Métodos de Identificación de Lípidos
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Questions and Answers

¿Cuál es el efecto del uso de alcohol de 95° con el colorante sudan black?

  • Tiñe los lípidos de forma efectiva.
  • Genera una tinción específica.
  • El lípido se pierde y no se tiñe. (correct)
  • Aumenta la afinidad del colorante por los lípidos.

¿Qué caracteriza al colorante oil red en cuanto a la preparación?

  • Se utiliza exclusivamente con etanol.
  • La marcación es más sucia en comparación con otros alcoholes.
  • Puede ser preparado con alcohol isopropílico. (correct)
  • Se prepara en alcohol de 70° siempre.

¿Cuál es la diferencia entre las grasas neutras y ácidas en comparación con el amiloide?

  • Las grasas son anisotrópicas, mientras que el amiloide es isotrópico.
  • El amiloide no muestra birrefringencia.
  • Las grasas son isotrópicas, mientras que el amiloide es anisotrópico. (correct)
  • Tanto las grasas como el amiloide son birrefringentes.

¿Qué se debe confirmar con una lámina de control cuando se observa birrefringencia?

<p>La naturaleza química de los lípidos. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la principal limitación de la fluorescencia primaria en la identificación de lípidos?

<p>Es poco confiable clínicamente. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de estructura tienen los lípidos que pueden ser birrefringentes?

<p>Estructuras cristalinas. (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué es la birrefringencia en relación con el colesterol y sus ésteres?

<p>Muestran patrones en cruz de malta y agujas romboides. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de lípidos exhiben fluorescencia distintiva?

<p>Lípidos oxidados y lipofuscinas. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la función de la tirosinasa en la detección de melanina?

<p>Producción de melanina a partir de la tirosina (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué color presenta la plata al entrar en contacto con la melanina?

<p>Negro (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes métodos se utiliza para estudiar la melanina?

<p>Reducción de plata de Fontana-Masson (C)</p> Signup and view all the answers

¿La melanina es soluble en solventes orgánicos?

<p>No, es insoluble (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué compuesto se utiliza junto con ferrocianuro para la reducción en el método de Schmorl?

<p>Plata (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué ocurre durante el blanqueamiento de la melanina?

<p>Puede ser tratado con agentes oxidantes (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes es un panel específico para inmunohistoquímica de melanina?

<p>S100 (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cómo se clasifica la tinción asociada a la reducción de plata?

<p>Histoquímico (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué efecto tiene la oxidación en la membrana basal durante la impregnación argéntica?

<p>Permite identificar hidratos de carbono (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de prueba es la reducción de DOPA en el estudio de la melanina?

<p>Enzimática (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes aspectos NO puede identificarse mediante la HE en estudios musculares?

<p>La capacidad oxidativa de la fibra (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de enzima se utiliza para estudiar la actividad en las fibras musculares?

<p>ATPasa (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué determinará el estudio histopatológico en biopsias musculares?

<p>El tamaño y número de fibras musculares (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuáles son las fibras musculares que se pueden diferenciar con la aplicación de ATPasa?

<p>Fibras tipo I y II (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué se requiere cuando el trastorno en el músculo es severo?

<p>Un estudio más complejo como la histopatología (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué característica de la ATPasa es importante para el estudio histoquímico?

<p>Su sensibilidad a soluciones ácidas y alcalinas (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué se puede afirmar sobre la distribución de los tipos de fibras musculares?

<p>Varía según el daño muscular (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cómo se forma la lipofucsina en las células?

<p>Por procesos oxidativos de lípidos y lipoproteínas. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes métodos se utiliza para demostrar lipopigmentos?

<p>Sudan Black B, que requiere tejido fresco. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué características tiene el pigmento seroide?

<p>Adopta un color parduzco y es PAS negativo. (D)</p> Signup and view all the answers

¿En qué organos se puede encontrar la lipofucsina?

<p>Corteza adrenal y testículos, especialmente en células de Leydig. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la apariencia de la lipofucsina?

<p>Amarillo-café a rojizo-café. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de pigmento se considera un producto de inhalación de carbono exógeno?

<p>Pigmento antracótico. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué indica que un pigmento es PAS negativo?

<p>Que no reacciona con métodos que buscan carbohidratos. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la característica distintiva de la lipofucsina comparada con el pigmento seroide?

<p>La lipofucsina tiñe con el método Zhiel-Neelsen y el pigmento seroide no. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de pigmento se produce a partir de tatuajes?

<p>Pigmento de tatuajes que es digerido por macrófagos. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes no es un método para la identificación de lipopigmentos?

<p>Método de PCR para ADN. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el producto primario de la reacción que se describe?

<p>Producto coloreado e insoluble (D)</p> Signup and view all the answers

En la reacción con sustrato incoloro, ¿qué se genera tras la reacción enzimática?

<p>Un producto coloreado e insoluble (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué característica es típica de las oxidoreductasas?

<p>Los sustratos son solubles e incoloros en estado oxidado (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la temperatura óptima para la acción enzimática en humanos?

<p>37°C (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el principal problema al trabajar con enzimas en patologías musculares?

<p>Son termo lábiles y difíciles de preservar (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué permite la función de la ATPasa en el diagnóstico de fibras musculares?

<p>Produce hidrólisis del ATP y libera un ion fosfato (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué método es considerado el más importante para la demostración histoquímica de enzimas?

<p>Copulación simultánea (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué se busca con la captación del ion fosfato en la reacción de ATPasa?

<p>Generar un producto insoluble y coloreado (B)</p> Signup and view all the answers

En la estrategia de poscopulación, ¿cuál es la ventaja principal?

<p>Puede usarse con cualquier pH (D)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de sustrato se utiliza en el método que se describe?

<p>Sustrato soluble e incoloro (B)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Tinción con Sudan Black

Técnica que utiliza el colorante Sudan Black para identificar lípidos en tejidos. La solubilidad del colorante en el alcohol es crítica para una tinción efectiva.

Oil Red O

Otro colorante lisocromos que se utiliza para la tinción de lípidos, a diferencia del Sudan Black, usualmente se utiliza alcohol isopropílico.

Anisotropía (Amiloide)

Falta de uniformidad en la estructura, en este caso en la disposición de las angulaciones en la estructura beta plegada del amiloide, impidiendo un paso uniforme de la luz.

Isotropía (Grasas neutras y ácidas)

Uniformidad estructural que permite un paso uniforme y rectilíneo de la luz a través de la estructura.

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Birrefringencia (Colesterol y ésteres)

Doble refracción de la luz al atravesar ciertas estructuras, observando patrones específicos como agujas romboides.

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Fluorescencia Primaria (lípidos)

Algunos lípidos y derivados oxidados exhiben fluorescencia visible.

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Extracción de Lípidos

Proceso para confirmar la presencia y naturaleza lipídica, se utiliza típicamente cloroformo y metanol en una proporción de 2:1

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Limitaciones de Métodos Físicos

Los métodos ópticos de identificación de lípidos tienen un valor limitado por la posibilidad de que estructuras de diferente naturaleza puedan generar resultados similares

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Histoquímica de la ATPasa

Técnica que identifica la capacidad oxidativa de las fibras musculares, basada en la actividad de la enzima ATPasa.

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Fibras musculares tipo I

Fibras musculares de contracción lenta y resistencia a la fatiga, con alta capacidad oxidativa.

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Fibras musculares tipo II

Fibras musculares de contracción rápida y poca resistencia a la fatiga, con baja capacidad oxidativa.

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¿Qué se puede determinar con la histoquímica de la ATPasa?

Determina el tamaño, la complejidad de las fibras, el número de fibras tipo I y II, la distribución de los tipos de fibras y la capacidad oxidativa de cada fibra.

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Sensibilidad de la ATPasa al pH

La ATPasa es sensible a diferentes pH, siendo útil para identificar las fibras musculares de tipo I y II.

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Importancia de la biopsia muscular

El análisis de las fibras musculares a través de la biopsia es crucial para el diagnóstico de enfermedades musculares.

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Microscopia óptica y la ATPasa

La microscopia óptica permite observar la forma y el tamaño de las fibras, pero no la capacidad oxidativa. Para determinar la capacidad oxidativa, se necesita la histoquímica de la ATPasa.

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Melanina

Pigmento que da color a la piel, el pelo y los ojos. Se produce en los melanosomas a partir de la tirosina.

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¿Cómo se puede detectar la melanina?

Se puede detectar la melanina identificando la tirosinasa, mediante la reducción de plata o el ferrocianuro, o a través de métodos enzimáticos, fluorescencia o inmunohistoquímica.

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Tirosinasa

Enzima que cataliza la producción de melanina a partir de la tirosina.

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Reducción de plata

Método para detectar la melanina que utiliza la plata, la cual se reduce a color negro en presencia de melanina.

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Impregnación argéntica

Técnica de tinción que utiliza sales de plata para visualizar estructuras en el tejido.

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Método enzimático de reacción DOPA

Técnica que utiliza la reacción de la DOPA (dihidroxifenilalanina) con la tirosinasa para detectar la melanina.

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Fluorescencia

Método para detectar la melanina que utiliza la propiedad de la melanina de emitir luz cuando se expone a una longitud de onda específica.

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Inmunohistoquímica

Técnica que utiliza anticuerpos específicos para detectar antígenos en el tejido, en este caso para la melanina.

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Control Post-Blanqueamiento

Técnica para confirmar la identificación de la melanina. Se blanquea una lámina de tejido y se compara con una lámina sin blanquear.

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Lipofucsina

Pigmento marrón amarillento a rojizo que se forma por la oxidación de lípidos y lipoproteínas en células envejecidas. Su color, tamaño y textura varían según el grado de oxidación.

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¿Dónde se encuentra la lipofucsina?

Se encuentra en células envejecidas, como las del hígado, corazón, corteza adrenal, testículos, cerebro, ovario, entre otras. Su presencia puede ser fisiológica o patológica.

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Pigmento seroide

Lipofucsina en su fase inicial de formación. Tiene un color parduzco y no se tiñe con las pruebas de PAS, Sudan Black o Azul de Nilo.

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Tinción de Zhiel-Neelsen

Método para identificar lipofucsina, aunque no es específico. También puede teñir otros compuestos.

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Pigmento antracótico

Acumulación de carbono exógeno en los pulmones, producto de la inhalación de contaminantes como smog, polvo y humo de tabaco.

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Pigmento de tatuajes

Tintes con óxidos de hierro u orgánicos que son fagocitados por macrófagos y almacenados de por vida.

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Métodos de tinción para lipofucsina

PAS, Reducción de Schmrol’s, Zhiel-Neelsen, Sudan Black B, Fontana Masson, Kluver-Barrera. Aunque ninguno es específico, cada uno tiene sus propias características.

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Tinción con Kluver-Barrera

Se utiliza sulfato azul de nilo para teñir la lipofucsina.

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¿Por qué el pigmento seroide es PAS(-), Sudan Black (-) y Azul de Nilo (-)?

Porque aún no ha desarrollado las características completas de la lipofucsina. Es una lipofucsina en formación.

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Reacción con sustrato incoloro

En esta reacción, un sustrato soluble e incoloro se convierte en un producto insoluble y coloreado tras la acción enzimática.

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Características de la reacción con sustrato incoloro

Es una reacción confiable para la localización de enzimas, típica de las oxidoreductasas. El sustrato suele ser soluble e incoloro en su forma oxidada e insoluble y coloreado en su forma reducida.

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Preservación de la enzima

Para el estudio de la enzima, es crucial preservarla mediante técnicas como la crio-preservación.

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Factores para el estudio enzimático

El estudio enzimático requiere comprender factores como el pH óptimo, la temperatura óptima (37°C para humanos), la presencia de cofactores o activadores, la necesidad de un buffer adecuado y las concentraciones correctas de sustrato y enzima.

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Método de Copulación Simultánea

Un método en el que la acción enzimática, la formación del producto y la detección del producto ocurren en una sola incubación.

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Método de Poscopulación

Este método permite la incubación separada de la reacción enzimática (paso 1) y la detección del producto (paso 2), lo que facilita la investigación a diferentes pH.

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Problemas con las enzimas musculares

Las enzimas musculares son termo-lábiles y difíciles de preservar, lo que presenta desafíos en su estudio.

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ATPasa

Una enzima capaz de hidrolizar ATP en ADP y liberar un ion fosfato libre.

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Uso de la ATPasa en la Histoquímica

La ATPasa se utiliza a diferentes pH para diferenciar entre los tipos de fibras musculares (I, IIa, IIb, IIc) según su contenido de miosina.

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Objetivo de la Histoquímica de la ATPasa

Capturar el ion fosfato liberado por la acción de la ATPasa y generar un producto insoluble y coloreado.

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Study Notes

Métodos de Identificación de Lípidos

  • Existen colorantes ácidos, básicos y neutros, así como otros indiferentes.
  • Los lípidos se estudian con colorantes indiferentes, los lisocromos.
  • Los lisocromos son colorantes azoicos, donde el cromóforo es azo, y se caracterizan por ser más solubles en lípidos que en el solvente que los contiene.
  • Existen métodos no convencionales, como la polarización, para identificar algunos lípidos.
  • La fijación para parafina presenta problemas porque los lípidos son destruidos en los tratamientos.
  • Algunas patologías (enfermedades cerebrales) están relacionadas con lípidos complejos (glicolípidos).
  • Los lípidos de carácter neutros se identifican en tejidos frescos a -80°C.
  • Los lípidos se conservan en nitrógeno líquido pero no se les aplican fijadores o reactivos químicos.
  • Después de la conservación, se realiza el corte y luego la tinción con lisocromos.
  • Los lípidos consisten en una gran variedad de moléculas.
  • Los componentes básicos son carbono, hidrógeno y a veces oxígeno.
  • Pueden contener también fósforo, nitrógeno y azufre.
  • Los lípidos son insolubles en agua y solubles en disolventes orgánicos (por ejemplo, éter, cloroformo y benceno).

Tipos de Lípidos

  • Existen tres tipos principales de lípidos.
  • Lípidos simples (forma monomérica)
  • Lípidos compuestos (cadena de ácido graso y más grupos como fósforo o nitrógeno) Los glicolípidos, fosfolípidos, cerebrósidos, esfingolípidos, etc, todos necesitan fijación leve
  • Lípidos derivados (ácidos grasos, colesterol, ácidos biliares, etc) Algunos derivados no tienen relevancia estructural.

Propiedades Físicoquímicas de los Lípidos

  • El punto de fusión de los lípidos es inversamente proporcional a la longitud de la cadena de ácido grasos.
  • Los lípidos pueden ser hidrofílicos (solubles en agua) o hidrofóbicos (insolubles en agua).
  • Los fosfolípidos, glicolípidos ácidos y neutros son hidrofílicos.
  • Los lípidos no polares (colesterol y ácidos grasos libres) son hidrofóbicos.

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Description

Este cuestionario explora los diferentes métodos utilizados para la identificación y estudio de los lípidos, incluyendo colorantes y técnicas no convencionales. Se discuten las particularidades de los lisocromos y su eficacia en la visualización de lípidos en tejidos. Además, se abordan las implicaciones de los lípidos en patologías cerebrales y las técnicas de conservación esenciales para su análisis.

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