Molecular Biology Technique

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Questions and Answers

Pourquoi la lyse des bactéries et la dénaturation de l'ADN sont-elles nécessaires lors du criblage des bactéries transformées?

Pour faciliter la fixation de la sonde radioactive spécifique

Quel est le but principal de la sélection des bactéries transformées sur un milieu avec antibiotique?

Éliminer les bactéries non transformées

Qu'est-ce qu'une banque d'ADNc?

Une collection d'ADNc obtenus par réverse-transcription d'ARNm

Quelle méthode est utilisée pour identifier les colonies qui ont la séquence du gène d'intérêt?

Hybridation spécifique entre la sonde et les colonies bactériennes Signup and view all the answers

Quel est le rôle de la digestion partielle dans la construction d'une banque d'ADNc?

Produire des fragments d'ADN de taille spécifique Signup and view all the answers

Quel est l'avantage principal de l'utilisation d'ADNc en recherche?

Permettre l'étude de l'expression des gènes dans différents tissus et stades de développement Signup and view all the answers

Quel est le but de la transcription inverse dans la synthèse d'ADNc?

Convertir l'ARNm en ADNc Signup and view all the answers

Quel est le rôle de la sonde radioactive spécifique dans le criblage des bactéries transformées?

Faciliter l'hybridation spécifique Signup and view all the answers

Quelle est la température à laquelle se produit l'elongation lors de la synthèse de l'ADNc ?

42°C Signup and view all the answers

Quel est le rôle de la reverse transcriptase dans la synthèse de l'ADNc ?

Produire l'ADNc à duplex ARN/ADN Signup and view all the answers

Quelle est la méthode utilisée pour dégrader l'ARN lors de la synthèse du second brin d'ADNc ?

Digestion ménagée à la RNase H Signup and view all the answers

Quel est le rôle de l'ADN polymérase I dans la synthèse du second brin d'ADNc ?

Synthétiser l'ADN et dégrader les amorces Signup and view all the answers

Quel est le but du clonage d'une banque d'ADNc ?

Obtenir une grande quantité d'ADNc Signup and view all the answers

Quel est le rôle de la membrane de nitrocellulose dans le criblage des colonies de bactéries transformées ?

Avoir une forte affinité pour les acides nucléiques Signup and view all the answers

Quel est le but de l'hybridation sur colonies après le clonage ?

Sélectionner les colonies de bactéries transformées Signup and view all the answers

Quel est le rôle de l'enzyme de restriction dans le clonage d'une banque d'ADNc ?

Digerer le fragment d'ADNc Signup and view all the answers

Quel est le but principal d'une banque d'ADN?

De stocker des fragments d'ADN pour les études futures Signup and view all the answers

Quel est l'objectif principal de la digestion enzymatique ménagée dans la construction d'une banque d'ADN génomique?

Obtenir des fragments d'ADN de taille homogène Signup and view all the answers

Comment les fragments d'ADN sont-ils insérés dans les bactéries?

Par transformation Signup and view all the answers

Quelle est la caractéristique principale d'un ADNc?

Il est synthétisé à partir d'un ARNm mature Signup and view all the answers

Qu'est-ce qu'une banque d'ADN génomique?

Une collection de clones cellulaires contenant l'ensemble de l'ADN génomique Signup and view all the answers

Quel est le but de la sélection des bactéries transformées dans la construction d'une banque d'ADN génomique?

Sélectionner les bactéries contenant des vecteurs recombinants Signup and view all the answers

Pourquoi les banques d'ADN sont-elles utiles?

Elles permettent de conserver des fragments d'ADN identifiables et manipulables Signup and view all the answers

Quel est le principe du criblage « blanc-bleu » utilisé dans la construction d'une banque d'ADN génomique?

Détection de l'insertion d'un ADN étranger dans un vecteur de clonage Signup and view all the answers

Qu'est-ce qu'un clone bactérien?

Une bactérie qui contient un vecteur recombinant Signup and view all the answers

Comment sont créés les vecteurs recombinants?

En digérant l'ADN génomique et le vecteur de clonage avec la même enzyme de restriction Signup and view all the answers

Quel est le rôle de la transcription inverse dans la synthèse d'ADNc?

Synthétiser l'ADNc à partir d'un ARNm mature Signup and view all the answers

Quelle est la principale application des ADNc en recherche?

Étude de la fonction des gènes Signup and view all the answers

Quel est le rôle de l'enzyme de restriction?

De digérer l'ADN génomique et le vecteur de clonage Signup and view all the answers

Quel est le mécanisme qui permet aux bactéries transformées de résister à l'ampicilline?

Expression d'un gène de résistance à l'ampicilline Signup and view all the answers

Comment sont sélectionnés les clones de la banque d'ADN?

Par résistance aux antibiotiques Signup and view all the answers

Quelle est la caractéristique principale d'une banque d'ADNc?

Contient la totalité des ADNc de l'organisme étudié Signup and view all the answers

Quel est le pourcentage des ARNm dans les ARN totaux?

3-5% Signup and view all the answers

Quel est le rôle de la queue polyA dans la purification des ARNm?

Elle facilite la liaison avec les billes recouvertes d'oligo dT Signup and view all the answers

Quel est le rôle des inhibiteurs chimiques de RNases dans la réaction de reverse transcription?

Ils freinent la dégradation des ARN Signup and view all the answers

Quelle est la caractéristique principale des ADNc par rapport à l'ADN in vivo?

Ils sont synthétisés in vitro Signup and view all the answers

Quel est le résultat de la réaction de transcription inverse?

Un ADNc simple brin Signup and view all the answers

Quel est le rôle de la polymérase ADN dans la synthèse de l'ADNc?

Elle synthétise de l'ADN à partir d'un ADNc simple brin Signup and view all the answers

Quel est l'avantage principal de l'utilisation d'ADNc en recherche sur les gènes exprimés?

Il permet d'analyser les gènes exprimés dans différents tissus et à différents moments Signup and view all the answers

Quel est le résultat final de la synthèse de l'ADNc par transcription inverse?

Un ADNc double brin Signup and view all the answers

Study Notes

La réplication de l'ADN est suivie d'une lyse des bactéries et d'une dénaturation de l'ADN en deux étapes.
La sonde radioactive spécifique de la séquence ciblée est incubée avec les colonies bactériennes pour identifier celles qui contiennent une partie du gène ou le gène entier.
La visualisation des colonies hybridées se fait par autoradiographie, puis les colonies d'intérêt sont repérées dans la boîte de Pétri en comparant avec la membrane.
La sélection des bactéries transformées se fait sur un milieu avec antibiotique pour éliminer les bactéries non transformées.
Le criblage blanc-bleu permet de discriminer les bactéries non recombinantes.
L'hybridation sur colonies permet d'identifier les colonies qui ont la séquence du gène d'intérêt.
La banque d'ADNc est une collection de clones cellulaires qui, pris dans leur ensemble, contiennent la totalité des ADN complémentaires de l'organisme étudié.
Un ADNc est un ADN qui correspond à un ARN et est artificiellement synthétisé à partir d'un ARNm mature extrait d'une cellule donnée à un moment donné.
Les banques d'ADN sont des collections de fragments d'ADN insérés dans des vecteurs de clonage, stockés dans des bactéries qui assurent le maintien et la réplication du fragment d'ADN.
La construction d'une banque d'ADN génomique implique l'isolation et la purification de l'ADN génomique, la digestion enzymatique ménagée, l'incorporation de chaque fragment dans un vecteur et la transformation de bactéries compétentes.
La banque d'ADN génomique est une collection de clones cellulaires qui, pris dans leur ensemble, contiennent la totalité de l'ADN génomique de l'organisme étudié.
La synthèse d'un ADNc se fait en deux étapes : la réaction de transcription inverse d'un ARNm pour donner un ADNc simple brin, puis la copie du premier brin par une ADN polymérase pour donner un ADNc double brin.

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