Introduzione al Sistema delle Endomembrane
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Questions and Answers

Cosa sono le endomembrane?

Le endomembrane sono una rete interconnessa di membrane che si trovano all'interno delle cellule eucariotiche. Sono coinvolte in una varietà di processi cellulari, tra cui la sintesi delle proteine, il trasporto delle proteine, la degradazione delle proteine e la produzione di lipidi.

Quali sono i due tipi di vie biosintetiche?

  • Via biosintetica secretoria (correct)
  • Via biosintetica endocitica (correct)
  • Via metabolica
  • Qual è la differenza tra la via secretoria costitutiva e quella regolata?

  • La via secretoria costitutiva è più veloce della via secretoria regolata.
  • Non c'è differenza.
  • La via secretoria costitutiva rilascia continuamente sostanze all'esterno, mentre la via secretoria regolata rilascia sostanze solo in risposta a specifici stimoli. (correct)
  • La via secretoria costitutiva rilascia solo proteine, mentre la via secretoria regolata rilascia anche lipidi.
  • Perchè sono stati utilizzati gli amminoacidi marcati radioattivamente negli esperimenti di pulse-chase?

    <p>Gli amminoacidi marcati radioattivamente sono stati utilizzati negli esperimenti di pulse-chase per tracciare il percorso delle proteine sintetizzate dalla cellula. Gli scienziati hanno introdotto gli amminoacidi marcati in un breve periodo di tempo (pulse) e poi hanno seguito il movimento di questi amminoacidi all'interno della cellula (chase), seguendo il loro percorso e mostrando in quali comparti cellulari venivano incorporati.</p> Signup and view all the answers

    Cosa è la GFP e quali sono i suoi vantaggi nell'analisi del traffico di proteine?

    <p>La GFP (Green Fluorescent Protein) è una proteina che emette luce fluorescente quando viene eccitata da una luce specifica. La GFP è stata scoperta nella medusa 'Aequorea victoria' e ha trovato un'ampia applicazione in biologia cellulare grazie al suo vantaggio di consentire il monitoraggio del movimento delle proteine all'interno delle cellule viventi.</p> Signup and view all the answers

    Il metodo MERG permette di visualizzare diversi organelli e proteine contemporaneamente attraverso la sovrapposizione di diverse fluorescenze.

    <p>True</p> Signup and view all the answers

    Cosa sono i siRNA e qual è il loro ruolo nel silenziamento genico?

    <p>I siRNA (short interfering RNA) sono piccoli RNA a doppio filamento che vengono utilizzati per 'silenziare' l'espressione dei geni specifici nelle cellule. I siRNA si legano al RNA messaggero (mRNA) target e portano alla sua degradazione, impedendo la sintesi della proteina codificata da quel gene.</p> Signup and view all the answers

    Abbina le seguenti mutazioni di geni con le loro funzioni:

    <p>sec12 = impedisce la formazione delle vescicole dal RE, portando all'accumulo di proteine nel RE. sec17 = impedisce la fusione delle vescicole con la membrana del Golgi, che porta ad un aumento delle vescicole nel citosol.</p> Signup and view all the answers

    Cosa si intende per 'sequenza segnale' nelle proteine?

    <p>Le 'sequenze segnale' sono brevi sequenze di amminoacidi presenti sulle proteine, che le indirizzano verso specifici organelli all'interno della cellula. Queste sequenze segnale sono riconosciute da proteine specifiche del recettore, che le legano e le guidano attraverso le membrane degli organelli di destinazione.</p> Signup and view all the answers

    L'esperimento di Blobel e Dobberstein sul mieloma ha dimostrato che le proteine vengono sintetizzate nello stesso momento in cui vengono traslocate nel RE.

    <p>True</p> Signup and view all the answers

    Descrivi il ruolo del traslocone nel trasporto delle proteine nel RE.

    <p>Il traslocone è un complesso proteico che facilita il trasporto delle proteine attraverso la membrana del RE. Il traslocone forma un canale che consente l'attraversamento della membrana da parte delle proteine nascenti, che vengono guidate da sequenze segnale specifiche.</p> Signup and view all the answers

    Cosa si intende per 'inserimento di proteine nelle membrane del RE'?

    <p>L'inserimento di proteine nelle membrane del RE è un processo che coinvolge l'integrazione di proteine transmembrana all'interno della membrana del RE. Questo processo è regolato da sequenze segnale specifiche che indirizzano la proteina verso un inserimento specifico nella membrana, garantendo un orientamento corretto e una funzione specifica.</p> Signup and view all the answers

    Spiega la differenza tra la topologia di tipo I e la topologia di tipo II delle proteine di membrana.

    <p>La topologia di tipo I è caratterizzata da una proteina con il suo terminale N nel citosol e il suo terminale C nel lume del RE. La topologia di tipo II invece, ha il terminale N nel lume del RE mentre il terminale C è localizzato nel citosol.</p> Signup and view all the answers

    Quali sono le modificazioni post-traduzionali che subiscono le proteine nel RE?

    <p>Le modificazioni post-traduzionali che subiscono le proteine nel RE comprendono la glicosilazione, la formazione di ponti disolfuro, ripiegamento, controllo di qualità e ubiquitinazione. Queste modificazioni sono cruciali affinché la proteina assuma la sua struttura tridimensionale corretta e diventi funzionante.</p> Signup and view all the answers

    Spiega il ruolo dei chaperoni nel ripiegamento delle proteine.

    <p>I chaperoni sono proteine che aiutano le altre proteine a ripiegarsi correttamente assumendo la loro struttura tridimensionale. I chaperoni si legano alle proteine non ripiegate e impediscono che si aggreghi in modo scorretto, fornendo tempo e supporto per il corretto ripiegamento.</p> Signup and view all the answers

    Quali sono i modi in cui la cellula gestisce le proteine mal ripiegate?

    <p>Modificazione delle proteine mal ripiegate</p> Signup and view all the answers

    Cosa si intende per 'stress ER' e quali sono le sue cause?

    <p>Lo stress ER è uno stato di disfunzione del reticolo endoplasmatico (RE) causato da un accumulo di proteine mal ripiegate nel lume del RE. Questo accumulo può essere dovuto a diversi fattori, tra cui errori nella sintesi proteica, condizioni di stress ossidativo, squilibrio dei livelli di calcio nel RE o interferenza con i meccanismi di ripiegamento delle proteine.</p> Signup and view all the answers

    Quali sono le principali vie di segnalazione che vengono attivate in risposta allo stress ER?

    <p>Le principali vie di segnalazione attivate in risposta allo stress ER sono: PERK (la chinasi del reticolo endoplasmatico pancreatico), ATF6 (fattore di trascrizione attivante 6) e IRE1α (la proteina 1 chinasi-RNA). Queste vie di segnalazione si attivano per ripristinare l'omeostasi del reticolo endoplasmatico, ad esempio aumentando la sintesi di chaperoni, bloccando la sintesi proteica e attivando i meccanismi di degradazione delle proteine mal ripiegate.</p> Signup and view all the answers

    Spiega come ATF4 contribuisce alla risposta allo stress ER.

    <p>ATF4 è un fattore di trascrizione che viene sovraregolato in risposta allo stress ER. ATF4 attiva la trascrizione di geni che codificano per chaperoni, enzimi di degradazione delle proteine e proteine coinvolte nel processo di autophagy, ripristinando l'omeostasi del RE.</p> Signup and view all the answers

    Qual è la funzione principale di IRE1α nella risposta allo stress ER?

    <p>IRE1α è una chinasi-RNA che svolge un ruolo importante nell'attivazione della risposta allo stress ER. IRE1α ha attività sia chinasica che ribonucleasica. IRE1α viene attivata da un accumulo di proteine misfolded nel lume del RE e innesca due risposte chiave: attiva la via di segnalazione di XBP1 che stimola la sintesi di chaperoni e proteine coinvolte nel processo di degradazione delle proteine mal ripiegate, e promuove la degradazione di mRNA che codificano per proteine che non sono necessarie in condizioni di stress ER.</p> Signup and view all the answers

    Come agisce ATF6 nella risposta allo stress ER?

    <p>ATF6 è un fattore di trascrizione che viene attivato in risposta allo stress ER e ha un ruolo importante nell'espansione e nell'aumento della capacità del reticolo endoplasmatico. Quando si verifica lo stress ER, ATF6 si dissocia dalla membrana del RE e viene traslocato nel Golgi. Nel Golgi, viene scisso da proteasi e la sua porzione N-terminale entra nel nucleo, agendo come un fattore di trascrizione per attivare la trascrizione di geni che aiutano a gestire lo stress ER. In definitiva, ATF6 aiuta la cellula a ripristinare l'omeostasi del RE facilitando un aumento della sua capacità di ripiegare le proteine e di degradare quelle mal ripiegate.</p> Signup and view all the answers

    Quali sostanze vengono utilizzate per indurre stress ER in coltura cellulare?

    <p>Le sostanze chimiche utilizzate per indurre stress ER in coltura cellulare includono tunicamicina (inibitore della glicosilazione), tapsigargin (inibitore della pompa Ca2+), Ditiotreitolo e 2-mercaptoetanolo (agenti riducenti).</p> Signup and view all the answers

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    Study Notes

    Introduzione al Sistema delle Endomembrane

    • Le vie biosintetiche secretorie ed endocitiche connettono le endomembrane in una rete interconnessa.
    • La via secretoria trasporta le proteine dal reticolo endoplasmatico all'apparato di Golgi e poi all'esterno della cellula attraverso l'esocitosi.
    • La via endocitica internalizza il materiale esterno della cellula attraverso l'endocitosi.

    Via Secretoria

    • Costitutiva: un percorso continuo in cui la cellula rilascia continuamente sostanze per il mantenimento dell'ambiente extracellulare.
    • Regolatoria: un percorso in cui la secrezione avviene in risposta a uno stimolo esterno, producendo sostanze specifiche in quantità maggiori.

    Autoradiografia

    • Tecnica per localizzare materiali marcati radioattivamente in tessuti o cellule.
    • L'esposizione del tessuto a una emulsione fotografica rivela i siti di incorporazione di materiale marcato.
    • Utile per studiare il percorso delle proteine di secrezione nelle cellule pancreatiche.

    Studio del Pulse-Chase

    • Esperimento che segue il percorso di proteine secretorie nel tempo.
    • Una fase "pulse" comporta l'esposizione della cellula ad amminoacidi marcati.
    • Una fase "chase" comporta l'esposizione della cellula ad amminoacidi non marcati.
    • Questo permette di tracciare la progressione delle proteine attraverso le vie biosintetiche, osservando come si spostano dal reticolo endoplasmatico all'apparato di Golgi e alle vescicole di secrezione.

    Proteina Fluorescente Verde (GFP)

    • Proteina che emette fluorescenza quando eccitata.
    • Utile per studiare il traffico intracellulare delle proteine.
    • Possibile utilizzarla per comprendere come le proteine si muovono all'interno della cellula.

    Studio dei Mutanti

    • Esperimento sul lievito per studiare i geni coinvolti nella secrezione.
    • Mutazioni in geni relativi al processo secretorio permettono di caratterizzare il ruolo delle proteine coinvolte.
    • Mutazioni sec12 e sec17 interessano il trasporto di materiale tra il reticolo endoplasmatico e il Golgi, e portano rispettivamente ad accumulo nel reticolo endoplasmatico o nel citosol.

    siRNA

    • Piccoli RNA a doppio filamento che silenziamento l'espressione di specifici geni bersaglio.
    • Utilizzato per studiare il movimento della mannosidasi II (enzima sintetizzato nel reticolo endoplasmatico ruvido che si trasferisce nel Golgi).
    • Attraverso il siRNA si blocca la traslocazione di proteina nel Golgi, bloccando l’azione del gene.

    Organelli

    • Si tratta di compartimenti cellulari specializzati con specifiche funzioni, come il reticolo endoplasmatico e l'apparato del Golgi.
    • Hanno un ruolo nella proteina di folding e nell'assemblaggio delle proteine e nella modificazione post-traduzionali, nella secrezione, etc

    Reticolo Endoplasmatico

    • Sistema di membrane interconnesse suddiviso in RE rugoso e liscio.
    • Il RE rugoso è caratterizzato dall'adesione dei ribosomi e svolge un ruolo nella sintesi di proteine che saranno secrete o introdotte nelle membrane, come la sintesi proteica, la glicosilazione e la formazione dei legami disolfuro.
    • Il RE liscio non ha ribosomi aderenti, ed è coinvolto nella sintesi dei lipidi, nella detossificazione e nel metabolismo dei carboidrati.
    • Ciascuno dei due ha un'organizzazione strutturale diversa per svolgere le sue specifiche funzioni.

    Inserimento delle Proteine nelle Membrane del Reticolo Endoplasmatico

    • Meccanismo complesso che utilizza sequenze segnale per guidare le proteine nella localizzazione corretta.
    • Le sequenze segnale sono riconosciute da proteine di smistamento che le dirigono verso il reticolo endoplasmatico.
    • Il trasporto delle proteine attraverso la membrana avviene tramite un processo co-traduzionale.

    Trasporto nel Reticolo

    • Le proteine integrali di membrana utilizzano sequenze segnale per attraversare la membrana.
    • Esistono diversi tipi di topologia per le proteine di membrana, basata sul numero di volte che attraversano la membrana e l’orientamento dei segmenti.

    Modificazioni delle Proteine nel Reticolo Endoplasmatico

    • Le proteine subiscono modificazioni post-traduzionali cruciali, come la glicosilazione, la formazione di ponti disolfuro ed il ripiegamento corretto, per funzionare correttamente.
    • Il controllo di qualità assicura il corretto ripiegamento, rimuovendo le proteine mal ripiegate.
    • Questo processo è essenziale per mantenere la funzionalità e prevenire la formazione di aggregati tossici.

    Proteina Disolfuro Isomerasi (PDI)

    • Nel RER c'è una proteina che riarrangia i legami disolfuro nelle proteine.
    • Tale proteina corregge i legami disolfuro errati formati durante il ripiegamento delle proteine.

    Stress del Reticolo Endoplasmatico (ER stress)

    • Accumulo di proteine mal ripiegate che causa Stress.
    • I processi di Stress ER inducono numerosi meccanismi atti a contrastare l’accumulo di proteine mal ripiegate.

    Meccanismi di Risposta allo Stress ER

    • Molti meccanismi sono atti a controstare l'accumulo di proteine mal ripiegate, come l'inibizione della traduzione della proteina, l'attivazione di chaperon molecolari o l'apoptosi.
    • Alcuni di questi meccanismi sono mediati da proteine come PERK, IRE1α e ATF6.

    Conclusione

    • Le endomembrane funzionano come una rete interconnessa per il trasporto, la modificazione e il controllo delle proteine.
    • Il processo è un'operazione di importanza strategica perché le proteine che entrano nel percorso devono andare incontro a numerosi tipi di modificazione per poter acquisire la loro struttura tridimensionale definitiva.

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