Mikrobiologie: E. coli Wachstum und Lysozym
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Questions and Answers

Was ist die Funktion von Lysozym im Zusammenhang mit der bakteriellen Zellwand?

  • Lysozym synthetisiert neue Murein-Moleküle in der Zellwand.
  • Lysozym spaltet die β-1,4-glykosidischen Bindungen zwischen N-Acetylglucosamin und N-Acetylmuraminsäure. (correct)
  • Lysozym ist ein Bestandteil der bakteriellen Zellwand und sorgt für deren Stabilität.
  • Lysozym baut die Peptidbrücken zwischen den Murein-Ketten ab.

Welche Temperatur zeigt die höchste Wachstumsrate für E. coli an?

  • 37°C (correct)
  • 28°C
  • 32°C
  • 44°C

Was geschieht bei Temperaturen über 40°C für E. coli?

  • Die Enzymreaktionen laufen optimal.
  • Es tritt Hitzestress auf. (correct)
  • Die Zellmembran wird stabiler.
  • Das Wachstum wird stark beschleunigt.

Welcher Faktor hat bei einer Temperatur < 37°C einen Einfluss auf die Wachstumsrate von E. coli?

<p>Die enzymatische Aktivität läuft suboptimal. (A)</p> Signup and view all the answers

Was ist die Verdopplungszeit von E. coli bei 28°C?

<p>66 Minuten (B)</p> Signup and view all the answers

Wie verhält sich die Wachstumsrate von E. coli bei 37°C im Vergleich zu 32°C?

<p>Sie ist höher bei 37°C. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche Funktion hat Lysozym in Bezug auf die Zellwand?

<p>Lysozym ermöglicht den Abbau der Mureinschicht. (B)</p> Signup and view all the answers

Was sind Protoplasten?

<p>Stoffwechselaktive, energisierte Zellkörper. (D)</p> Signup and view all the answers

Warum sind Protoplasten osmotisch empfindlich?

<p>Sie sind ohne Zellwand sehr anfällig für osmotische Veränderungen. (D)</p> Signup and view all the answers

In welchen Medien sind Protoplasten stabil?

<p>In isotonischen oder schwach hypertonischen Medien. (A)</p> Signup and view all the answers

Was geschieht, wenn die Zellwand einer Zelle enzymatisch aufgelöst wird?

<p>Die Zelle verliert ihre durch die Wand bestimmte Form. (C)</p> Signup and view all the answers

Wofür werden pflanzliche Protoplasten häufig verwendet?

<p>Zur Einschleusung von Fremd-DNA. (B)</p> Signup and view all the answers

Was passiert mit Bakterienzellen, die noch Zellwandreste haben?

<p>Sie werden als Sphäroplasten bezeichnet. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche Rolle spielt die Ca2+ Bindung in der Membranstruktur?

<p>Sie destabilisiert die äußere Membran. (D)</p> Signup and view all the answers

Was bedeutet der Begriff 'steril' in einem wissenschaftlichen Kontext?

<p>Mangel an Mikroorganismen (B)</p> Signup and view all the answers

Welche Säuren entstehen durch die Fermentation von Pyruvat nach 2-5 Tagen?

<p>Lactat, Acetat und Formiat (A)</p> Signup and view all the answers

Welche Eigenschaften sind charakteristisch für Gram-positive Bakterien?

<p>Dicke Peptidoglycan-Schicht (D)</p> Signup and view all the answers

Was ist ein wesentlicher technischer Parameter bei Sterilisationstechniken?

<p>Temperatur (C)</p> Signup and view all the answers

Welche pH-Werte sind mit den positiven und negativen Ergebnissen der Methylrot-Reaktion verbunden?

<p>pH 6,0 und pH 4,2 (D)</p> Signup and view all the answers

Welches Färbetechniken wird in der Mikroskopie verwendet, um den Kontrast zu erhöhen?

<p>Giemsa-Färbung (D)</p> Signup and view all the answers

Was ist das Hauptprodukt der Butandiolgärung?

<p>Acetoin (A)</p> Signup and view all the answers

Welches der folgenden Antibiotikumgruppen wirkt auf zellulären Zielstrukturen?

<p>Alle Antibiotika (A)</p> Signup and view all the answers

Welches Bakterium zeigt ein positives Ergebnis in der Voges-Proskauer-Reaktion?

<p>Enterobacter aerogenes (C)</p> Signup and view all the answers

Wie unterscheiden sich Gram-negative Bakterien von Gram-positiven?

<p>Sie besitzen eine äußere Membran. (A), Sie färben sich rot in der Gramfärbung. (C)</p> Signup and view all the answers

Welches der folgenden Produkte ist nicht ein neutrales Endprodukt der Fermentation?

<p>Lactat (B)</p> Signup and view all the answers

Welches Enzym ist erforderlich für die Verwertung von Citrat in Bakterien?

<p>Citrat-Lyase (B)</p> Signup and view all the answers

Welche Technik wird verwendet, um Mikroorganismen zu isolieren?

<p>Serieller Verdünnungstest (C)</p> Signup and view all the answers

Was sind Phasenkontrastmikroskope besonders geeignet für?

<p>Transparente Proben (A)</p> Signup and view all the answers

Was passiert mit Acetoin in der Voges-Proskauer-Reaktion?

<p>Es oxidiert zu Diacetyl. (A)</p> Signup and view all the answers

Was zeigt ein negatives Ergebnis in der Methylrot-Reaktion an?

<p>Neutralität des pH (D)</p> Signup and view all the answers

Wie hoch ist die Enzymkonzentration in der reinen Eiklarlösung laut dem Text?

<p>9,4 mg/ml (B)</p> Signup and view all the answers

Welche Einheit wird im Text für die Enzymaktivität verwendet?

<p>U/ml (B)</p> Signup and view all the answers

Was ist die Aktivität von 1 mg Lysozym?

<p>40.000 U (C)</p> Signup and view all the answers

Was bedeutet der Wert "∆OD600/min" im Kontext des Textes?

<p>Die Änderung der optischen Dichte bei 600 nm pro Minute (A)</p> Signup and view all the answers

Welchen Einfluss hat der Verdünnungsfaktor auf die gemessene Enzymaktivität?

<p>Er erhöht die Aktivität (D)</p> Signup and view all the answers

Welche der folgenden Aussagen über die Beziehung zwischen Konzentration und Aktivität des Lysozyms ist korrekt?

<p>Konzentration und Aktivität sind direkt proportional zueinander (C)</p> Signup and view all the answers

Wie wird die Lysozymkonzentration in einer unbekannten Probe bestimmt, basierend auf dem Text?

<p>Durch den Vergleich mit einer Eichkurve (D)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Was ist Lysozym?

Lysozym ist ein Enzym, das die Zellwand von Bakterien angreift und sie auflöst. Es spaltet die β-1,4-glykosidische Bindung zwischen N-Acetylmuraminsäure (NAM) und N-Acetylglucosamin (NAG) im Murein-Netzwerk.

Was ist Murein?

Das Murein, auch Peptidoglycan genannt, ist ein komplexes Netzwerk aus Zucker und Aminosäuren, welches die Form und Struktur bakterieller Zellwände verleiht. Es ist aufgebaut aus Ketten von abwechselnden N-Acetylglucosamin (G) und N-Acetylmuraminsäure (M) -Molekülen, die durch Peptidbrücken miteinander verbunden sind.

Was sind Protoplasten?

Protoplasten entstehen, wenn die Zellwand von Bakterien durch Enzyme wie Lysozym abgebaut wird. Der verbliebene Zellinhalt, einschließlich der Zellmembran und dem Cytoplasma, bildet den Protoplasten.

Wie wird bakterielles Wachstum gemessen?

Bakteriellen Wachstum wird meist über OD-Werte (optische Dichte) gemessen. Mit steigender Bakteriendichte erhöht sich die Trübung der Nährlösung und damit auch der OD-Wert.

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Was ist eine Wachstumskurve?

Die Wachstumskurve zeigt die Zunahme von Bakterien über die Zeit. Sie umfasst verschiedene Phasen: Lag-, exponentielle-, stationäre- und Absterbephase. Diese Phasen spiegeln die verschiedenen Wachstumsraten und Bedingungen wider, die während des Bakterienwachstums auftreten.

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Lysozym: Wirkung

Lysozym ist ein Enzym, das die Mureinschicht von Bakterien angreift. Es zersetzt die Zellwände, wodurch die Bakterienzellen zerfallen.

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Sphäroplasten

Sphäroplasten sind Bakterienzellen mit Zellwandresten. Diese Reste machen die Zellen unempfindlicher gegenüber osmotischem Druck.

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Kultivierung von Protoplasten

Protoplasten können in vitro kultiviert werden, das heißt, sie können außerhalb des Organismus wachsen.

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Protoplasten: Vektoren für Transformation?

Protoplasten können als Vektoren für die Transformation von Pflanzenzellen verwendet werden.

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Lysozym: Wirkung auf Membran

Ca2+ Ionen stabilisieren die äußere Zellmembran von Bakterien. Lysozym macht die Membran durch den Abbau von Calcium unempfindlicher.

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Protoplasten: Osmotischer Druck

Protoplasten sind empfindlich gegenüber osmotischem Druck und müssen in isotonischen oder schwach hypertonischen Medien kultiviert werden.

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Protoplasten: Form?

Der Abbau der Zellwand führt zur Bildung von Protoplasten, die keine definierte Form mehr haben.

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Wachstumsrate (µ)

Die Geschwindigkeit, mit der sich die Anzahl der Bakterien in einer Kultur verdoppelt.

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Verdopplungszeit (td)

Die Zeit, die ein Bakterium benötigt, um sich zu verdoppeln.

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Optimale Wachstumstemperatur

Die Temperatur, bei der ein Bakterium am schnellsten wächst.

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Thermophile Bakterien

Bakterien, die bei Temperaturen über 40°C wachsen können.

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Chaperone

Proteine, die anderen Proteinen helfen, ihre korrekte Form anzunehmen und so ihre Funktion zu erhalten.

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Steigung der Messkurve

Die Steigung der Messkurve entspricht der Aktivität des Enzyms und ist ein Maß für die Geschwindigkeit der Reaktion.

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Units (U)

Die Einheit für die Aktivität eines Enzyms. 1 U entspricht der Menge an Enzym, die in einer Minute 1 µmol Substrat umsetzt.

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Eichkurve

Eine Referenzkurve, die die Beziehung zwischen der Konzentration eines Stoffes und einer Messgröße (z.B. der Absorption) darstellt.

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Lysozymaktivität

Die Geschwindigkeit, mit der ein Enzym ein Substrat umwandelt. Sie ist ein Maß für die Aktivität des Enzyms.

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Lysozymkonzentration

Die Konzentration eines Stoffes in einer Lösung.

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Referenzwert

Eine Methode, um die Konzentration eines Stoffes in einer unbekannten Probe zu bestimmen, indem man sie mit einer Referenzlösung bekannter Konzentration vergleicht.

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∆OD600 /min

Die Veränderung der Absorption bei einer bestimmten Wellenlänge pro Minute. Sie ist ein Maß für die Geschwindigkeit der Reaktion.

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Verdünnungsfaktor

Die Verdünnung, die während einer Versuchsdurchführung auftritt, kann die Konzentration eines Stoffes verändern. Diese Verdünnung muss bei der Berechnung der Konzentration berücksichtigt werden.

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Methylrot-Reaktion (positiv)

In der Methylrot-Reaktion wird der Stoffwechselweg von Glucose zu verschiedenen Säuren, die den pH-Wert senken, als positiv angesehen.

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Methylrot-Reaktion (negativ)

In der Methylrot-Reaktion wird der Stoffwechselweg von Glucose zu neutralen Endprodukten, die den pH-Wert kaum beeinflussen, als negativ angesehen.

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Voges-Proskauer-Reaktion (positiv)

Die Voges-Proskauer-Reaktion dient zum Nachweis von Acetoin, einem Zwischenprodukt der Butandiolgärung. Eine positive Reaktion zeigt eine rote Farbreaktion an, die durch die Oxidation von Acetoin zu Diacetyl in alkalischer Lösung entsteht.

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Voges-Proskauer-Reaktion (negativ)

Die Voges-Proskauer-Reaktion zeigt bei Abwesenheit von Acetoin keine Farbreaktion.

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Citrat-Verwertung (positiv)

Die Fähigkeit von Bakterien, Citrat als Kohlenstoffquelle zu nutzen, hängt vom Vorhandensein des Enzyms Citrat-Lyase ab. Eine positive Reaktion zeigt an, dass das Bakterium das Enzym besitzt und Citrat verwerten kann.

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Citrat-Verwertung (negativ)

Bakterien, die das Enzym Citrat-Lyase nicht besitzen, können Citrat nicht als Kohlenstoffquelle verwerten.

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IMViC-Tests

Die IMViC-Tests sind eine Reihe von vier Tests, die zur Differenzierung und Identifizierung verschiedener Bakteriengattungen genutzt werden. Die Abkürzung IMViC steht für Indol-, Methylrot-, Voges-Proskauer- und Citrat-Test

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IMViC-Tests (Zweck)

Die IMViC-Tests werden verwendet, um unterschiedliche Bakteriengattungen zu differenzieren und zu identifizieren.

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Was bedeutet Sterilisation?

Die Sterilisation bezeichnet ein Verfahren, das alle Mikroorganismen, einschließlich ihrer Sporen, abtötet. Es ist essenziell, um Kontaminationen in der Mikrobiologie zu vermeiden.

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Was sind Antibiotika?

Antibiotika sind Medikamente, die gegen bakterielle Infektionen wirken, indem sie das Wachstum der Bakterien hemmen oder diese abtöten.

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Welche Sterilisationstechniken gibt es?

Sterilisationstechniken sind Verfahren, die die vollständige Abtötung aller Mikroorganismen gewährleisten. Zu den gängigen Methoden zählen Autoklavieren, Heißluftsterilisation und Strahlensterilisation.

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Was sind Kulturmedien?

Medien sind Nährlösungen, die den Wachstumsbedingungen für Mikroorganismen angepasst sind. Sie enthalten essentielle Nährstoffe, wie Kohlenstoff-, Stickstoff- und Mineralsalze.

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Was sind Gram-positive Bakterien?

Gram-positive Bakterien besitzen eine dicke Peptidoglykanschicht in ihrer Zellwand.

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Was sind Gram-negative Bakterien?

Gram-negative Bakterien zeichnen sich durch eine dünne Peptidoglykanschicht und eine zusätzliche äußere Membran aus.

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Was ist Mikroskopie?

Mikroskopie ist die Untersuchung von Objekten unter Verwendung eines Mikroskops, um vergrößerte Bilder zu generieren. Lichtmikroskopie verwendet sichtbares Licht, um Strukturen zu betrachten.

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Wie wirken Antibiotika?

Antibiotika wirken durch die Beeinträchtigung eines essentiellen Prozesses in der Bakterie, z.B. durch die Hemmung der Zellwandsynthese, der Proteinsynthese oder der DNA-Replikation.

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Study Notes

Allgemeine Mikrobiologie WS24/25 (Bios) - Seminar #6

  • Das Seminar behandelt das Thema Lysozym.
  • Es wird ein Testat (8 Minuten) abgehalten.
  • Alle Teilnehmer müssen während des Testats vom Sitznachbar/in entfernt sein.
  • Die Skripte müssen umgedreht werden.

Themen

  • Wiederholung der bakteriellen Zellwand-Struktur
  • Eigenschaften und Wirkung von Lysozym
  • Exkurs: Bildung von Protoplasten
  • Bakterielles und virales Lysozym
  • Versuch 8: Wachstumskurven (bakterielles Wachstum)
  • Auswertung von OD-Werten und Erstellung von Wachstumskurven

Aufbau der bakteriellen Zellwand

  • Besteht aus Murein (Peptidoglycan)
  • Heteropolymer, gebildet aus N-Acetylglucosamin (G) und N-Acetylmuraminsäure (M)
  • Alternierend ẞ-1,4 glykosidisch verknüpft
  • Ketten sind durch Peptidbrücken querverbunden (Netzwerk)

Was ist Lysozym?

  • Sammelbegriff für eine Familie bakterizider Enzyme
  • Benannt von Alexander Fleming (1922)
  • Enzym aus Eiklar
  • Muramidase

Eigenschaften von Lysozym

  • Molekulargewicht ca. 14,4 kDa
  • 129 Aminosäuren, 4 Disulfidbrücken (R-S-S-R)
  • Hydrolysiert die ẞ-1,4-glykosidische Bindung zwischen N-Acetylmuraminsäure und N-Acetylglucosamin
  • Charakteristische tiefe „Furche“ zum Binden des Mureins
  • Minimale Länge des Substrates: 6 Zuckerreste
  • Wichtige Aminosäuren im aktiven Zentrum: Glutamat35 und Aspartat52

Wirkungsweise von Lysozym

  • Hydrolyse der glykosidischen Bindungen zwischen C1 von (M) und C4 von (G)
  • Abbau zu Disacchariden (G-M)
  • N-Acetylglucosamin (G) und N-Acetylmuraminsäure (M)
  • Bei hoher Lysozym-Konzentration kommt es zu einer reduzierten Hydrolyse (Warum?)

Wirkung auf Gram-positive und Gram-negative Zellwände

  • Einfluss von EDTA: komplexiert zweiwertige Metallionen, bindet Ca2+ Ionen der äußeren Membran → Destabilisierung
  • Lysozym kann äußere Membran passieren → Abbau der Mureinschicht

Bildung von Protoplasten

  • Zellwandabbau durch Lysozym
  • "Auslaufen" der Zelle
  • Herstellung von Protoplasten im Labor (Anwendung)

Was sind Protoplasten?

  • Bezeichnung für den stoffwechselaktiven Zellkörper.
  • Nach Auflösung der Zellwand
  • Sphären in vitro kultivierbar (bei Gram-Bakterien schwer möglich)
  • Beispiel: pflanzliche Protoplasten → Fremd-DNA-Eingliederung (Transformation)
  • Bei Bakterien mit Zellwandresten: Sphäroplasten
  • Osmotisch empfindlich

Natürliche Vorkommen von Lysozym

  • Hühnereiweiß
  • Milch
  • Pflanzensäfte
  • Diverse Pilze
  • Nasensekret
  • Speichel
  • Schweiß
  • Blutplasma
  • Tränenflüssigkeit
  • Eukaryontische Lysozyme (Teil der unspezifischen Immunabwehr)
  • Mehrere Typen (c-, g-, i-Typ)
  • Einige (z.B. pflanzliche) können Chitin abbauen

Bakterielle Lysozyme

  • Peptidoglykan-Hydrolasen, Lytische Transglycosylasen, Autolysine u.a.
  • Ubiquitär in Eubakterien (Ausnahme: Mykoplasmen)
  • Verschiedene Familien mit unterschiedlichen Funktionen
  • Exoaktivität
  • Lokaler Abbau des Mureins, beteiligt am Zellwachstum und an der Zellteilung
  • Beispiele: Streptomyces-Lysozym, lytische Transglykosylase "Slt35" von E. coli, N-Acetylglucosaminidasen von Enterococcus hirae und Listeria monocytogenes

Virales Lysozym

  • V-Typ: verteilt bei Phagen, infizieren Gram-positive und Gram-negative Bakterien
  • G-Typ: Sequenz ähnlich tierischer g-Typ Lysozyme (z.B. Vögeln)
  • λ-Typ: benannt nach dem λ-Phagen, lytische Transglykosase
  • Funktion der Lysozyme bei Bakteriophagen:
  • Lokaler Abbau des Peptidoglycans ermöglicht Infektion
  • Globaler Abbau der Zellwand zur Freisetzung von Phagenpartikeln (lytischer Zyklus)

Versuch 8: Wachstumskurven

  • OD 600 = 0,04 eingestellt
  • OD600 (to) bestimmt (Referenzwert LB-Medium)
  • Schüttler synchron eingeschaltet und Zeitmessung gestartet
  • Alle 20 min eine weitere Messung vorgenommen
  • Messwerte in die Tabelle eintragen und mit anderen Gruppen vergleichen
  • Graphische Bestimmung der Verdopplungszeiten (halblogarithmisches Papier)
  • Berechnung der spezifischen Wachstumsraten (µ = ln(2) / td)

Versuch 8: Ablauf

  • Jede Bankreihe hat einen eigenen Erlenmeyerkolben.
  • Berechnung des Volumens, Animpfen und to-Messung gemeinsam
  • Start des Experimentes gleichzeitig
  • Gruppenweise t = 20 min Probenahme

Weitere Themen des Seminars (Versuch 8)

  • Indirekte Bestimmung der Zellzahl-Zunahme (optische Dichte)
  • Diskussion und Bedeutung der „Batch"-Kultur im Praktikum

Weitere Themen (nach Versuch 8)

  • Natürliche Vorkommen von Lysozym
  • Abschließende Zusammenfassung

Zusammenfassung

  • Das Seminar behandelt den enzymatischen Prozess des Lysozyms.
  • Es gibt verschiedene Abschnitte zum Aufbau von Zellwänden, Enzymen und deren Funktion.
  • Wachstumskurven von Bakterien und ihre Berechnung.
  • Vergleich von Gram-positiven und Gram-negativen Bakterien und deren Reaktionen auf Lysozym sowie Vergleich der Lysegeschwindigkeit.
  • Details zu verschiedenen Tests und Verfahren (z.B. IMVIC, KOH, Oxidase, Katalase, Citrat usw.).

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Description

Erforschen Sie die Funktionen von Lysozym in Bezug auf die bakterielle Zellwand sowie die Wachstumsbedingungen von E. coli. Dieses Quiz behandelt wichtige Temperaturgrenzen und Wachstumsraten von E. coli und hilft Ihnen, die mikrobiologischen Grundlagen besser zu verstehen.

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