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Anatomie et Cytologie Pathologiques : Objectifs du Cours

• Connaître la démarche diagnostique en pathologie, incluant la macroscopie, la préparation des échantillons et l'interprétation des résultats, en analogie avec les techniques complémentaires.
• Identifier les différents types de prélèvements : cytologie, histologie, et examen extemporané.
• Maîtriser les techniques d'étude des prélèvements tissulaires et cellulaires, ainsi que leurs limites.
• Comprendre l'importance du compte rendu anatomopathologique dans la prise en charge multidisciplinaire du patient.
• Connaître l'examen extemporané et ses limites.
• Connaître les banques tissulaires et leur importance en épidémiologie de la pathologie.
• Précision du diagnostic essentielle pour une prise en charge efficace du patient.
• Confirmation de la nature exacte d'une tumeur requiert des examens morphologiques basés sur l'anatomopathologie, incluant dissection et examen microscopique.
• L'analyse du prélèvement s'appuie sur des méthodes de thérapie et de médecine personnalisée, adaptant les traitements au patient au lieu d'une approche uniforme.

Anatomie Pathologique

• Implique l'observation et le diagnostic de cellules ou de tissus (tumeurs, inflammation).
• Permet l'évolution vers la médecine personnalisée grâce au diagnostic, suivi des pronostics et des traitements.
• Observations initiales faites à l'œil nu, puis au microscope, appliquant des techniques basées sur la morphologie des cellules et tissus.
• C'est l'application de diverses méthodes d'analyse, basées sur la morphologie, à des cellules et tissus prélevés pour le diagnostic, le pronostic, et la compréhension des maladies.
• Approche basée sur une sémiologie diagnostique via un raisonnement analogique, comparant la morphologie des tissus sains et pathologiques et liée aux constatations biologiques.
• Avancées récentes notables : biologie moléculaire, thérapie génique, médecine personnalisée.

Distinction en Anatomie Pathologique

• Histologie : étude microscopique de la structure des tissus sains normaux.
• Anatomie : étude macroscopique (à l'œil nu) des organes sains, incluant leur description, situation et rapports.
• Anatomie pathologique : étude macro- et microscopique des modifications causées par les maladies dans les organes, tissus et cellules, allant de l'étude macroscopique à microscopique.
• Modifications morphologiques entre normal et pathologique correspondent à des lésions.
• Agents lésionnels impliqués.

Agents Lésionnels

• Agents étrangers à l'organisme :
  • Physiques : chaleur, froid (gelures, nécroses des extrémités), radiations.
  • Chimiques : caustiques, médicaments (maladies iatrogènes).
  • Microbiens, viraux, parasitaires.
• Agents appartenant à l'organisme :
  • Acide urique (urate de sodium) : responsable des crises de goutte, surtout chez les personnes âgées.
  • Bilirubine : cause de l'ictère nucléaire chez le nouveau-né.
• Agents ayant subi une modification :
  • Considérés comme étrangers, provoquant une réaction et permettant la datation de la lésion.
  • Temps nécessaire pour que le corps réagisse face à un agent lésionnel.
  • Infarctus aigu : peut ne rien révéler à l'autopsie en cas de décès immédiat.
• Maladies de causes inconnues : cancers.

Classification des Lésions

• Dystrophies : dues à un trouble de trophicité par manque d'apport sanguin ou défaut hormonal.
• Inflammations : réactions d'un tissu à un agent agresseur via nécrose tissulaire et cellulaire.
• Tumeurs et états précancéreux : résultent d'une rupture de l'homéostasie cellulaire, où les cellules immortelles prolifèrent.
• Dysembryoplasies : dues à un trouble du développement embryonnaire.

Moyens d'Étude

• Examen macroscopique :
  • Réalisé à l'œil nu, pouvoir séparateur d'environ 1mm.
  • Toute lésion macroscopique exige une analyse microscopique pour préciser la base tissulaire et cellulaire.
• Examen microscopique :
  • Limite pratique de l'observation : 1 micron.
  • Types de prélèvements : cellules isolées (cytologie) et fragments tissulaires (histologie).
  • État pathologique dépisté par cytologie confirmé par histologie d'un fragment biopsique tissulaire.

Examen Cytologique

• Étude microscopique de cellules séparées du contexte, isolées, en amas ou étalées.
• Buts :
  • Cytologie de dépistage (frottis col utérin, bronches, vessie).
  • Cytologie hormonale (anomalies du cycle menstruel).
  • Cytologie hématologique (hémogramme, myélogramme, adénogramme, splénogramme).
• Obtention par exfoliation ou grattage :
  • Isolement spontané (desquamation muqueuse/séreuse, migration).
  • Isolement artificiel (raclage, brossage, aspiration dirigée, ponction).
• Avantages :
  • Prélèvements moins traumatisants, plus faciles à répéter, résultats plus rapides, techniques moins élaborées.
  • Observation des détails cellulaires, notamment du noyau.
• Inconvénients :
  • Résultats moins fiables, impossibilité de préciser l'extension, l'envahissement et la désorganisation tissulaire.

Examen Histologique

• Prélèvements tissulaires obtenus par divers procédés : petits bouts (biopsie) ou organes entiers.
• Fixation impérative avec du formol pour éviter la détérioration et la rendre interprétable.
• Buts de la fixation :
  • Éviter la déshydratation.
  • Prévenir la putréfaction.
• Fixateurs :
  • Formol : principal fixateur (pièces volumineuses, ne conserve pas le glycogène). Holland.
  • Bouin Jaune (petites biopsies, conserve le glycogène).
• Règles d'une fixation réussie :
  • Quantité (du fixateur) et temps suffisant.
  • Fragment tissulaire < 0,5cm.
  • Fixateur : 10 à 20 fois le volume du fragment.
  • Délai de fixation : le plus rapide possible.
  • Temps de fixation > 6h (mieux vaut sur-fixer que sous-fixer) et au moins 24h avant analyse.
  • Ne jamais mettre les organes entiers dans un petit flacon
  • Ne jamais utiliser de sérum physiologique (pas un fixateur).
  • Ne jamais utiliser de compresses et utiliser une quantité de formol adaptée à la quantité de tissu.
• Une mauvaise fixation rend l'étude histologique difficile, voire impossible et de plus, mettre l'organe est peu productif.

Importance du Temps de Fixation

• Fixer le cerveau pendant au moins 20 jours.
• Après la fixation, sélectionner la zone d'intérêt.
• Durcir les tissus pour faciliter la coupe avec un microtome d'une épaisseur de 5 microns.
• Automate (Déshydratation, Élimination de l'alcool, Inclusion et Solidarisation) ou Étape Manuelle (Microtomie et analyse microscopique)

Étapes de la Technique Histologique

• A : Fixation au formol pendant 6 à 12h, notamment avec petite formation tumorale.
• B : Cassette.
• C : Bain de déshydratation (1 nuit) et bain dans paraffine.
• D : Récupération du prélèvement.
• E : Préparation des blocs de paraffine.
• F : Microtome.
• G : Avant coloration, lame en verre avec le tissu coupé à 5 microns avec paraffine autour.

Archives et Informations Complémentaires

• Conservation des blocs de paraffine faisant partie du dossier médical pendant plus de 20 ans.
• Référencement des coupes avec l'identité du patient.
• Évolution des techniques avec scanners de lames permettant de visualiser les résultats sur ordinateur.
• Délai de 24 à 48h pour obtenir un résultat anatomopathologique, demandant au moins 6h de fixation pour les petits prélèvements.
• L'analyse d'une pièce de laryngectomie nécessite l'évaluation de la nature tumorale, des marges et des ganglions pour orienter les prélèvements.

Autres Types d'Examens

• Nécessaires lorsque l'examen macro et microscopique ne suffit pas.
• Examen extemporané (pendant l'opération) :
  • Utile au geste opératoire.
  • Réalisé à l'état frais, sans fixation, avec un filomicrotome et réalisation immédiate.
  • Le prélèvement est orienté diagnostique et thérapeutique.
  • Moins fiable qu'un examen histologique standard, doit être confirmé.
  • Prélèvement frais sans délai, contexte clinique et limites de l'examen essentiels.
  • Inutile si la nature est déjà connue.
  • Ne pas utiliser : fixateur, sérum physiologique, compresses, etc.
  • Les prélèvements se font dans un tube sec.
  • Coupes en congélation à -20°C (coupes épaisses).
  • Utilisation d'un seul colorant avec impossibilité sur les os et nécessite un temps de décalcification.

Immuno-histochimie

• Nécessaire pour différencier les lymphocytes T et B.
• Réaction anticorps-antigène pour indiquer un marqueur, méthode de caractérisation des coupes tissulaires.
• L'examen immuno-histochimique permet de mettre évidence des constituants cellulaires (protéines) ayant des propriétés antigéniques.
• Utilisation d'anticorps spécifiques sur coupes histologiques en paraffine ou congelées.
• Amplification de la réaction antigène/anticorps révélée par un colorant.

Microscopie Électronique

• Utilisation d'un faisceau d'électrons pour visualiser des détails cellulaires (2000 à 200 000 fois) et moléculaires
• Conditions : fixation précoce, fixateurs spéciaux, fragments très petits inclus dans résines et coupes ultra-fines.
  • Technique longue et informations focalisées.

Biologie Moléculaire (Hybridation in situ et PCR)

• Utilisée sur prélèvements tissulaires fixés au formol, permet d'extraire l'ADN pour mieux caractériser les tumeurs et cibler la thérapie.

Gestion du Prélèvement Biologique

• Comprend examen macroscopique, fixation et tumorothèque pour examen moléculaire.
• Orientation des pièces opératoires du sein essentielle pour garantir l'excision complète de la tumeur.
• Marquage à l'encre de Chine pour orienter la pièce lors de l'examen microscopique pour assurer une excision complète de la tumeur.
• Tumorothèque action de stocker des tissus à des températures cryogéniques dans le but de :
  • Compléter le diagnostic du patient.
  • Recherche et conservation patrimoniale.
  • Un prélèvement de mauvaise qualité au départ sera de mauvaise qualité après traitement.

Conclusion sur la Gestion du Prélèvement Biologique

• Examen macroscopique.
• Fixation/tumorothèque (si possible) et réalisation de préparation microscopique.
• Interprétation par un médecin.

Attentes du Médecin de l'Examen Anatomo-Pathologique

• Obtention de données diagnostiques, pronostiques et indications thérapeutiques.

Importance de l'Examen d'Anatomopathologie en Cancérologie

• Examen fondamental pour le diagnostic, la détermination du type, des caractéristiques d'agressivité et de l'extension du cancer, permettant d'adapter la thérapeutique.

Questions de Révision

Une biopsie se révèle être une tumeur formant l'os, il faut :

• Réponse: On pèse, on mesure, on oriente le prélèvement, on en garde un échantillon pour la tumorothèque et on le fixe dans le formol. Est-il possible de réaliser un examen extemporané sur une tumeur osseuse
• Réponse: Ce n'est pas possible car c'est du tissu osseux et donc calcifié. De plus, ça ne servirait à rien car une biopsie a déjà été réalisée et analysée, ce serait répéter la première en moins précis.