários

• Estruturas específicas de diferentes tipos de tecido, que se organizam continuamente em resposta a necessidades celulares.